Sifilizin morfolojisi. Treponema pallidum - sifilizin etken maddesi: mikrobiyoloji, antijenik özellikler, bağışıklık, sifiliz tanısı hakkında genel bilgi. Klamidya ve klamidya

Makalenin içeriği

Treponema pallidum

Morfoloji ve fizyoloji

T. pallidum, 8-12 tur halinde bükülmüş, protoplastik bir silindir olan spiral bir şekle sahiptir. 3 periplazmik flagella hücrenin uçlarından uzanır. Treponema pallidum anilin boyalarını iyi kabul etmediği için Romanovsky-Giemsa boyası ile boyanır. Ancak çoğu etkili yöntem karanlık alan veya faz kontrast mikroskobunda incelemektir. Mikroaerofil. Yapay besin ortamlarında yetişmez. T. pallidum, tavşan testis dokusunda yetiştirilir, burada iyi çoğalır ve özelliklerini tamamen korur, hayvanda orşite neden olur. Antijenler. T. pallidum'un antijenik yapısı karmaşıktır. Dış zar proteinleri, lipoproteinler ile ilişkilidir. İkincisi, insanlarda yaygın olan ve büyük çapta çapraz reaksiyona giren antijenlerdir. sığırlar. Frengi serodiyagnozu için Wassermann reaksiyonunda bir antijen olarak kullanılırlar.

Patojenite ve patogenez

Treponema pallidum'un virülans faktörleri arasında hücreden salındıktan sonra toksik özellikler sergileyen dış zar proteinleri ve LPS bulunur. Aynı zamanda, görünüşe göre, treponemanın bölünürken dokuların derinliklerine nüfuz eden ayrı parçalar oluşturma yeteneği de virülans faktörlerine atfedilebilir. Frengi patogenezinde üç aşama vardır. Birincil sifiliz ile birincil odağın oluşumu gözlenir - yerinde sert şans giriş kapısı enfeksiyonlar, ardından patojenin çoğaldığı ve biriktiği bölgesel lenf düğümlerine nüfuz eder. Birincil sifiliz yaklaşık 6 hafta sürer. İkinci aşama, deri döküntülerinin eşlik ettiği patojenin kana nüfuz etmesi ve dolaşımının eşlik ettiği enfeksiyonun genelleşmesi ile karakterize edilir. Tedavi edilmeyen hastalarda sekonder sifilizin süresi 1-2 yıl arasında değişmektedir. Üçüncü aşamada, iç organ ve dokularda lokalize olan bulaşıcı granülomlar (çürümeye yatkın diş etleri) tespit edilir. Bu periyot Tedavi edilmeyen hastalarda birkaç yıl devam eder ve merkezi sinir sisteminde hasarla (ilerleyici felç) sona erer veya omurilik(tabes dorsalis).

Bağışıklık

Frengi ile humoral ve hücresel bir bağışıklık tepkisi meydana gelir. Ortaya çıkan antikorların koruyucu özellikleri yoktur. Hücresel bağışıklık tepkisi patojenin sabitlenmesi ve granülom oluşumu ile ilişkilidir. Ancak treponemlerin vücuttan atılması gerçekleşmez. Aynı zamanda olumsuz çevre koşulları da duvarda lokalize olan treponema nedeniyle kist oluşumuna neden olur. kan damarları. Bunun hastalığın remisyona geçişini gösterdiğine inanılıyor. Kistlerle birlikte treponemler L formlarını oluşturur. Frengi ile, öldürülmüş bir treponem süspansiyonu ile alerjik bir cilt testi ile tespit edilebilen HRT oluşur. Üçüncül sifiliz döneminin tezahürünün HRT ile ilişkili olduğuna inanılmaktadır.

Ekoloji ve epidemiyoloji

Frengi tipik olarak antroponotik bir enfeksiyondur. Sadece doğada enfeksiyon rezervuarı olan insanlar hastalanır. Enfeksiyonun bulaşması cinsel temas yoluyla ve çok daha az sıklıkla iç çamaşırı ve diğer nesneler yoluyla gerçekleşir. Dış ortamda (hava) treponemler hızla ölür.

Frengi ve diğer treponematozlar

Frengi, insanlarda kronik bulaşıcı bir zührevi hastalıktır, döngüsel ilerleyici bir seyir gösterir, cildi, mukoza zarlarını, iç organları ve sinir sistemini etkiler. Hastalığın etken maddesi Treponema pallidum'dur.Frengi gelişiminin üç ana dönemi vardır, yöntemler laboratuvar teşhisi kendine has özellikleri olan. Hastalığın erken döneminde laboratuvar tanısı için materyal şanstan akıntıdır, noktasaldır. Lenf düğümleri, roseola, frengi vb. kazıntıları İkincil ve üçüncül dönemlerde kan serumu ve beyin omurilik sıvısı incelenir.Treponemlerin saf kültürlerinin geleneksel bakteriyolojik laboratuvarlarda izole edilmesi imkansız olduğundan, hastalığın birincil döneminde (nadiren daha sonra) bakteriyoskopik tanı yöntemi uygulanır. İkincil dönemden itibaren ağırlıklı olarak serolojik yöntemler kullanılmaktadır.

Bakteriyoskopik muayene

Patolojik materyali almadan önce, sifilitik ülser ilk önce yağ plakını ve kirletici mikroflorayı çıkarmak için pamuklu çubukla silinir. Daha sonra şansın alt kısmı bir neşter veya metal bir spatula ile tahriş edilir veya yara eksüdasını serbest bırakmak için ülser lastik bir eldiven içindeki parmaklarla yanlardan kuvvetlice sıkılır. Az miktarda berrak sıvı varsa, % 0,85'lik bir damla sodyum klorür çözeltisine eklenebilir. Şansın dibinden malzeme almak mümkün değilse (fimozis, ülserin skarlaşması vb.), bölgesel lenf düğümlerinin delinmesi yapılır, ince bir cam üzerine ülserden veya noktadan bir damla sıvı uygulanır. slayt (1,1-1,2 mm), bir lamel ile kaplanmış ve karanlık görüş alanında (daha güzel!) veya bir faz kontrastı veya anoptral mikroskop kullanılarak incelenmiştir. Karanlık bir görüş alanında soluk treponema, hafif parlak bir görünüme sahiptir. dik, düzgün, yuvarlak birincil buklelere sahip ince, narin spiral. Hareketler düzgün olduğundan belirli bir açıyla bükülür. Ancak bunun özellikle karakteristik özelliği sarkaç benzeri salınımlardır. Sifilizin etken maddesi, daha kalın, daha pürüzlü, düzensiz büyük buklelere sahip ve aktif düzensiz hareketlere sahip olan ancak bükülmeyen Treponema refringens'ten (dış cinsel organı kolonize eden) ayırt edilmelidir. Fusosp-iroketöz simbiyozun treponemaları ince bir desen, hafif bukleler ve düzensiz hareketlerle ayırt edilir.Oral sifiliz tanısı koyarken soluk treponema, diş treponemlerinden, özellikle T. dentium'dan ve ayrıca T. buccalis'ten ayırt edilmelidir. Bunlardan ilkini genellikle frengiden ayırmak zordur. Ancak daha kısadır, 4-8 keskin kıvrımı vardır ve sarkaç benzeri bir hareketi yoktur. T. buccalis daha kalındır, kaba başlangıç kıvrımlarına ve düzensiz hareketlere sahiptir.Herhangi bir şüphe varsa, soluk olanın aksine tüm saprofitik treponemlerin anilin boyalarıyla iyi boyandığı dikkate alınmalıdır. Lenf düğümlerine nüfuz etmezler, bu nedenle punktatların incelenmesi büyük tanısal değere sahiptir. Lenf düğümlerinin noktalarında tipik treponemlerin tanımlanması, şüphesiz sifiliz teşhisini doğrular.Bu nedenle, preslenmiş damlaların karanlık alan incelemesi, sifilizin etken maddesini tanımlamak için en iyi yöntemdir. Avantajları, malzemenin hızlı bir şekilde incelenmesi ve treponemlerin canlı durumdaki morfolojisinin en karakteristik olmasıdır. Burri yöntemiyle yapılan mürekkep lekeleri artık kullanılmamaktadır.Karanlık görüş alanında araştırma yapılması mümkün değilse çeşitli boyama yöntemleri kullanılabilir. Treponema pallidum anilin boyalarını iyi kabul etmez. Önerilen birçok boyama yönteminden en iyi sonuçlar, Romanoveki-Giemsa boyama kullanıldığında elde edilir. Hazırlanan smearlar metil alkol veya Nikiforov karışımı ile fikse edilir. Romanovsky-Giemsa boyası preparasyona döküldüğünde net sonuçlar elde edilir. Bunu yapmak için, bir Petri kabına kibrit parçaları yerleştirilir, üzerlerine bir cam slayt yerleştirilir, smear aşağı doğru sürülür ve smear ıslanıncaya kadar boya dökülür. Boyama süresi iki katına çıkar. Mikroskopi altında soluk treponemaların yumuşak bir rengi vardır. pembe renk ve diğer treponema türleri mavi veya maviye boyanmıştır. mor Morozov'un gümüşleme yöntemini de kullanabilirsiniz. Treponemalar morfolojik özelliklerini tamamen korurlar ve mikroskop altında kahverengi veya neredeyse siyah görünürler. Ancak gümüş kaplamalı preparatlar uzun süre saklanmaz. Son zamanlarda treponemleri boyama yöntemleri nadiren kullanılmaktadır.Frenginin kemoterapi ile tedavisine başlanırsa, karanlık bir görüş alanı yardımıyla bile patolojik materyallerdeki patojeni tanımlamak neredeyse imkansızdır. Negatif test alınırsa tekrarlanmalıdır.

Sifilizin serolojik tanısı

Serolojik reaksiyonları gerçekleştirirken, Ukrayna'da birleştirilmiş aşağıdaki araştırma yöntemleri artık kullanılmaktadır: kompleman fiksasyon reaksiyonu (CFR), immünofloresan (RIF), treponemal immobilizasyon (PIT), mikropresipitasyon reaksiyonu (MPR) ve enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA) Uzun yıllar boyunca ana ve en yaygın reaksiyon, tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu veya Wassermann reaksiyonu (RW) idi. Bunu gerçekleştirmek için, enfeksiyon durumunda sifiliz ve beyin omurilik sıvısı olan bir hastanın kan serumunu kullanın. gergin sistem Wasserman reaksiyonunu gerçekleştirme tekniği RSC gerçekleştirme tekniğinden farklı değildir. Tek fark, RO için sadece spesifik treponemal değil, aynı zamanda spesifik olmayan kardiyolipin antijeninin de kullanılmasıdır.l Ulnar venden 5-10 ml kan alınması, aç karnına veya yemekten en geç 6 saat sonra gerçekleştirilir. Hastalığı olan hastalardan kan alınmamalıdır. yükselmiş sıcaklık Alkol ve yağlı yiyecekler içtikten sonra, hamile kadınlarda doğumdan 10 gün önce ve doğum yapan kadınlarda. Kandan ekstrakte edilen serum, kendi komplemanını etkisiz hale getirmek için 56°C sıcaklıkta 30 dakika ısıtılır. RO iki antijenle yerleştirilmelidir: spesifik ve spesifik olmayan Ultrason spesifik treponemal antijen, test tüplerinde yetiştirilen ve ultrasona maruz bırakılan Treponema pallidum (Reiter suşu) kültürlerinden hazırlanır. Dondurularak kurutulmuş toz formunda üretilir. Spesifik olmayan kardiyolipin antijeni, sığır kalbinden lipitlerin alkolle ekstraksiyonu ve 2 ml'lik ampullerde paketlenmiş balast karışımlarından saflaştırılmasıyla hazırlanır. Antijeni PO'ya eklemek için bu talimatlara göre titre edilir. RV'nin evrelendirilmesinden hemen önce, tamamlayıcı ve hemolitik serumun titrasyonu, RSC'deki ile aynı şemaya göre gerçekleştirilir. Wasserman reaksiyonu hem niteliksel hem de niceliksel yöntemler kullanılarak gerçekleştirilir. Her zamanki şemaya göre iki antijenli üç test tüpünde niteliksel bir reaksiyon gerçekleştirilir.Reaksiyonun sonuçları 4 artı sistemine göre değerlendirilir: pozitif reaksiyon - hemolizde tam veya önemli bir gecikme olduğunda (4 +, 3+); zayıf pozitif reaksiyon - hemolizin kısmi gecikmesi (2 +); şüpheli reaksiyon - hemolizde hafif gecikme (1 +). Tam hemoliz durumunda RO negatif olarak kabul edilir.Pozitif niteliksel reaksiyon veren her serum, 1:10'dan 1:640'a kadar seri seyreltme ile kantitatif bir yöntem kullanılarak incelenmelidir.Test serumunun titresi (reagin titresi) ), hemolizde tam (4 +) veya önemli (3 +) bir gecikmeye neden olan maksimum seyreltme olarak kabul edilir. RO evrelemesinin kantitatif yöntemi, sifiliz tedavisinin etkinliğini değerlendirmek için önemlidir. Reajin titresinde hızlı bir azalma tedavinin başarılı olduğunu gösterir. Serum titresi uzun süre düşmezse, bu, kullanılan ilaçların etkinliğinin eksikliğini ve tedavi taktiklerini değiştirme ihtiyacını gösterir.Seronegatif primer sifiliz veya latent, tersiyer veya konjenital pilozis durumunda, yapılması önerilir. aynı şemaya göre soğukta Wasserman testi. Nörosifilizden şüpheleniliyorsa RO yapılır. Beyin omurilik sıvısı kendi tamamlayıcısını içermediğinden devre dışı bırakılır. Seyreltilmemiş likör, 1:2 ve 1:5 seyreltmelerde reaksiyona dahil edilir.Wasserman reaksiyonu, şansın ortaya çıkmasından 2-3 hafta sonra pozitif hale gelir. İkincil sifilizde, vakaların% 100'ünde, üçüncül sifilizde -% 75'inde pozitiftir.Ayrıca, serolojik reaksiyonlar kompleksinde (CSR), tarama testi olarak kan plazması veya inaktif serumla bir mikropresipitasyon reaksiyonu kullanılır.

Yağış mikro reaksiyonu

Yağış mikro reaksiyonu kardiyolipin antijeni ile gerçekleştirilir. Reaksiyonun prensibi, sifilizli bir hastanın plazmasına veya serumuna bir kardiyolipin antijeni emülsiyonu eklendiğinde, pul şeklinde çöken bir çökeltinin (antijen-antikor kompleksi) oluşmasıdır. beyaz. Aşağıdaki teknik kullanılır: Plakanın oyuğuna üç damla plazma (veya inaktif serum) pipetlenir, ardından bir damla standart kardiyolipin antijen emülsiyonu eklenir. Reaksiyon bileşenleri, plakanın 5 dakika boyunca çalkalanmasıyla karıştırılır, ardından üç damla %0,9'luk sodyum klorür çözeltisi eklenir ve 5 dakika daha oda sıcaklığında bırakılır. Zayıf pozitif kan serumu ile zorunlu kontrol. Sonuçlar yapay bir ışık kaynağı üzerinde çıplak gözle değerlendirilir. Delikte büyük pullar göründüğünde reaksiyon pozitif (4+, 3+), orta ve küçük pullar ise zayıf pozitif (2+, 1+) olarak kabul edilir. Sonuç negatifse çökelti oluşmaz.Çökeltinin mikro reaksiyonu, çöken antikorların titresini belirlemek ve bu temelde tedavinin etkinliğini değerlendirmek için kantitatif bir yöntem kullanılarak da gerçekleştirilebilir. Plazma ile seruma göre daha yüksek MRP titreleri elde edilir. Yurt dışında, MRP'nin hasta serumu ile analoğu VDRL'dir (Zührevi hastalık araştırma laboratuvarı) ve plazma ile - RPR'dir (Hızlı plazma reaktifi).

İmmünofloresan reaksiyonu (RIF)

Sifilizin serolojik tanısı için yaygın olarak kullanılan spesifik reaksiyon grubu, dolaylı immünofloresan reaksiyonunu içerir. Bir antijen olarak, enfeksiyondan sonraki 7. günde tavşan testislerinin parankiminden elde edilen patojenik soluk Treponema suşu Nichols'un bir süspansiyonunu kullanır. Reaksiyon iki modifikasyonda gerçekleştirilir: RIF-ABS ve RIF-200. İlk seçenekte, bir antikor sorbenti (sonikat) kullanılır - CSC için ultrasonik treponemal antijen. Bakteriyel preparatların üretimi için Kaunas işletmesi tarafından üretilmektedir (Litvanya). RIF-200 seçeneğinde, grup antitreponemal antikorların etkisini ortadan kaldırmak amacıyla hastanın serumu 200 kat seyreltilir.RIF-ABS, ince, iyi yağı alınmış cam slaytlar üzerinde gerçekleştirilir. Camın arkasında, bir cam kesici 0,7 cm çapında 10 daire işaretler, dairenin içinde cama 50-60 adet olacak şekilde bir antijen - soluk treponema süspansiyonu - uygulanır. görüş alanında. Lekeler havada kurutulur, alev üzerinde ve asetonda 10 dakika süreyle sabitlenir. Ayrı bir test tüpüne 0,2 ml sorbent (sonikasyon) ve 0,5 ml hastanın kan serumunu ekleyin ve iyice karıştırın. Karışım smearın (antijen) üzerine eşit şekilde kaplanacak şekilde uygulanır ve 3–7 °C'deki nemli bir odada 30 dakika bekletilir (faz II reaksiyonu). Bundan sonra smear fosfat tamponu ile yıkanır, kurutulur ve üzerine 30 dakika boyunca anti-shobulin floresan serum uygulanır, 37 ° C'de nemli bir odaya yerleştirilir (faz II). Preparat tekrar fosfat tamponu ile yıkanır, kurutulur ve floresan mikroskop altında incelenir.Pozitif bir reaksiyonla soluk treponema altın yeşili bir ışık yayar, negatif bir reaksiyonla parlamazlar.RIF-200'ü kurma tekniği RIF-ABS ile aynı olup, yalnızca hastanın kan serumu fosfat tamponu ile 200 kez önceden seyreltilir. Sinir sistemi sifilizli bir hastanın beyin omurilik sıvısı ile immünofloresan reaksiyonu gerçekleştirirken, RIF-c ve RIF-10 kullanılır, yani. Likör reaksiyona etkisiz hale getirilmeden ve seyreltilmiş olarak veya 1:10 oranında seyreltilmiş olarak dahil edilir.

Treponema pallidum immobilizasyon reaksiyonu (PIT)

Soluk treponemanın (PIT) immobilizasyon reaksiyonu, anaerobiyoz koşulları altında hastanın serumundan ve komplemanından immobilize edici antitreponemal antikorların varlığında hareketlilik kaybı olgusuna dayanmaktadır. Reaksiyonda antijen olarak Nichols laboratuvar suşu ile enfekte olmuş bir tavşanın testis dokusundan elde edilen soluk treponema süspansiyonu kullanılır. Süspansiyon, görüş alanında 10-15 spiroket olacak şekilde steril %0,85 sodyum klorür çözeltisi ile seyreltilir.Reaksiyonu gerçekleştirmek için 0,05 ml hastanın kan serumu, 0,35 ml antijen ve 0,15 ml kompleman eklenir. Steril bir test tüpünde karıştırıldı. Deneye serum, antijen ve kompleman kontrolleri eşlik eder. Test tüpleri anaerostat içerisine yerleştirilir, anatomik koşullar oluşturularak 35°C sıcaklıkta 18-20 saat termostatta tutulur. Daha sonra her test tüpünden preslenmiş damlalar hazırlanır, en az 25 treponem sayılır ve kaç adet Bunlardan kaçının hareketli olduğu ve kaç tanesinin not edildiği belirtiliyor. Soluk treponemanın spesifik immobilizasyon yüzdesi şu formül kullanılarak hesaplanır: x = (A-B) / B * 100, burada X, immobilizasyon yüzdesidir, A, kontrol tüpündeki mobil treponem sayısıdır, B, mobil sayısıdır Test tüpündeki treponemler. Hareketsizlik yüzdesi 50 veya daha fazla olduğunda reaksiyon pozitif olarak kabul edilir, zayıf pozitif - 30'dan 50'ye, şüpheli - 20'den 30'a ve negatif - 0'dan 20'ye. Pratik laboratuvarlarda M.M. için daha basit melanger yöntemi PIT'i kullanırlar. Ovchinnikov. Anaerobik deney koşulları, reaksiyona giren karışımın (serum, antijen, kompleman) her iki ucu da kauçuk bir halka ile kapatılmış bir melanjör içerisine yerleştirilmesiyle oluşturulur. Melanger tekniği, anaerobiyoz oluşturmak için karmaşık ekipman ve aparatlar olmadan yapmanıza izin verir, ancak klasik mikroanaerostat tekniğiyle elde edilemeyen sonuçlar verir Treponema immobilizasyon reaksiyonları ve immünofloresan, sifilizin serolojik tanısında en spesifik olarak kabul edilir. Yine de, PIT'in özgüllüğüne rağmen, uygulanmasının zahmetli olması nedeniyle yaygın uygulamada kullanılması önerilmemektedir.

Enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA)

Enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA), hem kadriolipin antijeni (spesifik olmayan, seçim reaksiyonu) hem de treponemal antijeni (spesifik reaksiyon) ile gerçekleştirilir ve bu da sifiliz teşhisini doğrular.Dolaylı ELISA yönteminin prensibi, antijenin Tabletin kuyucuklarına katı fazda test serumu eklenir. Treponemlere karşı antikorlar içeriyorsa, bir antijen-antikor kompleksi oluşur (faz II). Bağlanmamış spesifik olmayan antikorların yıkanmasından sonra, bir enzimle (çoğunlukla yaban turpu peroksidazı) konjuge edilmiş antiglobulin serumu kuyucuklara eklenir. Konjugat, antijen-antikor kompleksine sıkı bir şekilde bağlanır (faz II).Bağlanmamış konjugat yıkandıktan sonra, OPD boyama substratı - ortofenilendiamin (faz III) kuyucuklara eklenir. Peroksidaz reaksiyonu sülfürik asit eklenerek durdurulur. Kontrol için, pozitif ve açıkça negatif serumlarla aynı numuneler kullanılır.Analizin sonuçları, çift dalga modunda (492 nm ve 620 nm) optik yoğunluğu belirleyen bir fotometre kullanılarak kaydedilir. Bir enzim antikor reaksiyonu oluşturmak için, bir fotometreye ek olarak, polipropilen uçlu bir ve sekiz kanallı otomatik pipetlere ve ilgili teşhis test sistemleri setlerine ihtiyacınız vardır.ELISA yöntemi, frenginin serolojik tanısında yaygın olarak kullanılır. Hastalıkların tespitinde de aynı derecede etkilidir. kuluçka süresi(enfeksiyondan 1-2 hafta sonra), hastalığın klinik belirtileri ve gizli formları ile birlikte. ELISA, özellikle kan transfüzyon istasyonlarında popülasyonun tarama muayenelerinde sıklıkla kullanılır.Laboratuvar uygulamasında bazen immün adezyon reaksiyonu (IAR) ve dolaylı hemaglütinasyon reaksiyonu (IRHA) da kullanılır. Bunlardan ilki, Nichols suşunun patojenik testis treponemlerinin, kompleman ve insan kırmızı kan hücreleri varlığında hastanın serumu ile karıştırıldığında kırmızı kan hücrelerinin yüzeyine yapışması gerçeğine dayanmaktadır. RNGA, metodolojik basitliği nedeniyle sifiliz teşhisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Enfeksiyondan sonraki üç hafta içinde pozitifleşir. Olumlu sonuç reaksiyonlar iyileşmeden sonra yıllarca devam eder. Bu reaksiyonun yurtdışındaki bir benzeri TRHA'dır (Treponema pallidum hemoaglütinasyon). Primer sifiliz durumunda, şankroid akıntısı veya noktalı lenf düğümleri treponema pallidum açısından incelenir. İkincil sifiliz durumunda malzeme derideki aşınmış papüllerin yüzeyinden, mukozalardan, çatlaklardan vb. alınır. Malzemeyi çeşitli kirleticilerden temizlemek için almadan önce lezyonların (erezyonlar, ülserler, çatlaklar) yüzeyi ) izotonik bir sodyum klorür çözeltisi ile nemlendirilmiş veya aynı çözelti ile losyonlar reçete edilen steril bir pamuklu gazlı bezle iyice silinmelidir. Temizlenen yüzey kuru bir bezle kurutulur ve çevre bölgeleri hafifçe tahriş etmek için bir platin halka veya spatula kullanılır, aynı zamanda elemanın tabanını doku sıvısı (serum) görünene kadar lastik bir eldiven içindeki parmaklarla hafifçe sıkılır, araştırma hazırlığının yapıldığı yer. Treponema pallidumlar lenfatik kılcal damarların lümenlerinde, lenfatik ve kan damarlarının etrafındaki doku yarıklarında bulunduğundan, doku sıvısının elde edilmesi sifiliz teşhisi için önemlidir.

Bölgesel lenf düğümlerinin delinmesi

Lenf düğümlerinin üzerindeki cilt %96 alkol ve %3-5 oranında tedavi edilir. alkol solüsyonu Yoda. Daha sonra lenf düğümünü sabitlemek için sol elin 1. ve 2. parmaklarını kullanın. Sağ el Lenf düğümünün uzunlamasına eksenine paralel olarak enjekte edilen birkaç damla izotonik sodyum klorür çözeltisi içeren steril bir şırınga alın. İğne, düğüm kapsülünün karşı duvarına farklı yönlerde itilir ve şırınganın içeriği yavaşça enjekte edilir. Sol elin parmakları kullanılarak lenf bezine hafifçe masaj yapılır. İğne yavaşça geri çekildiğinde, şırınga pistonu da aynı anda dışarı çekilerek lenf düğümünün içeriği aspire edilir. Malzeme bir cam slayta uygulanır (malzeme miktarı azsa bir damla izotonik sodyum klorür çözeltisi eklenir) ve bir lamel ile kapatılır. Yerli ilacın çalışması, karanlık alan yoğunlaştırıcılı (40, 7x, 10x veya 15x objektif) bir ışık optik mikroskobu kullanılarak karanlık bir görüş alanında gerçekleştirilir. Treponema pallidum renkli preparatlarda da bulunabilir. Romanovsky-Giemsa'ya göre boyandığında soluk treponema pembeye boyanır, Fontan ve Morozov'a göre kahverengi (siyah), Burri yöntemine göre lekesiz treponema koyu bir arka planda ortaya çıkar.

Serolojik tanı

Frengi teşhisinde, tedavinin etkinliğinin değerlendirilmesinde, tedavi kriterinin oluşturulmasında, latent, dirençli formların belirlenmesinde standart (klasik) ve spesifik serolojik reaksiyonlar büyük önem taşımaktadır. Standart veya klasik serolojik reaksiyonlar (SSR) şunları içerir:

Wasserman reaksiyonu (WR),
Kahn ve Sachs-Vitebsky'nin (sitokolik) tortul reaksiyonları,
cam üzerinde reaksiyon (ekspres yöntem),

spesifik olarak:

treponema pallidum immobilizasyon reaksiyonu (treponema pallidum reaksiyonu),
immünfloresan reaksiyonu (RIF).

Wasserman reaksiyonu (WR)

- 1906 yılında A. Wasserman tarafından A. Neisser ve C. Bruck ile birlikte geliştirildi. Wasserman reaksiyonu kompleman fiksasyonu fenomenine (Bordet-Gengou reaksiyonu) dayanır ve anti-lipid antikorların (reaginler) belirlenmesine olanak sağlar. Modern kavramlara göre, Wasserman reaksiyonu, Treponema pallidum'a değil, makroorganizmanın lipitlerine karşı antikorları tespit eder ve reaksiyon, makroorganizma dokularının Treponema pallidum tarafından bir lipoprotein kompleksi oluşumu ile denatürasyonunun neden olduğu bir otoimmün süreci ortaya çıkarır ( lipitlerin (haptens) belirleyici olduğu konjugat.

RV genellikle iki veya üç antijenle teşhis edilir. En sık kullanılanlar oldukça hassas kardiyolipin antijeni (kolesterol ve lesitin ile zenginleştirilmiş sığır kalbi ekstraktı) ve treponemal antijendir (anatojenik kültüre edilmiş treponem pallidumun sononik süspansiyonu). Hastanın serum reaktifleriyle birlikte bu antijenler, komplemanı adsorbe edebilen ve bağlayabilen bir bağışıklık kompleksi oluşturur. Oluşturulan kompleksi (reaginler + antijen + kompleman) görsel olarak belirlemek için, hemolitik sistem (koyun eritrositlerinin hemolitik serum ile karışımı) bir gösterge olarak kullanılır. Kompleman reaksiyonun 1. fazında bağlanırsa (reaginler + antijen + kompleman), hemoliz meydana gelmez - kırmızı kan hücreleri kolayca fark edilebilir bir çökelti halinde çökelir (PB pozitif). Test serumunda reaktiflerin bulunmaması nedeniyle faz 1'de kompleman bağlanmazsa, hemolitik sistem tarafından kullanılacak ve hemoliz meydana gelecektir (RT negatif). RV evrelemesinde hemolizin ciddiyet derecesi aşağıdaki avantajlarla değerlendirilir: tam yokluk hemoliz ++++ veya 4+ (RH keskin pozitif); hemoliz zar zor başlamış +++ veya 3+ (RV pozitif); belirgin hemoliz ++ veya 2+ (RV zayıf pozitif); hemolizin belirsiz tablosu ± (RV şüpheli); tam hemoliz - (Wassermann reaksiyonu negatif).

Ayrıca Nitel değerlendirme RV'nin çeşitli serum seyreltileriyle (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320) kantitatif bir formülasyonu vardır. Reajin titresi, yine de oldukça pozitif (4+) sonuç veren maksimum seyreltme ile belirlenir. RV'nin kantitatif evrelemesi, sifilitik enfeksiyonun bazı klinik formlarının teşhisinde ve tedavinin etkinliğinin izlenmesinde önemlidir. Şu anda Wasserman reaksiyonu iki antijen (kardiyolipin ve treponemal sesli Reiter suşu) ile gerçekleştirilmektedir. Kural olarak RV, hastaların %25-60'ında enfeksiyondan 5-6 hafta sonra, 7-8 haftada - %75-96'da, 9-19 haftada - %100'de pozitif hale gelir. son yıllar bazen daha erken veya daha geç. Aynı zamanda genel döküntülerde (sekonder taze sifiliz) reagin titresi giderek artar ve maksimum değere (1:160-1:320 ve üzeri) ulaşır. RV pozitif olduğunda primer seropozitif sifiliz tanısı konur.
İkincil taze ve sekonder tekrarlayan sifilizde RV hastaların %100'ünde pozitiftir, ancak bağışıklığı zayıflamış tükenmiş hastalarda negatif bir sonuç gözlemlenebilir. Daha sonra reagin titresi giderek azalır ve sekonder tekrarlayan sifiliz durumunda genellikle 1:80-1:120'yi aşmaz.
Üçüncül sifiliz için Hastaların %65-70'inde RV pozitiftir ve genellikle düşük bir reagin titresi gözlenir (1:20-1:40). Şu tarihte: sonraki formlar frengi (sifiliz) iç organlar, sinir sistemi) pozitif RV vakaların %50-80'inde görülür. Reagin titresi 1:5 ile 1:320 arasında değişir.
Gizli frengi için Hastaların %100'ünde pozitif RV gözlenir. Reagin titresi 1:80 ila 1:640 arasındadır ve geç latent sifilizde 1:10 ila 1:20 arasındadır. Tedavi sırasında reaktif titresinde hızlı bir azalma (tamamen olumsuzluğa kadar) tedavinin etkinliğini gösterir.

Wasserman reaksiyonunun dezavantajları- yetersiz hassasiyet (içinde İlk aşama birincil sifiliz negatif). Geçmişte antibiyotik tedavisi görmüş olan hastaların 1/3'ünde, deri ve mukoza lezyonları, osteoartiküler aparat, iç organlar, merkezi sinir sistemi lezyonları olan tersiyer aktif sifiliz hastalarında ve geç konjenital sifiliz hastalarında da negatiftir. frengi.
Spesifiklik eksikliği- Wasserman reaksiyonu daha önce frengi geçirmemiş ve frengiye yakalanmamış kişilerde pozitif olabilir. Özellikle sistemik lupus eritematozus, cüzzam, sıtma, malign neoplazmlar, karaciğer hasarı, yaygın miyokard enfarktüsü ve diğer hastalıklardan muzdarip hastalarda ve bazen tamamen sağlıklı kişilerde yanlış pozitif (spesifik olmayan) RV sonuçları gözlenir.
Kısa süreli yanlış pozitif Wasserman reaksiyonu tespit edildi bazı kadınlarda doğumdan önce veya sonra, uyuşturucu kullananlarda, anesteziden sonra veya alkol içenlerde. Kural olarak, yanlış pozitif RV, genellikle düşük bir reaktif titresi (1:5-1:20), pozitif (3+) veya zayıf pozitif (2+) ile zayıf bir şekilde ifade edilir. Kitlesel serolojik araştırmalar sırasında yanlış pozitif sonuçların sıklığı %0,1-0,15'tir. Yetersiz duyarlılığın üstesinden gelmek için soğuk testi (Kolyar reaksiyonu) kullanırlar ve aynı zamanda diğer serolojik reaksiyonlarla birlikte uygulanırlar.

Kahn ve Sachs-Vitebsky'nin tortul reaksiyonları

Wasserman reaksiyonu iki reaksiyonla birlikte kullanılır. tortul reaksiyonlar (Kahn ve Sachs-Vitebsky), aşamalandırıldığında daha konsantre antijenler hazırlanır. Ekspres yöntem (cam üzerinde mikro reaksiyon) - lipit reaksiyonlarını ifade eder ve çökelme reaksiyonuna dayanır. Özel bir cam plakanın kuyucuklarına 1 damlası 2-3 damla test kan serumu ile karıştırılarak spesifik bir kardiyolipin antijeni yerleştirilir.
Avantaj- yanıt alma hızı (30-40 dakika içinde). Sonuçlar biriken çökelti miktarına ve pulların boyutuna göre değerlendirilir. Etkileyicilik, KSS - 4+, 3+, 2+ ve negatif olarak tanımlanır. Yanlış pozitif sonuçların RV'ye göre daha sık gözlemlendiğine dikkat edilmelidir. Kural olarak, ekspres yöntem, sifiliz için toplu muayenelerde, klinik teşhis laboratuvarlarında, somatik bölümlerde ve hastanelerde yapılan muayenelerde kullanılır. Ekspres yöntemin sonuçlarına göre, sifiliz tanısı yasaktır; hamile kadınlarda, donörlerde ve tedavi sonrası kontrolde kullanımı hariç tutulmuştur.

Treponema pallidum immobilizasyon reaksiyonu (TPI)

Treponema pallidum immobilizasyon reaksiyonu (TPI)- 1949'da R. W. Nelson ve M. Mayer tarafından önerildi. Frengi için en spesifik tanı testidir. Ancak üretimin karmaşıklığı ve yüksek maliyeti kullanımını sınırlamaktadır. Hastaların kan serumunda, tamamlayıcı varlığında Treponema pallidum'un hareketsizliğine yol açan videoya özgü antikorlar (immobilisinler) belirlenir. Antijen, sifiliz ile enfekte olmuş tavşanlardan izole edilen canlı patojenik Treponema pallidum'dur. Bir mikroskop kullanılarak, hareketlilik kaybı (hareketsizleştirilmiş) Treponema pallidum sayılır ve RIBT sonuçları değerlendirilir: Treponema pallidum'un %51'den %100'e immobilizasyonu pozitiftir; %31'den %50'ye kadar - zayıf pozitif; %21'den %30'a kadar - şüpheli; %0'dan %20'ye - negatif.
RIBT ne zaman önemlidir? ayırıcı tanı Yanlış pozitif serolojik reaksiyonları sifilizin neden olduğu reaksiyonlardan ayırt etmek. Geç RV, RIF'den pozitif olur ve dolayısıyla frenginin bulaşıcı formlarını teşhis etmek için kullanılmaz Frenginin sekonder döneminde hastaların %85-100'ünde pozitif olmasına rağmen.
İç organlara, kas-iskelet sistemine ve sinir sistemine zarar veren sifilizin üçüncül döneminde, vakaların %98-100'ünde RIBT pozitiftir ( RV sıklıkla negatiftir).
Test serumu, Treponema pallidum'un spesifik olmayan immobilizasyonuna neden olan treponemosidal ilaçlar (penisilin, tetrasiklin, makrolitler vb.) içeriyorsa RIBT'nin yanlış pozitif olabileceği unutulmamalıdır. Bu amaçla kan, antibiyotik ve diğer ilaçların alınmasının bitiminden en geç 2 hafta sonra RIBT açısından test edilir.
RIBT, RIF gibi, tedavi süreci boyunca yavaş yavaş negatifleştirilir, dolayısıyla tedavi süreci boyunca kontrol olarak kullanılmaz.

İmmünofloresan reaksiyonu (RIF)

İmmünofloresan reaksiyonu (RIF)- 1954 yılında A.Coons tarafından geliştirilmiş ve ilk kez 1957 yılında Deacon, Falcone, Harris tarafından sifilitik enfeksiyonun tanısında kullanılmıştır. RIF, floresan antikorların belirlenmesi için dolaylı bir yönteme dayanmaktadır. Üretim antijeni, üzerine test serumunun uygulandığı cam slaytlara sabitlenmiş doku patojeni Treponema pallidum'dur. Test serumu, IgM ve IgG ile ilgili anti-treponemal antikorlar içeriyorsa, bunlar, anti-tür ("anti-insan") floresan serumu kullanılarak bir floresan mikroskobunda tespit edilen antijen - treponema'ya güçlü bir şekilde bağlanır.
RIF sonuçları preparattaki soluk treponemanın parıltısının yoğunluğu (sarı-yeşil parıltı) dikkate alınır. Serumda antitreponemal antikorların yokluğunda treponema pallidum tespit edilmez. Antikorların varlığında, derecesi artılarla ifade edilen soluk bir treponema parıltısı tespit edilir: 0 ve 1+ - negatif reaksiyon; 2+'dan 4+'ya - pozitif.
RIF, grup treponemal reaksiyonlarını ifade eder ve test serumunun (RIF-10 ve RIF-200) 10 ve 200 kat seyreltilmesiyle uygulanır. RIF-10'un daha duyarlı olduğu kabul edilir, ancak spesifik olmayan pozitif sonuçlar genellikle RIF-200'e göre elde edilir (daha yüksek özgüllüğe sahiptir). Genellikle, RIF, RV'den daha erken pozitifleşir- Primer seronegatif sifilizde hastaların %80'inde, sifilizin sekonder döneminde %100'ünde pozitif, latent sifilizde her zaman pozitif ve geç formlarda ve konjenital sifilizde vakaların %95-100'ünde pozitif.
RIF'in özgüllüğü test serumunun grup antikorlarını (RIF - abs) bağlayan sorbent-ultrasonik treponemal antijen ile ön işleminden sonra artar.
RIBT ve RIF için endikasyonlar- teşhis gizli frengi Pozitif RV'ye dayalı olarak sifilitik enfeksiyon şüphesi durumunda lipit reaksiyonları kompleksinin özgüllüğünü doğrulamak için. Pozitif RIBT ve RIF gizli frenginin kanıtıdır. Çeşitli hastalıklarda (sistemik lupus eritematozus, malign neoplazmlar vb.) ve RIBT ve RIF'nin tekrarlanan sonuçları negatifse, bu RV'nin spesifik olmayan doğasını gösterir. Hastalarda negatif RV varsa, iç organların, kas-iskelet sisteminin, sinir sisteminin geç sifilitik lezyonlarından şüpheleniliyor. Primer seronegatif sifiliz şüphesi, erozyon (ülser) yüzeyinden akıntı ile ilgili tekrarlanan çalışmaları olan hastalarda, genişlemiş bölgesel lenf düğümlerinden delinme, treponema pallidum tespit edilmediğinde - bu durumda sadece RIF - 10 verilir.
Negatif RV'li kişileri incelerken Frengili hastalarla uzun süreli cinsel ve ev içi teması olan kişiler, bu hastaların yakın geçmişte RV negatifliğine neden olan anti-sifilitik ilaçlarla tedavi edilmiş olma ihtimali göz önünde bulundurulduğunda. Enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA - enzime bağlı immünosorbent tahlili) - E. Engvall ve diğerleri, S. Avrames (1971) tarafından geliştirilen yöntem. İşin özü, katı fazlı bir taşıyıcının yüzeyine emilen sifilitik bir antijenin, incelenen kan serumundaki bir antikorla birleştirilmesinden ve enzim etiketli anti-tür immün kan serumu kullanılarak spesifik bir antijen-antikor kompleksinin tanımlanmasından oluşur. Bu, konjugata dahil olan enzimin etkisi altında substratın rengindeki değişimin derecesine göre ELISA sonuçlarını görsel olarak değerlendirmenize olanak tanır. Bileşenlerin yetersiz seyreltilmesi, sıcaklık ve zaman koşullarının ihlali, çözeltilerin pH'ının tutarsızlığı, laboratuvar cam malzemelerinin kirlenmesi ve besiyerinin yıkanması için yanlış tekniğin bir sonucu olarak güvenilmez ELISA sonuçları ortaya çıkabilir.

Pasif hemaglutinasyon reaksiyonu (RPHA)

T.Rathlev (1965,1967), T.Tomizawa (1966) tarafından sifiliz için tanısal bir test olarak önerilmiştir. Reaksiyonun makromodifikasyonuna TRHA, mikromodifikasyonuna MNA-TR, otomatik versiyonuna AMNA-TR, kırmızı kan hücreleri yerine poliüre makrokapsüllerle reaksiyonuna ise MSA-TR adı verilmektedir. RPGA'nın duyarlılığı ve özgüllüğü RIBT, RIF'ye benzer, ancak RPGA, RIF-ab'lere kıyasla sifilizin erken formlarında daha az duyarlılığa ve daha sonraki formlar olan konjenital sifilizde daha yüksek duyarlılığa sahiptir. RPGA niteliksel ve niceliksel versiyonlarda sunulur.

Serolojik testler için kan alma tekniği

RV, RIF, RIBT'yi incelemek için ulnar damardan aç karnına veya yemekten en geç 4 saat sonra steril bir şırınga veya bir iğne (yerçekimi ile) kullanılarak kan alınır. Toplama yerinde cilde %70 alkol ile ön işlem uygulanır. Şırınga ve iğne izotonik sodyum klorür çözeltisiyle yıkanmalıdır. Temiz, kuru ve soğuk bir test tüpüne 5-7 ml test kanı dökülür. Test tüpünün üzerine hastanın soyadı, adının baş harfleri, tıbbi geçmişi veya ayakta tedavi kartı numarası ve kan alma tarihinin yazılı olduğu boş bir kağıt parçası yapıştırılır. Kan alındıktan sonra tüp buzdolabına konulur. sıcaklık koşulları+4°+8°С ila ertesi gün. Ertesi gün serum test için boşaltılır. Ertesi gün kan kullanılmazsa serumun pıhtıdan boşaltılması ve buzdolabında 1 haftadan fazla saklanmaması gerekir. RIBT testi için test tüpünün özel olarak hazırlanmış ve steril olması gerekir. Araştırma için kan toplama kurallarına uyulmaması durumunda koşullara uyulmaması sonuçların bozulmasına neden olabilir.
Yiyecek, alkol, çeşitli ilaçların alınmasından sonra, çeşitli aşıların uygulanmasından sonra test için kan alınması tavsiye edilmez. adet döngüsü kadınlar arasında.
Ekspres yöntemi kullanan araştırma için, ESR için alınırken yapıldığı gibi parmağın ucundan kan alındı, ancak 1 kılcal damardan daha kan alındı. Ekspres yöntem damar delme yoluyla elde edilen kan serumu ile de gerçekleştirilebilir. Uzak laboratuvarlarda kan tahlili yapılmasına ihtiyaç duyulursa kan yerine kuru serum gönderilebilir (kuru damla yöntemi). Bunun için kan alındıktan sonraki gün serum pıhtıdan ayrılarak 1 ml miktarında steril bir şırıngaya çekilir. Daha sonra serum 6x8 cm ölçülerinde kalın yazı kağıdı (balmumu veya selofan) şeridi üzerine 2 ayrı daire şeklinde dökülür, serbest kenarına soyadı, deneğin baş harfleri ve kan alma tarihi yazılır. kağıt. Serumlu kağıt direkt güneş ışığından korunarak ertesi güne kadar oda sıcaklığında bırakılır. Serum, parlak sarımsı camsı bir filmin küçük daireleri şeklinde kurur. Bundan sonra, kurutulmuş serum içeren kağıt şeritleri farmasötik toz gibi sarılarak laboratuvara gönderilir ve teşhisin ve hangi amaçla incelendiği belirtilir.

Serolojik direnç

Bazı (%2 veya daha fazla) frengi hastalarında, tam antisifilitik tedaviye rağmen, tedavinin bitiminden sonra 12 ay veya daha uzun bir süre boyunca negatif serolojik reaksiyonlarda yavaşlama (yokluk) vardır. Son yıllarda sıklıkla gözlemlenen serolojik direnç denilen durum ortaya çıkıyor. Serolojik direncin türleri vardır:

Doğru(mutlak, koşulsuz) - vücudun bağışıklık kuvvetlerini arttırmak için spesifik olmayan tedaviyle birleştirerek ek anti-sifilitik tedavi uygulamak gerekir.
Akraba- tam tedaviden sonra soluk treponema, vücutta düşük virülanslı bir durumda olan kistleri veya L formlarını oluşturur ve sonuç olarak, ek tedaviözellikle RIF ve RIBT olmak üzere serolojik reaksiyonların göstergelerini değiştirmez.

Aynı zamanda kist formlarında küçük metabolik süreçler meydana gelir ve kist formlarının kabukları yabancı bir proteindir (antijen). Kendini korumak için vücut, serolojik reaksiyonlar gerçekleştirildiğinde ve hastalığın hiçbir belirtisi olmadığında pozitif veya güçlü pozitif olan spesifik antikorlar üretir. L formlarında metabolik süreçler daha fazla azalır ve antijenik özellikler yoktur veya çok az ifade edilir. Spesifik antikorlar üretilmez veya az miktarda bulunur, serolojik reaksiyonlar zayıf derecede pozitif veya negatiftir. Enfeksiyon anından itibaren geçen süre ne kadar uzun olursa, antisifilitik tedavinin etkili olmadığı hayatta kalma formlarına (kistler, sporlar, L formları, taneler) dönüşen Treponema pallidum sayısı da o kadar artar.

Sözde direnç- Tedaviden sonra pozitif serolojik reaksiyonlara rağmen vücutta Treponema pallidum yoktur. Vücutta antijen yoktur ancak serolojik reaksiyonlar sırasında tespit edilen antikorların üretimi devam etmektedir.
Serolojik direnç aşağıdaki nedenlerden dolayı gelişebilir:

hastalığın süresi ve evresi dikkate alınmadan yetersiz tedavi;
yetersiz doz ve özellikle hastaların vücut ağırlığının dikkate alınmaması nedeniyle;
ilaç uygulaması arasındaki sürenin ihlali;
antibakteriyel ilaçlara (treponema pallidum) erişilemeyen iç organlarda, sinir sisteminde, lenf düğümlerinde gizli, kist lezyonlarının varlığında penisilin ve diğer kemoterapi ilaçlarına dirençleri nedeniyle tam spesifik tedaviye rağmen treponema pallidum'un vücutta kalıcılığı sıklıkla tedavinin bitiminden yıllar sonra skar dokularında bulunur, lenf düğümlerinde bazen antisifilitik tedaviden 3-5 yıl sonra treponema pallidum'u tespit etmek mümkündür);
kesinti koruyucu kuvvetler en çeşitli hastalıklar ve zehirlenmeler (endokrinopatiler, alkolizm, uyuşturucu bağımlılığı vb.);
genel yorgunluk (vitaminler, proteinler, yağlar bakımından fakir yiyecekler yemek).

Ek olarak, hastalarda sifiliz varlığı ile ilişkili olmayan ve aşağıdakilerden kaynaklanan serolojik reaksiyonların yanlış pozitifliği sıklıkla tespit edilir:

iç organların eşlik eden spesifik olmayan hastalıkları, kardiyovasküler sistem bozuklukları, romatizma, endokrin ve sinir sistemlerinin işlev bozukluğu, ciddi kronik dermatozlar, malign neoplazmlar;
sinir sisteminde hasar (ağır yaralanmalar, beyin sarsıntısı, zihinsel travma);
gebelik; kronik zehirlenme alkol, nikotin ilaçları; bulaşıcı hastalıklar(sıtma, tüberküloz, viral hepatit, dizanteri, tifüs, tifo ve tekrarlayan ateş).

Bu faktörler, hem sifilitik belirtilerin aktif gelişimi döneminde hem de gerileme sırasında vücudun immünolojik reaktivitesini etkileyebilir.
Şankroidin ortaya çıktığı andan itibaren 4. haftadan itibaren, sifilizi teşhis etmek için çeşitli serolojik testlerin yapılabileceği sero-pozitif bir dönem başlar. Serolojik yöntemin özelliği, spesifik olmayan ve spesifik antijenlerin (sırasıyla spesifik olmayan ve spesifik reaksiyonlar) kullanılabilmesidir.

SPESİFİK OLMAYAN VEYA REAGİN TESTLERİ - Antijen olarak kardiyolipin antijeni (sığır kalp kaslarından kolesterolize alkol ekstraktı) kullanılır. Bunlar Wasserman komplemanı fiksasyon reaksiyonunu, sedimanter reaksiyonları ve mikro çökeltme reaksiyonlarını içerir.

ÖZEL VEYA TREPONEMAL TESTLER, hastaların kan serumunda treponemal antijene karşı antikorların (canlı ve öldürülmüş treponemler, treponemlerden elde edilen ekstraktlar) tespitine dayanır. Aşağıdakiler antijen olarak kullanılabilir:

a) REUTER'S TREPONEMA - yapay bir besin ortamında yetiştirilen ve öldürücü olmayan kültürel spiroketler;

B) NICHOLS TREPONEMA VEYA TISSUE TREPONEMA - Bir tavşanın testislerinin Treponema pallidum ile enfekte edilmesiyle elde edilen patojenik treponema.

Treponemal testlerden immünofloresan adsorpsiyon testi (IFAT) ve treponemal mikrohemaglütinasyon şu anda en sık kullanılmaktadır. Her iki durumda da hastanın serumu, tüm spiroket türlerinde ortak olan antijenlere karşı antikorları çıkarmak için Reiter treponeması ile önceden adsorbe edilir. Nichols treponeması, IFAT'ta bir antijen olarak ve mikrohemaglütinasyonda - Nichols treponema antijenlerinin üzerlerine adsorbe edildiği eritrositler - kullanılır.

Treponemal testler ayrıca RSC'yi (öldürülmüş treponemlerin bir süspansiyonu bir antijen olarak kullanılır - Nichols treponema) ve treponemal immobilizasyon reaksiyonunu içerir.
^

WASSERMANN REAKSİYONUNUN AÇIKLAMASI

Sifilizden şüphelenildiğinde Wasserman komplemanı fiksasyon reaksiyonunu gerçekleştirmek için aşağıdaki bileşenler gereklidir:

HASTANIN ÇALIŞMA SERUMU 1:5 oranında seyreltilmiştir. Komplemanı yok etmek (inaktive etmek) için test serumunun 56 derece sıcaklıkta 30 dakika ısıtılması gerekir.
SPESİFİK OLMAYAN ANTİJEN - kardiyolipin antijeni - sığır kalp kasından kolesterolize alkol ekstraktı.
KOMPLEMENT - kobay serumu tamamlayıcı olarak kullanılır. Kompleman miktarının kesin olarak tanımlanması gerektiğinden, kompleman çalışma dozunda alınır (%25-30 oranında artırılmış titre). Kompleman titresi, hemolizin hala meydana geldiği minimum miktardır. Titrede bir artış gereklidir çünkü reaksiyonda tamamlayıcının aktivitesi, reaksiyonun diğer bileşenleri (alkol antijeni vb.)
HEMOLİTİK SİSTEM, hemolitik serum ve koyun eritrositlerinin bir karışımıdır; RSC yerleştirilmeden önce, eritrositlerin yüzeyindeki hemolizinlerin adsorpsiyonu için 37°C'de bir termostatta 30 dakika süreyle tutulur.

Wasserman reaksiyonu genel kabul görmüş RSC yöntemi kullanılarak gerçekleştirilir. Test tüpünde hemoliz olmaması pozitif Wasserman reaksiyonuna işaret eder. Test tüpünde hemoliz varlığı buna göre negatif Wasserman reaksiyonu (kişinin sağlıklı olduğu) olarak yorumlanır.

^ Wasserman reaksiyonunu kurma şeması

Reaksiyon bileşenleri	ste test tüpleri
Reaksiyon bileşenleri	1 (deneyim)	2 (hipertansiyon kontrolü)	3 (AT kontrolü)
Etkinleştirilmemiş test serumu (1:5)	0,5	0,5	0,5
Çalışma dozunda kardiyolipin antijeni	0,5	0,5	-
Kompleman (çalışma dozunda)	0,5	0,5	0,5
Tuzlu	-	0,5	0,5

137°C sıcaklıkta inkübasyon - 40 dakika.

Reaksiyonun sonucu, hemoliz gecikmesinin derecesine göre değerlendirilir: ++++ - keskin pozitif reaksiyon (hemolizin tamamen yokluğu) +++ - pozitif reaksiyon ++ve+ - zayıf pozitif reaksiyon - negatif reaksiyon

^ Spesifik önleme ve tedavi. Spesifik önleme geliştirilmemiştir. Spesifik olmayan önleme, rastgele cinsel ilişkiden uzak durmayı, hastaların, özellikle de hastalığın gizli bir formunu taşıyanların erken tanımlanmasını ve bunların zamanında ve etkili tedavisini içerir. Frengiyi tedavi etmek için antibiyotikler kullanılır: penisilin ve türevleri (suda çözünür ve dayanıklı formlar), bazen eritromisin. Bizmut, arsenik ve cıva preparatları da kullanılır.

^ Ağız boşluğunda sifiliz belirtileri.

Frengi - kronik enfeksiyon Treponema pallidum'un neden olduğu. Frengi çok tuhaf bir seyirle karakterize edilir: ilk olarak, aktif belirtilerde ve gizli enfeksiyon dönemlerinde dalga benzeri bir değişiklik; ikincisi, hafif inflamatuar olaylardan spesifik derin enfeksiyöz granülomların oluşumuna, lokalize oldukları organ ve dokuların sıkıştırılmasına ve tahrip edilmesine kadar organ ve dokulara verilen hasarın klinik ve patolojik tablosunda kademeli ve tutarlı bir değişiklik, bu da kaybına yol açar. organ fonksiyonu ve bazen hastanın ölümü.

Edinilmiş ve konjenital sifiliz vardır. Konjenital sifiliz, Treponema pallidum'un sifilizli bir anneden plasenta yoluyla fetüse girmesiyle ortaya çıkar. Bir kişiye sifiliz bulaştırmak için, Treponema pallidum'un bütünlüğü tehlikeye giren deri veya mukoza zarından nüfuz etmesi gerekir.

Genellikle enfeksiyon cinsel temas yoluyla meydana gelir. Cinsel olmayan enfeksiyon, örneğin ameliyatlar, otopsiler, dişçilik veya dişçilik sırasında tıbbi çalışanlar arasında mesleki olabilir. jinekolojik muayene veya ortak mutfak eşyaları, ruj, ağızlık vb. kullanıldığında ortaya çıkar.

Frenginin dalgalı seyri nedeniyle, farklı karakter Hastalığın çeşitli aşamalarında meydana gelen klinik ve morfolojik değişiklikler, edinilmiş sifilizin kuluçka dönemi, birincil, ikincil ve üçüncül dönemleri ile sinir sisteminin bilinmeyen, visseral sifiliz ve sifiliz dahil olmak üzere latent dönemleri arasında bir ayrım yapılır.

Frenginin kuluçka süresi ortalama 3-4 haftadır, ancak kısaltılabilir (10-12 güne kadar) veya uzatılabilir (6 aya kadar), bu genellikle kuluçka sırasında intercurrent için az miktarda antibiyotik alınmasıyla ilişkilidir. hastalıklar veya bel soğukluğu.

^ Sifilizin ilk dönemi bölgede enfeksiyonun ortaya çıkmasıyla başlar, yani. treponema pallidum'un tanıtımı, şans (birincil sifiloma). Birincil dönem 6-7 hafta sürer. Sert şansın oluşumundan 5-7 gün sonra, birincil dönemin ikinci vazgeçilmez semptomu ortaya çıkar - bölgesel lenf düğümlerinin büyümesi (bubo veya bölgesel skleradenit). Treponema bu düğümlerde hızla çoğalır. Lenfatik sistem boyunca lenf düğümlerinden, zaten birincil dönemin başlangıcında, treponemler kana girer; buna yanıt olarak, sifilizin birincil döneminin 3. haftasının sonunda antikorlar yavaş yavaş üretilmeye başlar. kanda klasik serolojik reaksiyonlar (Wassermann reaksiyonu, sediment reaksiyonları) kullanılarak, biraz daha erken - immünofloresan reaksiyonu (RIF) kullanılarak ve biraz sonra - pallidum treponema'nın immobilizasyon reaksiyonu (RIBT veya RIT) kullanılarak belirlenebilir.

Frenginin birincil döneminin sonunda hastaların yaklaşık %20'sinde frengi gelişir. genel belirtiler(vücut ısısının 38-38,5°C’ye yükselmesi, halsizlik, baş ağrısı, özellikle geceleri kemik ağrısı), hafif anemi, lökositoz ve periferik kanda ESR'de artış görülür. 4-6 gün sonra, bu arka plana karşı, vücudun derisinde ve sıklıkla ağız boşluğunun mukoza zarında, sifilizin birincil döneminin sonunu ve ikincil döneminin başlangıcını gösteren bir döküntü belirir.

Ağız boşluğunun mukoza zarı ve dudakların kırmızı kenarı, primer sifiliz de dahil olmak üzere hastalığın tüm aşamalarında sifilitik döküntülerin lokalizasyonudur. Cinsel olmayan enfeksiyonlarda şans en sık dudaklarda ve ağız mukozasında lokalize olur. Sert şans, dudakların kırmızı sınırının herhangi bir yerinde veya ağız mukozasında meydana gelebilir, ancak çoğunlukla dudaklarda, dilde ve bademciklerde lokalize olur.

Diğer yerlerde olduğu gibi dudakta veya ağız mukozasında sert şansın gelişimi, sınırlı bir kızarıklığın ortaya çıkmasıyla başlar, bunun tabanında 2-3 gün içinde inflamatuar sızıntı nedeniyle sıkışma meydana gelir. Bu sınırlı sıkışma giderek artar ve genellikle 1-2 cm çapa ulaşır. Lezyonun orta kısmında nekroz meydana gelir ve et kırmızısı bir erozyon, daha az sıklıkla ülser oluşur. 1-2 hafta içinde tam gelişimine ulaşan, mukoza zarındaki sert şans genellikle yuvarlak veya oval, ağrısız, et kırmızısı erozyon veya boyutları 3 mm'den (cüce şans) 1,5 cm'ye kadar değişen tabak şeklinde kenarları olan ülser olarak ortaya çıkar. tabanda yoğun elastik sızıntılı çapta. Şans yüzeyinin kazınmasıyla soluk treponema kolayca tespit edilir. Bazen erozyonlar grimsi beyaz bir kaplamayla kaplanır. Dudaklarda bir şans bulunduğunda, bazen önemli bir şişlik oluşur, bunun sonucunda dudak sarkar ve şans diğer yerlere göre daha uzun sürer. Daha sıklıkla bir sert şans gelişir, daha az sıklıkla - iki veya daha fazla. İkincil bir enfeksiyon meydana gelirse erozyon derinleşebilir ve kirli gri nekrotik kaplamalı ülser oluşumuna neden olabilir.

Dilde sert şans genellikle tektir ve daha sık olarak orta üçte birlik kısımda meydana gelir. Eroziv ve ülseratif formlarının yanı sıra dili katlanmış kişilerde, kıvrımlar boyunca sert şans lokalize olduğunda yarık benzeri bir form oluşabilir. Dilin arka kısmında sert bir şans bulunduğunda, tabanda ciddi bir sızma nedeniyle, şans genellikle çevredeki doku üzerinde keskin bir şekilde çıkıntı yapar ve yüzeyinde ten kırmızısı erozyon vardır. Dikkate değer olan, şans çevresinde iltihaplanmanın olmaması ve ağrısız olmasıdır.

Diş eti bölgesindeki sert şans, bir veya iki dişi çevreleyen, hilal şeklinde, parlak kırmızı, düzgün bir erozyona benzer. Diş etlerinin ülseratif şansı banal ülserasyona çok benzer ve primer sifiloma özelliğinde neredeyse hiçbir belirti yoktur. Submandibular bölgede bubonun varlığı tanıyı kolaylaştırır.

Bademcik üzerinde lokalize olduğunda, sert şans üç formdan birine sahip olabilir: ülseratif, boğaz ağrısına benzer (amigdalit) ve kombine - boğaz ağrısına benzer bir arka plana karşı ülseratif. Bademcik bir taraftan etkilenir. Ülseratif formda bademcik genişler ve yoğunlaşır, bu arka planda pürüzsüz, pürüzsüz kenarlara sahip etli kırmızı oval bir ülser görülür. Ülser etrafındaki mukoza hiperemiktir. Süreç eşlik ediyor acı verici hisler, bazen önemli. Anjina benzeri şansta erozyon veya ülser yoktur, bademcikte tek taraflı belirgin bir genişleme vardır. Bakır kırmızısı bir renk alır, ağrısız ve yoğundur. Süreç, lezyonun tek taraflı olması, ağrının olmaması ve akut inflamatuar hiperemi açısından anjinadan farklıdır. Genel belirtiler yoktur, vücut ısısı normaldir.

Dudaklardaki şans basit olanlardan ayırt edilmelidir kesecikli liken Frengiden farklı olarak döküntüden önce yanma hissi veya kaşıntı gelir, erozyon hiperemik, hafif ödemli bir taban üzerinde bulunur ve mikropolisiklik bir taslağa sahiptir. Ek olarak, veziküler likenlerde, aşındırıcı döküntülerden önce, şans oluşumu sırasında asla meydana gelmeyen veziküller gelir. Sert şansın aksine, herpetik erozyonlar hemen hemen her zaman hızlı başlangıç ve hızlı epitelizasyon ile karakterize edilir; buna ek olarak, herpes, sert şansın aksine, sıklıkla tekrarlayan bir gidişata sahiptir. Dudakta herpetik erozyonun uzun süreli varlığı ile tabanında, erozyonun primer sifiloma benzerliğini artıran, sızıntılı bir sıkışmanın ortaya çıktığı dikkate alınmalıdır.

^ Frenginin ikincil dönemi 6-7 hafta sonra başlar. Şansın ortaya çıkmasından sonra, sifilizin birincil döneminin (sert şans, bölgesel skleradenit, poliadenit) karakteristik semptomlarının arka planında, bol miktarda roseolöz-papüler döküntü ortaya çıkar. Frenginin ikincil dönemi 3-5 yıl sürer ve buna pozitif serolojik reaksiyonlar eşlik eder. Frenginin ikincil döneminin bir özelliği, hastalığın aktif tezahür dönemlerinin, hastalığın gizli, asemptomatik seyri dönemleriyle değiştirildiği ve bu dönemlerin her birinin süresinin bireysel olduğu (ortalama 1.5) dalga benzeri seyridir. -2 ay).

Enfeksiyonun genelleşmesine bağlı olarak sifilizin sekonder periyodunun başlangıcında gelişen hastalığın aktif evresi, çok sayıda pembe-papüler ve bazen püstüler döküntüler, poliadenit, skleradenit, sert şans kalıntıları ile karakterize edilir ve denir. ikincil taze sifiliz. Sekonder taze sifiliz döneminin sonunda şans düzelir, pembe-papüler döküntüler kaybolur, bölgesel skleradenit ve poliadenit ortadan kalkar.

Ağız mukozası sık kullanılan yer sekonder dönemdeki sifilizlerin lokalizasyonu ve sekonder tekrarlayan sifiliz ile ağızda döküntüler hastalığın tek klinik belirtisi olabilir. Sekonder sifiliz semptomları olan hastaların neredeyse yarısında oral mukoza lezyonları roseolous ve papüler elementler şeklindedir; oral mukozada püstüler döküntüler oldukça nadir görülür.

Oral mukozadaki roseola döküntüleri, kemerler, yumuşak damak, küçük dil ve bademciklerde simetrik olarak ortaya çıkar. Bu bölgedeki roseola döküntülerinin bir özelliği, sürekli lezyonlara (eritematöz bademcik iltihabı) dönüşmeleridir. Etkilenen bölge, bazen bakır renginde ve keskin kenarlı, durgun kırmızı bir renge sahiptir. Bu bölgedeki mukoza hafifçe şişmiş; hastalar yutkunma sırasında gariplik, ağrı hissederler, ancak öznel duyumlar olmayabilir. Eritematöz boğaz ağrısının çözümü orta kısımdan başlar.

Sekonder sifilizin oral mukozadaki en yaygın belirtisi papüler döküntülerdir. Mukoza zarının herhangi bir yerinde meydana gelebilirler, ancak daha sık olarak bademcikler, kemerler, yumuşak damak üzerinde, papüllerin sıklıkla sürekli lezyonlara (papüler boğaz ağrısı), dilde, yanakların mukoza zarına, özellikle de kapanma çizgisi boyunca birleştiği yerde oluşabilirler. dişler, diş etleri vb. Papüllerin türü, varlıklarının süresine bağlıdır. Başlangıçta papül, tabanında küçük bir sızıntı bulunan, çapı 1 cm'ye kadar keskin sınırlı koyu kırmızı bir lezyondur. Oluşan iltihaplanma sonucu oluşan eksüda bir süre sonra papülü kaplayan epiteli doyurur ve oldukça karakteristik bir görünüm kazanır.

^ Frenginin üçüncül dönemi Tedavi edilmese bile her hastada görülmez. Vücudun reaktivitesindeki değişiklikler, treponema pallidum'a duyarlılığı vb. nedeniyle hastalığın başlangıcından 4-6 yıl sonra başlar. ve malign bir seyir gösterir. Üçüncül dönem onlarca yıl sürebilir ve çürümeye eğilimli ve sıklıkla önemli derecede yıkıcı, bazen yaşamla bağdaşmayan, organ ve dokularda değişikliklere neden olan inflamatuar sızıntıların (diş etleri ve tüberküller) gelişimi ile karakterize edilir. Aynı zamanda, üçüncül sifiliz döküntüleri başkalarına bulaşıcı değildir, çünkü akıntılarında soluk treponema yoktur.

Sifilizin üçüncül döneminde ağız mukozasında sakızlar, zamklı yaygın infiltrasyon ve tüberküloz döküntüleri görülebilir. Bu durumda hastalığın klinik tezahürünün tek yeri mukoza olabilir.

Zamklı sifilid oral mukozanın herhangi bir yerinde lokalize olabilir. Daha sıklıkla yumuşak ve sert damakta ve dilde diş etleri oluşur. Gumma genellikle tekil olarak görünür. Başlangıçta yavaş yavaş genişleyen ve daha sonra açılan ağrısız bir düğüm oluşur. Sakızlı çekirdek reddedilir ve ardından sakızlı bir ülser oluşur. Bu süreç 3-4 ay sürer ve bazen buna küçük subjektif duyumlar da eşlik eder. Açılmamış gumma yoğun bir kıvama, pürüzsüz bir yüzeye sahiptir, düğüm üzerindeki mukoza orta derecede iltihaplıdır, durgun kırmızı, keskin bir şekilde sınırlı bir renge sahiptir. Çubuğun ayrılmasından sonra sakızlı ülser krater şeklinde bir şekle sahiptir, kenarları yoğundur, ağrısızdır, tabanı granülasyonlarla kaplanmıştır. Ülser, yıldız şeklinde geri çekilmiş bir yaranın oluşmasıyla yavaş yavaş iyileşir. Damakta lokalize olduğunda diş eti bölgesinde sıklıkla bir perforasyon oluşur ve bu durum süreç çözüldükten sonra da devam eder.

Sert damakta diş eti genellikle orta hatta yer alır. Mukoza zarının ince olması ve damak periostuyla sıkı bir şekilde bağlantılı olması nedeniyle çok hızlı başlayan sakızımsı süreç periost ve kemiğe yayılır. Diş eti sızıntısı hızla parçalanır, nekrotik ve sekestre hale gelen kemiği açığa çıkarır ve ağız ve burun boşlukları arasında bir iletişim oluşur.

Sifilizli bir hastanın tedavisine, ancak primer ve sekonder sifilizde soluk treponema veya pozitif serolojik reaksiyonlar tespit edilerek klinik tanının doğrulanmasından sonra başlanabilir. Antisifilitik tedavinin etkisi altında döküntüler hızla kaybolur ve penisilin tedavisinin başlamasından 8-10 saat sonra döküntülerin yüzeyinde treponema pallidumlar tespit edilmez. Bu bağlamda, penisilin tedavisinin başlamasından 10-12 saat sonra sifiliz hastaları, günlük temas yoluyla ve diş hekimleri de dahil olmak üzere doktorlar tarafından muayene edildiğinde pratik olarak bulaşıcı değildir.

Muayenehanesinde bir diş hekimi, hastalığın tek belirtisinin ağız mukozasında diş eti veya yumrulu döküntüler olabileceği üçüncül sifilizli bir hastayla karşılaşabilir. Bu tür hastaların tedavisi penisilin uygulamasıyla başlayamaz, çünkü bu tür döküntüler hayati öneme sahipse, felakete, hatta hastanın ölümüne yol açabilecek sifilitik döküntülerin hızlı emilimini uyaracak bir alevlenme reaksiyonuna neden olacaktır. organlar. Bunun nedeni, bu tedaviyle sızıntının emilmesinin 2-3 gün içinde gerçekleşmesi ve bu süre zarfında yenilenmenin oluşması için zamanın olmayacağıdır. bağ dokusu. Bu bağlamda, üçüncül sifiliz hastalarının tedavisi her zaman 2-4 hafta boyunca iyot alarak başlamalı, daha sonra bizmut dozunun yarısı uygulanmalı ve ancak daha sonra penisilin verilmeli, ardından bizmut kür dozunun ikinci yarısı uygulanmalıdır; İkinci ve sonraki tedavi kürleri her zamanki gibi başlar; penisilin ile.

Diş hekimi, tersiyer veya geç konjenital sifiliz hastası olan ve damakta plastik cerrahi gerektiren perforasyon bulunan bir hastayla karşılaşabilir. Frengi hastalarının, tedavinin tamamlanmasından sonra 5 yıl boyunca dispanserde izlendiği ve bu süre zarfında frengiden kurtulduklarının belirlendiği unutulmamalıdır. Bu konuda estetik cerrahi bu tür hastaların kayıttan çıkarıldıktan sonra yapılması gerekir. Bu süreden önce ameliyata ihtiyaç duyulursa cerrahi müdahalenin penisilin koruması altında yapılması gerekir, bu durumda ilacın toplam dozu hastanın gözetiminde olduğu zührevi hekim ile ortaklaşa belirlenir.

Ağız boşluğunda sifiliz belirtilerini tedavi ederken, penisilin ve bizmut preparatlarının kullanımına bağlı komplikasyonlar ortaya çıkabilir. Penisilin ve preparatları, penisilin uygulamasının durdurulması gereken akut alerjik ilaç stomatiti ve kandidiyazise neden olabilir. Sifiliz hastalarındaki ikinci komplikasyon, penisilinin zorunlu olarak kesilmesini gerektirmez. Bizmut preparatlarından kaynaklanan komplikasyonlar bizmut saçağı, bizmut diş eti iltihabı ve stomatittir.

Konuma bağlı olarak inflamatuar süreç ağız mukozasına verilen hasar farklı şekilde adlandırılır: stomatit (yanak mukozası), glossit (dil), diş eti iltihabı (diş etleri), keilit (dudaklar). Stomatit genellikle vücuttaki çeşitli dejeneratif süreçlerin, bulaşıcı veya somatik hastalıkların bir sonucudur veya mukoza zarı üzerindeki zararlı fiziksel veya kimyasal etkilerin sonucudur. ikincil rol yerleşik mikroflora. Yüzeysel kataral stomatitte genellikle Gr + aerobik kok ve basiller bulunur; derin stomatitte kesinlikle anaerobik Gr - flora (fusobakteriler, bacteroides, peptostreptokoklar) baskındır.

Ülseratif-nekrotik stomatitte, esas olarak fusobakteriler ve spiroketler olmak üzere anaerobik flora hakimdir, ancak diğer mikroorganizmalar (veillonella, peptostreptokoklar, bacteroides, vibrios, aktinomisetler) de mevcut olabilir. Fusospirochetosis ayrıca ülseratif nekrotizan Vincent bademcik iltihabını, Ludwig bademcik iltihabını, akciğer kangrenini, ülseratif kolit ve benzeri.).

Son yıllarda kandidomikozis insidansında bir artış olmuştur. Bununla bağlantılı yaygın kullanım antibiyotikler, kortikosteroidler, sitostatikler. Uzun süreli kullanımları normal mikrobiyal floranın (disbakteriyoz) bileşiminin bozulmasına yol açar. Candida mantarları ağız boşluğunun mukoza zarının sakinleridir; sindirim kanalı, solunum sistemi, vajina, cilt.

Maya hücreleri ile ağız mukozasının epitel hücreleri arasındaki ilişki süreci, bunların yapışmasıyla başlar. Sükroz, maltoz, glikoz ve diğer karbonhidratlar yapışma aktivitesini arttırır. Candida cinsinin maya benzeri mantarlarının yapışkanlığı, bunların virülansını büyük ölçüde belirler.

Maya hücre duvarı mannanı tarafından aktive edilen kompleman sistemi bunların yapışmasını engeller. Maya benzeri mantarlar diş minesinin tahribatına ve çürük gelişimine katkıda bulunur. Maya hücrelerinin vejetasyon yaptığı çürük dişler, mikotik bademcik iltihabı ve stomatit gelişimine katılabilecekleri bir tür ekolojik niş olarak düşünülebilir. Ağız boşluğunda kandidiyazis veya primer kandidiyazın lokal belirtileri, akut psödomembranöz kandidiyaz (pamukçuk), akut veya kronik kandidiyaz ve hiperplastik kandidiyaz şeklinde ortaya çıkar.

Test görevleri:

Frengi etkeninin taksonomik konumu:

Sınıf;
aile;

Frengi tanısında kullanılan serolojik testler:

Wasserman reaksiyonu;
tortul;

Tekrarlayan ateşi teşhis etmenin ana yöntemi:

bakteriyoskopik;
serolojik;
alerjik.

Spiroketleri boyama yöntemleri:

Büyükanne;
Gümüşleme;
Neisser;
Romanovsky-Giemsa;
Ginsa.

Leptospiroz tanısı için materyal:

Kan;
Dışkı;
İdrar;
Kusmak.

Tekrarlayan ateşin etiyolojisi:

Rickettsia;
Mantarlar;
Borrelia;
Virüsler;
Mikoplazmalar.

^ DURUMSAL GÖREVLER:

Görev 1. 40 yaşında erkek hasta, hastalığının 8. gününde doktora başvurdu. Birkaç gün önce, nehrin yukarısında sığır sulama yeri bulunan nehirde yüzdü. Bu bölgedeki hayvanlar arasında leptospirosis rapor edilmiştir. Doktor leptospirosis olasılığından şüpheleniyordu.

Hastalığın bu evresinde hastadan hangi materyal alınmalı ve tanı koymak için hangi mikrobiyolojik yöntem kullanılabilir?

Görev 2. Deri ve zührevi hastalıklar kliniğine başvuran bir hastada sert şakroid tespit edildi. Hastalığın bu aşamasında frengiyi teşhis etmeyi hangi mikrobiyolojik test mümkün kılacaktır?

11 numaralı ders.

Ders konusu: "Mikoplazmoz ve klamidyanın mikrobiyolojik tanısı."

Ders planı:

Morfolojik ve biyolojik özellikler mikoplazma ve klamidya.
Klamidya teşhisi için yöntemler.
Mikoplazmoz tanısı için yöntemler.
Test kontrolü: “Patojenik spiroketler, mikoplazmalar, klamidya.”

Klamidya ve klamidya

Romanovsky-Giemsa'ya göre boyandıklarında mavi veya mor bir renk alırlar. Bununla birlikte, faz kontrastlı bir optik sistem kullanılarak cam altında ıslak preparasyonların mikroskopisi yapılırken, klamidya boyanmamış bir durumda bile açıkça görülebilir. Ökaryotik hücrelerde optimal büyüme koşulları altında, klamidyanın yaşam döngüsü 17-70 saattir.Klamidya, tavuk embriyolarının yumurta sarısı kesesinde 33 ila 41 C arasındaki sıcaklıklarda (türe bağlı olarak) ve ayrıca hücre kültürlerinde iyi çoğalır. çeşitli omurgalılar.

Chlamydia pneumoniae

Solunum klamidyası- klamidyanın neden olduğu, zatürre (klamidya pnömonisi), üst solunum yolu nezlesi ve genel zehirlenme şeklinde kendini gösteren bulaşıcı bir hastalık.

Patojen - Klamidya zatürree - diğer türlerin antijenleriyle ortak olan genel bir antijene, türe özgü bir proteine ve muhtemelen türe özgü antijenlere sahiptir. Yaşam döngüsü diğer klamidya döngüsüne benzer, ancak temel gövdeler küresel değil, genişleyen periplazmik alan nedeniyle oluşan armut şeklindedir. Ayrıca, İLE.zatürree Mikrokolonilerinde glikojen sentezlemezler. Bu türün klamidyası, tavuk embriyolarının yumurta sarısı keselerinde ve hücre kültürlerinde az miktarda çoğalır. Solunum yolu epiteli için belirgin bir tropizmleri vardır.

Hastalık yaygındır. Batı Avrupa, Amerika ve Avustralya'nın birçok ülkesinde salgın salgınlar gözlemlendi. Enfeksiyonun kaynağı hasta bir kişidir. Patojen nazofaringeal sekresyonlarla salınır. Enfeksiyonun mekanizması hava yoluyladır. İnsanların patojene duyarlılığı yüksektir, çocuklarda ve yaşlılarda hastalık daha şiddetli seyreder; gençlerde - daha sıklıkla hafif formlar şeklinde. Ana klinik form hastalıklar - küçük odaklı ve (veya) interstisyel pnömoni, tespit edilen röntgen.

Tedavi. En etkili antibiyotikler şunlardır: patojenin çoğalmasını engelleyen tetrasiklinler, makrolidler.

Klamidyanın laboratuvar tanısı

Klamidya dünya çapında yaygın olduğundan ve klinik belirtileri çok çeşitli olduğundan, bu hastalıkların tanısında laboratuvar yöntemleri özellikle önemlidir. Hastalığın biçimine bağlı olarak araştırma materyali şunlardır: konjonktivadan kazıntılar, hıyarcıklardan eksuda, nazofarinksten yıkamalar, üretra, solunum ve genitoüriner yolların mukoza zarından sürüntü ile alınan materyal, balgam, kan (ateş sırasında) ve ayrıca kesit materyali (karaciğer, dalak, akciğer ve diğer doku parçaları).

^ Bakteriyolojik teşhis malzemenin ön mikroskobik incelemesinden, patojenin izolasyonundan ve tanımlanmasından oluşur. Ön çalışma, enfekte hücrelerde klamidyayı doğrudan veya dolaylı immünofloresan yoluyla veya faz kontrast optikleri kullanarak veya Romanowsky-Giemsa boyama kullanarak tespit etmek için bakteriyoskopiden oluşur. Patojeni izole etmek için hücre kültürleri (en iyi L-929, McCoy, HeLa) veya tavuk embriyoları test materyali ile enfekte edilir. Bakteriyel büyümeyi baskılamak için test materyali gentamisin, streptomisin ve kanamisin ile işleme tabi tutulur. Enfekte hücre kültürleri 35-36 °C'de 6 gün inkübe edilir ve ardından faz kontrastı, immünofloresan kullanılarak mikroskoplanır, glikojen açısından test edilir ve cinse ait olduğu belirlenir. Klamidya Grup antijeni ile RSC'nin kullanılması. RSC, 1:8 dilüsyonda pozitif kabul edilir. Tavuk embriyoları enfekte olduğunda 4-10 gün içinde ölen embriyoların yumurta sarısı keseleri incelenir. Bakteriyel kontaminasyonun yokluğunda, Romanovsky-Giemsa boyalı preparatlar mikroskobik olarak incelenir ve sarısı kesesi süspansiyonunda RSC'de grup antijeninin varlığı belirlenir. Tahsis durumunda C. trahomatis serotipi belirleyin. Bu amaçla, bu suşun izole edildiği kobay serumu, bilinen 15 serotipin prototip antijenleri ile dolaylı immünfloresan yöntemi kullanılarak test edilir.

Ayrıca klamidyayı tespit etmek için kullanılır biyolojik yöntem- Bazı suşlar nedeniyle beyaz fareler ve kobaylar test materyali ile enfekte olmuştur. C. psittaci fareler için patojendir ancak domuzlar için patojen değildir ve bunun tersi de bazı türler için geçerlidir. C. trahomatis (A, B ve C serotipleri) farelerde üremez ancak domuzlar için patojendir.

Yenidoğan fareler, hemorajik menenjitten 5-10 gün sonra intraserebral olarak enfekte olduklarında, intranazal olarak enfekte olduklarında - pnömoniden 5-10 gün sonra ölürler. Farelerde ve domuzlarda intraperitoneal enfeksiyonla karaciğer ve dalak büyür ve karın boşluğunda fibrinöz eksüda oluşur. Çeşitli yöntemlerle enfekte olmuş hayvanların mikroskobik incelemesi, beyin omurilik sıvısının mononükleer hücrelerinde (intraserebral enfeksiyonla), akciğerlerde (burun içi enfeksiyonla), dalakta, karaciğerde ve periton eksüdasında (intraperitoneal enfeksiyonla) klamidya mikrokolonilerini ortaya çıkarır. Dolayı İLE.zatürree Hücre kültürlerinde ve tavuk embriyolarında zayıf bir şekilde çoğalırlar; bunların tespiti ve tanımlanması için, immünofloresan reaksiyonlarında türe özgü bir antijene karşı monoklonal antikorlar kullanılır.

İçin serolojik teşhis Psittakoz (ornitoz) ve lenfogranülomatozis venereum RSC ve dolaylı immünfloresan kullanır. Kompleman sabitleyici antikorlar 4-8 gün sonra küçük miktarlarda ortaya çıkar, ardından titreleri artar. Bu nedenle RSC'nin eşleştirilmiş serumlarla kullanılması daha iyidir. Klamidyada jenerik bir antijenin varlığı nedeniyle, monoklonal antikorların ve bunların yardımıyla tanımlanan her tür (ve serotip) için en spesifik olan tanısal antijenlerin kullanılmasıyla serolojik reaksiyonların özgüllüğü ve duyarlılığı artırılabilir.

Klamidyayı teşhis etmek için intradermal enjeksiyonlar da kullanılabilir. alerji testleri, ancak bunların özgüllük derecesi alerjenlerin özgüllük derecesine bağlıdır çünkü ortak grup antijenlerine bağlı olarak çapraz reaksiyonlar meydana gelebilir.

No. 23 Frengiye neden olan ajan. Taksonomi. Karakteristik. Mikrobiyolojik teşhis. Tedavi.
Treponema paladyum; T. entericum
Morfoloji: 8-12 halkalı tipik treponemler, motor aparatı - her hücre kutbunda 3 periplazmik flagella. Gram boyası algılanmaz; Romanovsky-Giemsa boyası hafif pembedir ve gümüş emdirmeyle ortaya çıkar.
Kültürel varlıklar: çukurdaki öldürücü tür. ortamlarda üremez, kültürün birikimi tavşanın testislerinde enfeksiyon oluşması yoluyla oluşur. Virülent suşlar, beyin ve böbrek dokusu içeren ortamlarda kültürlenir.
Biyokimyasal özellikler: mikroaerofil
Antijenik yapı: kompleks, spesifik protein ve lipoid antijenlere sahiptir; ikincisi, sığır kalbinden ekstrakte edilen kardiyolipin (difosfadilgliserol) ile bileşim açısından aynıdır.
Patojenite faktörleri: adezinler bağlanma sürecine dahil olur, lipoproteinler immünopatolojik süreçlerin geliştirilmesine katılır.
Direnç: Kurumaya, güneş ışığına karşı hassastır, kuruyuncaya kadar nesnelerin üzerinde kalır. Olumsuz koşullar altında L formuna dönüşerek kistler oluşturur.
Patogenez: Frengiye neden olur. Giriş kapısından treponema çoğaldıkları bölgesel lenf düğümlerine girer. Daha sonra T. kan dolaşımına nüfuz ederek endotel hücrelerine bağlanarak endarterite neden olur, vaskülit ve doku nekrozuna yol açar. T. kanla birlikte tüm vücuda yayılıyor ve organları tohumluyor: karaciğer, böbrekler, kemik, kardiyovasküler ve sinir sistemleri.
Bağışıklık: koruyucu bağışıklık geliştirilmemiştir. Patojen antijenlerine yanıt olarak HRT ve otoimmün süreçler gelişir. Humoral bağışıklık, T. lipoid antijenine yanıt olarak geliştirilir ve bir IgA ve IgM titresidir.
Mikroskobik inceleme. Şansın ortaya çıkması sırasında birincil sifiliz için yapın. Araştırma materyali: şans akıntısı, “ezilmiş” bir damlanın hazırlandığı ve karanlık bir alanda incelendiği bölgesel lenf düğümlerinin içeriği. Sonuç pozitifse, 6-14 mikron uzunluğunda ince kıvrımlı iplikler görülebilir ve 10-12 tekdüze küçük normal şekilli buklelere sahiptir. Treponema pallidum sarkaç benzeri ve öteleme fleksiyon hareketleriyle karakterize edilir. Sekonder sifiliz sırasında ağız mukozasında lezyonların gelişmesi ve ağız boşluğunda şankroidin lokalizasyonu ile Treponema pallidum'u normal mikrofloranın temsilcileri olan saprofitik Treponema'dan ayırmak gerekir. Bu durumda belirleyici olan teşhis değeri Bölgesel lenf düğümlerinin noktalarında tipik treponemaların tespiti vardır.
Serodiyagnoz. Wasserman reaksiyonu 2 antijenle aynı anda gerçekleştirilir: 1) spesifik, patojenin antijenini içeren - ultrasonla yok edilen treponemler; 2) spesifik olmayan - kardiyolipin. Test serumu 1:5 oranında seyreltilir ve genel kabul görmüş yönteme göre RSC yerleştirilir. Pozitif bir reaksiyonla hemolizde bir gecikme gözlenir, negatif bir reaksiyonla kırmızı kan hücrelerinin hemolizi meydana gelir; reaksiyonun yoğunluğu buna göre (+ + + +) ila (-) arasında değerlendirilir. Frenginin ilk dönemi seronegatiftir ve negatif Wasserman reaksiyonu ile karakterizedir. Hastaların %50'sinde reaksiyon, şansın ortaya çıkmasından en geç 2-3 hafta sonra pozitif hale gelir. Frenginin ikinci ve üçüncü dönemlerinde pozitif reaksiyonların sıklığı %75-90'a ulaşır. Tedavi süresinden sonra Wasserman'ın reaksiyonu negatif olur. Wasserman reaksiyonuna paralel olarak, spesifik olmayan bir kardiyolipin antijeni ve testle inaktive edilmiş kan serumu veya plazması ile bir mikropresipitasyon reaksiyonu gerçekleştirilir. Pleksiglas plaka (veya normal cam) üzerindeki bir kuyucuğa 3 damla serum uygulanır ve 1 damla kardiyolipin antijeni eklenir. Karışım iyice karıştırılır ve sonuçlar dikkate alınır. Frengili bir hastanın kan serumu ile pozitif reaksiyon, farklı boyutlarda pulların oluşumu ve kaybı ile karakterize edilir; negatif sonuçla birlikte, tekdüze ışık opalesansı gözlenir.
RIF - dolaylı immünofloresan reaksiyonu - sifiliz tanısına özeldir. Antijen olarak doku treponemlerinin bir süspansiyonu kullanılır. RIF_200 reaksiyonu kullanılır. Hastanın serumu Wassermann reaksiyonunda olduğu gibi inaktive edilir ve 1:200 oranında seyreltilir. Antijen damlaları cam slaytlara uygulanır, kurutulur ve 5 dakika boyunca asetonda sabitlenir. Daha sonra preparasyona hasta serumu uygulanır, 30 dakika sonra yıkanıp kurutulur. Bir sonraki adım, ilacı insan globülinlerine karşı floresan serumla tedavi etmektir. Preparat, treponemlerin parlaklık derecesine dikkat edilerek bir floresan mikroskobu kullanılarak incelenir.
Treponemlerin immobilizasyonunun RIT reaksiyonu da spesifiktir. Canlı bir Treponema kültürü, bunun bir tavşan testisinde yetiştirilmesiyle elde edilir. Testis, treponemlerin hareketli kaldığı özel bir ortamda ezilir. Reaksiyon şu şekilde kurulur: doku (hareketli) treponemlerin bir süspansiyonu bir test tüpünde test serumu ile birleştirilir ve taze kompleman eklenir. Serum, test serumu yerine bir kontrol tüpüne eklenir. sağlıklı kişi diğerinde ise taze tamamlayıcı yerine inaktive edilmiş - inaktif - eklenir. Anaerobik koşullar (anaerostat) altında 35 °C'de bekletildikten sonra tüm test tüplerinden "ezilmiş" bir damla hazırlanır ve karanlık bir alanda hareketli ve hareketsiz treponemlerin sayısı belirlenir.
Tedavi: Penisilinler, tetrasiklinler, bizmut içeren ilaçlar.

PATOJENİK SPİROKETLER
Spiroketler bakterilerin aksine daha az yaygın bir mikroorganizma grubunu oluşturur.
Tüm spiroketler spor veya kapsül oluşturmaz. Gram (gram negatif) açısından lekelenmezler. Besin ortamlarında yetiştirmek zordur. Spiroketler - saprofitler organik atık bakımından zengin su kütlelerinde, çamurda, insan ağız boşluğunda ve bağırsaklarında bulunur. Morfolojik özelliklerine göre patojen spiroketler üç gruba ayrılır.

Treponema, düzenli bir spiral şeklindedir. Buna frengi spiroşeti de dahildir.
Borrelia, kıvrımlı ve daha geniş kıvrımlı kıvrımlı bir iplik şeklindedir. Bu grup tekrarlayan ateş spiroketlerini ve Vincent spiroketini içerir.
Leptospira, çok sayıda küçük kıvrıma ve karakteristik kanca şeklindeki uçlara sahiptir (leptospira bulaşıcı sarılık).

SİFİLİS SPİROKETİ
Frengiye neden olan ajan, ilk kez 1905'te F. Schaudin ve E. Hoffmann tarafından tanımlanan soluk spiroket Spirochaeta pallida'dır. 2 yıl önce, maymunlar üzerinde deneyler yaparken, frengi spiroketi D.K. Zabolotny tarafından keşfedildi.
Morfoloji ve renk özellikleri. Soluk renkli spiroket, küçük, tekdüze, düzenli kıvrımlara sahip, çok hassas, ince, zayıf şekilde kırılan bir ipliktir (ekte Şekil 104 ve 105).

Pirinç. 104. Karanlık bir alanda Treponema pallidum.
Ortalama olarak 6 ila 14 mikron uzunluğunda ve 0,25 mikron kalınlığındadır. Anilin boyalarıyla zayıf boyanabilirliği ve canlı durumda zayıf görünürlüğü nedeniyle soluk adını aldı. Bu özellikler, spiroketin gövdesindeki düşük nükleoprotein içeriği ve lipoidlerin zenginliğinden kaynaklanmaktadır. Renklendirmek için Romanovsky yöntemini kullanın (Şekil 105) veya önce bir tür mordana maruz bıraktıktan sonra boyayın. En iyi yöntem soluk bir spiroketin tespiti, karanlık bir görüş alanında yapılan bir çalışmadır. Taze malzemede, karanlık bir görüş alanına sahip bir ultramikroskopta incelendiğinde soluk spiroket, öteleme ve dönme hareketlerinin yanı sıra uzunlamasına eksen etrafında aktif hareketler sergiler.
Yetiştirme. Frengi spiroketi sıradan besin ortamlarında çoğalmaz. V. M. Aristovsky ve A. A. Geltser, bir parça beyin dokusunun eklenmesiyle tavşan serumundan oluşan sıvı besin ortamını başarıyla kullandılar. Ekimden sonra ortamın yüzeyi Vazelin ile doldurulur. Kültürlerde spiroketler daha kaba, daha kısadır ve polimorfizm açısından farklılık gösterir. Ortaya çıkan kültürler patojenik özelliklerden yoksundur ve patojenik özellikleri koruyan "doku" kültürlerinin aksine "kültürel" olarak adlandırılır.
özellikleri ve laboratuvarlarda tavşanlar üzerindeki pasajlarla muhafaza edilmektedir.
Rezistans. Soluk spiroket kurumaya ve yüksek sıcaklığa karşı zayıf bir dirence sahiptir. 45-48°'ye ısıtmak onu bir saat içinde, 55°'ye ısıtmak ise 15 dakikada öldürür. İLE Düşük sıcaklık daha az hassas. 10°C'de birkaç güne kadar canlı kalır. Dezenfektanların yıkıcı etkisi vardır. Kimyasallardan en güçlü etkisi %1-2'lik fenol çözeltisidir.
Hayvanlar için patojenite. I. I. Mechnikov ve D. K. Zabolotny, maymunlarda deneysel frengi elde eden ilk kişilerdi. Tavşanlar korneaya, gözün ön odasına, deriye, mukozaya vb. patolojik materyal enjekte edilerek enfekte edilebilir. Bu durumda hayvanlarda aşılama bölgesinde tipik skleroz (şankroid) şeklinde bir primer lezyon gelişir. .
Sifilizin patogenezi ve klinik tablosu. Enfeksiyonun tek kaynağı frengili bir kişidir. Hastalık hem doğrudan temasla (çoğunlukla cinsel) hem de frengi salgılarıyla kontamine olmuş nesneler yoluyla bulaşabilir. Ortak mutfak eşyalarından yemek yemek, ortak kaşık kullanmak vb. (dolaylı temas) evdeki frenginin yayılmasına katkıda bulunabilir.
Soluk renkli spiroket vücuda hasarlı mukoza ve deri yoluyla girer. 3-4 hafta sonra, giriş kapısı bölgesinde primer skleroz belirir - şankr (yoğun kenarları ve tabanı olan bir ülser - dolayısıyla şankr adı), bu da sifilizin birincil dönemini karakterize eder.
Daha sonra mikrop, lenfatik ve dolaşım yollarından vücuda nüfuz eder ve vücuda yayılır - ikinci dönem başlar. Bu dönem, üzerinde roseola, papüller, veziküller ve püstüllerin (sifilitler) ortaya çıktığı cilt ve mukoza zarlarında hasar ile karakterize edilir. İkinci dönem 2-3 aydan birkaç yıla kadar sürer. Frengi yeterince tedavi edilmezse üçüncü dönem başlar - zamklı. Gummalar (granülomlar), lenfositler, epiteloid ve plazma hücrelerinden oluşan hücresel birikimlerdir. Cildin kalınlığında, mukozada, iç kısımda olabilirler.
Diş etleri bazen büyük boyutlara ulaşır, etraflarındaki küçük damarların lümeni giderek azalır ve sonunda kapanır. Bu bakımdan diş eti hücrelerinin beslenmesi bozulur ve herhangi bir doku ve organda ülser ve yara oluşumu ile derin tahribat meydana gelir.
Bazı durumlarda sifiliz, ilerleyici felç ve tabes dorsalis şeklinde merkezi sinir sistemi lezyonları ile karakterize edilen dördüncü döneme girer. Frenginin klinik belirtileri, çoğu durumda cilt ve mukoza zarlarında ortaya çıkan lezyonların ağrısız olması, terapötik müdahale olmadan bile kaybolması, tekrarlaması ve sonunda üçüncü ve dördüncü dönemlerin ciddi lezyonlarını vermesiyle ayırt edilir.
Bağışıklık. İnsanlarda frengiye karşı doğuştan bir bağışıklık yoktur. Aktarılan hastalık aynı zamanda çoğu bulaşıcı hastalığı karakterize eden kazanılmış bağışıklık türünü de bırakmaz. Sifilizli bir hastanın ikincil enfeksiyonu sırasında, spiroketler ölmez, ancak varlığını sürdürür ve vücutta yayılır, birincil enfeksiyonun hayatta kalan spiroketleriyle birlikte organları ve dokuları enfekte eder. Bununla birlikte, sifiliz ile ikincil enfeksiyonda, reaksiyonun birincil biçimi olan şans mevcut değildir. Bu immünolojik duruma "saplayıcı bağışıklığı" denir.
Frengide “bağışıklık” ile patolojik değişikliklerin doğası ve vücudun immünolojik olarak yeniden yapılandırılmasını kastediyoruz. klinik tablo. Bu “bağışıklığın” mekanizmasına gelince; humoral faktörler Hastaların serumunda antikorlar (lizinler, aglütininler) tespit edilmesine rağmen.
Laboratuvar teşhisi. Sifilizin ilk döneminde tanı, karanlık bir alanda bakteriyoskopik inceleme veya şans eseri lekeli materyal yaymalarıyla konur.
Araştırma için, lezyonun daha fazla sayıda spiroket içeren derin kısımlarından doku sıvısının çıkarılması gerekir. Bunun için öncelikle şansın yüzeyini salin solüsyonuna batırılmış steril bir çubukla iyice silin, ardından ülserin alt kısmını hafifçe sıkın ve sıkın. az miktarda doku sıvısı. Bu başarısız olursa ülserin alt kısmı neşter veya keskin bir kaşıkla hafifçe kazınarak tahriş edilir. Elde edilen sıvı bir Pasteur pipeti ile emilir.
Bir sıvı damlası en iyi şekilde, parlak bir şekilde aydınlatılmış spiroketlerin morfolojisinin ve karakteristik hareketlerinin açıkça görülebildiği karanlık bir alanda incelenir.
Cinsel organlarda ve ağız boşluğunda (cinsel organlarda - Sp. refringens, ağız boşluğunda - Sp. microdentium) bulunan saprofitik spiroketler, morfolojileri ve hareket düzenleri bakımından soluk spiroketlerden farklıdır. Sp. refringens'in büyük bukleli daha kaba bir gövdesi vardır, ileri hareketi yoktur, Sp. microdentium, hareketinin doğası gereği soluk spiroketten farklıdır.
Grimsi beyaz spiroketlerin şeklinin ve kıvrımlarının siyah bir arka plan üzerinde açıkça görülebildiği Burri mürekkebiyle (bkz. sayfa 51) lekeler de hazırlayabilirsiniz.
Renkli bir preparatı incelemek için ince lekeler hazırlanır: bir cam slayt üzerine bir damla sıvı konularak, ikinci camın kenarı ile yüzeye yayılır (bir damla kandan bir smear hazırlarken olduğu gibi). Lekeler havada kurutulur, metil alkolde sabitlenir ve Romanovsky'ye göre 12-15 saat boyunca boyanır (s. 52): soluk spiroket pembeye döner, bu da onu maviye dönen diğer saprofitik spiroketlerden ayırt etmeyi mümkün kılar (bkz. Şekil 105).

Pirinç. 105. Şans akıntısında soluk spiroket. Romanovsky'ye göre boyama.

Preparatın bu kadar uzun süre kalıcı renklendirilmesi, soluk spiroketin anilin boyalarını iyi kabul etmemesiyle açıklanmaktadır.
Frenginin ikinci döneminde ciltte ve mukozalarda sifilitler görüldüğünde etkilenen bölgelerden doku suyu da alınarak spiroket varlığı açısından incelenir.
Enfeksiyonun başlangıcından 4-5 hafta sonra frengi teşhisinde en yaygın yöntem olan serolojik test yapılabilir.
Sifilizin serodiagnozu Wasserman reaksiyonu ve sediment reaksiyonlarına dayanmaktadır.
Wasserman'ın reaksiyonu. Wasserman reaksiyon tekniği, tamamlayıcı fiksasyon reaksiyon tekniğinden farklı değildir. Önemli bir fark, antijenlerin hazırlanma yönteminin yanı sıra bunların titrasyonudur.
Wassermann reaksiyonu için antijen olarak patolojik veya normal dokulardan alınan lipoid ekstraktları kullanılır. Sifilitik organlardan hazırlanan sözde spesifik antijenler, titrelerinin genellikle mililitrenin binde birine ulaşması nedeniyle daha yüksek aktivite ile ayırt edilir (titre 0.007, 1 ml başına 0.05, vb.). Spesifik olmayan antijenler daha az aktiftir, dolayısıyla titreleri daha düşüktür ve mililitrenin yüzde biri dahilindedir (örneğin, 1 ml'de titre 0,01, 0,02).
Wasserman reaksiyonunu gerçekleştirirken 3 antijen kullanılır (No. 1, 2 ve 3 kardiyolipin). Antijen No. 1'e özgü. Sifiliz ile enfekte olmuş bir tavşanın testis dokusundan ekstraksiyon yoluyla elde edilen sifilitik bir spiroketin lipitlerini içerir. 2 ve 3 numaralı antijenler spesifik değildir ve normal doku lipitleri içerir (%0,25-0,3 kolesterol ilavesiyle sığır kalp kaslarının alkollü ekstraktları). Cardiolipin antijeni saflaştırılmış bir preparattır; hızlı bir şekilde seyreltilmeli ve seyreltildikten sonra hafif opalesan olmalı ancak bulanık olmamalıdır. Antijen titresi, 1 ml fizyolojik solüsyonda bulunması gereken ve hemolitik sistem ve kompleman varlığında hemolizi geciktirmeyen miktarını ifade eder.
Örneğin, ampul üzerinde 0,05 ml'lik antijen titresi belirtiliyorsa, bu, işlem sırasında antijenin, ml sıvı başına 0,05 ml antijen olacak şekilde fizyolojik çözelti ile seyreltilmesi gerektiği anlamına gelir.

Antijenlerin çeşitli anti-tamamlayıcı özelliklere sahip olabilmesi nedeniyle, Wassermann reaksiyonunu gerçekleştirmeden önce kompleman yalnızca saf formunda değil, aynı zamanda antijenlerin varlığında da titre edilir. Wasserman reaksiyonu 3 antijenle gerçekleştirildiğinden kompleman her antijenle ayrı ayrı titre edilmelidir.
Wasserman reaksiyonunun modifikasyonu - Grigoriev-Rapoport reaksiyonu (Tablo 25). Bu reaksiyon, test serumunun tamamlayıcı aktivitesinin kullanımına dayanmaktadır. Reaksiyon, hastanın aktif (ısıtılmamış) serumunu (alındıktan sonra en geç 36 saat içinde) kullanır. Reaksiyonu gerçekleştirmek için antijenlere, hemolitik seruma ve iki kat gazlı bezden filtrelenmiş defibrinlenmiş, yıkanmamış koyun kanına ihtiyaç vardır.

Grigoriev - Rapoport reaksiyonunun şeması

Malzemeler (ml cinsinden)		Test tüpleri 2.
Aktif test serumu
Tuzlu
Antijene özgü, seyreltilmiş titre
Antijen spesifik değildir, titreye göre seyreltilir
Oda sıcaklığı 25 dakika boyunca 22°
Hemolitik sistem
Oda sıcaklığı 22° 25 dakika süreyle.

Serum kontrolünde hemoliz olmadığı durumlarda reaksiyon tekrarlanır ve 0,2 ml test serumuna 0,2 ml açıkça aktif negatif serum eklenir ve dolayısıyla eklenen fizyolojik çözeltinin hacmi buna göre azaltılır.
Deneyin sonuçları, antijeni içeren ilk iki test tüpünün okumalarına dayanarak reaksiyonun bitiminden hemen sonra dikkate alınır. Pozitif bir sonuç, hemolizin tamamen gecikmesi, negatif bir sonuç ise tam hemoliz ile karakterize edilir. Kontrol serumunda (antijensiz 3. tüp) tam hemoliz meydana gelmelidir.

Bu reaksiyonlara ek olarak, sedimanter reaksiyonlar, sifilizin serodiyagnozu için yaygın olarak kullanılmaktadır; bunun özü, hastanın inaktive edilmiş serumunun antijen ile etkileşimi olup, bunun sonucunda test tüpünde bir çökelti oluşur. Bunlardan Kahn ve Sachs-Vitebsky reaksiyonları en yaygın olarak kullanılmaktadır.
Kahn'ın tepkisi. Kahn reaksiyonunu gerçekleştirmek için aşağıdaki bileşenler gereklidir: 1) inaktif serum hasta bir kişinin kanı, 2) özel Kahn antijeni ve 3) salin solüsyonu.
Kahn antijeni, koyun kalbinin kaslarından elde edilen ve kolesterolün eklendiği bir lipoid özütüdür. Deneyden önce etikette belirtilen titreye bağlı olarak antijen aşağıdaki şekilde seyreltilir. Antijen temiz ve kuru bir tüpe dökülür, diğerine etikette belirtilen miktarda (1-1.1-1.2) fizyolojik çözelti dökülür. Daha sonra ikinci tüpteki salin solüsyonu hızlı bir şekilde antijeni içeren birinci tüpe dökülür (tersi geçerli değildir). Elde edilen karışım karıştırılarak 6-8 kez deney tüpünden deney tüpüne dökülerek oda sıcaklığında 10 dakika olgunlaşmaya bırakılır.
Denemeyi ayarlama. Bir standa altı aglütinasyon tüpü yerleştirilmiştir. İlk üç tüp (1., 2. ve 3.) deneysel, sonraki üç tüp (4., 5. ve 6.) kontroldür (antijen kontrolü). Seyreltilmiş antijen, olgunlaştıktan sonra mikropipet ile 3 test tüpü ve 3 kontrol tüpüne verilir. Antijen içeren mikropipet, duvarlarına temas etmeden kuru tüpün dibine indirilmelidir; bu, antijenin doğru şekilde ölçülmesini sağlar. 1. tüpe 0,5 ml, 2. tüpe 0,025 ml ve 2. tüpe 0,0125 ml antijen dökülür; 3 kontrol tüpüne sırasıyla aynı miktarda antijen dökülür. Tüm test tüplerine 0,15 ml test serumu, kontrol tüplerine ise aynı miktarda fizyolojik solüsyon eklenir. Test tüplerinin bulunduğu raf, serumun antijenle karışması için 3 dakika kuvvetlice çalkalanır ve 10 dakika boyunca 37°'deki bir termostata yerleştirilir. Termostattan çıkardıktan sonra birinci deney ve birinci kontrol tüplerine 1 ml fizyolojik solüsyon, ikinci ve üçüncü deney ve kontrol tüplerine ise 0,5 ml fizyolojik solüsyon ekleyin. Test tüplerinin içeriği tekrar çalkalanır ve reaksiyonların sonuçları dikkate alınır (Kahn reaksiyon şeması Tablo 26'da sunulmaktadır).
Not. Herhangi bir sayıda test serumu için bir antijen kontrolü gerçekleştirilir. Pozitif reaksiyon vakalarında serum kontrolü yapılır. Bu amaçla 0,1 ml miktarında bir test tüpüne boşaltılır, 0,3 ml fizyolojik solüsyon ilave edilir ve üç dakika çalkalanır.
Reaksiyon çıplak gözle, bir büyüteç veya aglütinoskop kullanılarak kaydedilir.
Tablo 26
Cahn reaksiyon şeması

Çıplak gözle reaksiyon dikkate alındığında, her test tüpü standdan çıkarılır ve hafifçe eğilerek ışık kaynağının önünde göz seviyesinin biraz üzerinde tutulur. Test serumu ile test tüplerinde pulların (çökelti) çökelmesi, pozitif bir Kahn reaksiyonunun göstergesi olarak hizmet eder ve artılarla gösterilir. Keskin bir pozitif reaksiyon dört artı (+ + + +) ile gösterilir - tüm test tüplerinde açıkça görülebilen pulların kaybı ve hafif yanardöner bir sıvı ile karakterize edilir. Pozitif bir reaksiyon üç artı (+ + +) ile gösterilir ve tüm test tüplerinde daha az belirgin pul çökelmesi ile karakterize edilir. İki artı (+ +) ile gösterilen zayıf pozitif reaksiyon, daha zayıf tortu oluşumu ve bulanık bir sıvıda küçük parçacıkların varlığı ile karakterize edilir. Bulanık bir sıvı içinde çok küçük asılı parçacıkların oluşması bir artı (+) ile gösterilir. Sıvıda tortu ve serbestçe asılı parçacıkların bulunmaması, negatif reaksiyonun bir göstergesidir ve eksi (-) ile gösterilir. Kontrol tüplerinde pul görülmemelidir.
Sachs-Vitebsky'nin SİTOKOL SEDİMANTER REAKSİYONU (Tablo 27). Bu reaksiyon için, inaktive edilmiş test serumuna ve sığırların kalp kaslarından elde edilen ve kolesterolün eklendiği lipoidlerin bir özütü olan Sachs-Vitebsky sitokolik antijenine sahip olmanız gerekir.
Tablo 27
Sitokolik Sachs-Vitebsky reaksiyonunun şeması