BAKTISUBTİL

Yugoslavya "Galenika"

Birleştirmek : Bir kapsül, Bacillus cereus IP5832 türünün saf kuru kültürünün en az bir milyar bitkisel sporunu içerir.

Eş anlamlılar: Flonivin - BS (Güney. "Galenika").

Özellikleri: Bacillus cereus, oral kullanım için sporojenik, patojen olmayan, yaşayan bir basildir. Normal insan bağırsak florasında yoktur ve oral uygulamadan sonra yaklaşık 48 saat içinde dış ortama salınır.Kapsül içinde B. cereus, mide asidinin etkisine karşı oldukça dirençli sporlar halinde bulunur. ve pepsinin yanı sıra pankreas enzimleri. Baktisubtil'in ana etki mekanizması mikrobiyal antagonizma ve enzim aktivitesidir. Enzimlerden bazıları bakteriyolitiktir (lyse Proteus, koli çubukları ve bazı patojenik stafilokok türleri), diğeri ise sindirim süreçlerini iyileştiren sindirim yeteneğine sahiptir. Enzimler glisitlerin, lipitlerin ve protidlerin (jelatin, peptonlar vb.) hidrolizini sağlar. Diyetteki yağlar lipaz ve lasitinaz tarafından parçalanır.

Sporlar jejunuma girdiğinde, ilacı ağızdan aldıktan sonraki ilk 2 saat içinde yaklaşık% 90'ı bitkisel formlara çimlenir, sonraki 6 saat içinde sporların geri kalan% 10'u Sporların çimlenmesine, enzim oluşumunun tezahürü eşlik eder ve antibiyotik aktivitesi. Hidrolitik diastazın etkisi altında şekerin hidrolizi nedeniyle, paslandırıcı floranın çoğalmasını ve patojenik bakterilerin olası gelişimini baskılayan asidik bir ortam yaratılır.

Bactisubtil'in yalnızca patojenik (örneğin, enteropatojenik E.coli) veya koşullu patojenik bağırsak mikroflorasına karşı antagonist olarak etki gösterdiğine dikkat edilmelidir. Bacillus IP 5832 suşu, tüm sülfonamidlere, izonikotinik asit hidrazide, nistatine ve birçok geniş spektrumlu antibiyotiğe (kloramfenikol, oksitetrasiklin, vb.) karşı genetik olarak dirençlidir.

Belirteçler: Geniş spektrumlu antibiyotiklerle tedavi (önleme ve tedavi), şişkinliğin tedavisi ve profilaksisi sırasında süperenfeksiyonun bir sonucu olarak bakteriyel ishal

röntgen muayenesinden önce emzirme, saprofitik mikrofloradan (örneğin Klebsiella) spesifik olmayan ishal; kronik spesifik olmayan kolit, enterit, enterokolit; bağırsaklarda amonyak ve diğer toksik ürünlerin oluşumunun eşlik ettiği karaciğer hastalıkları.

Uygulama ve dozaj : Üç yaşın altındaki yeni doğan çocuklara günde 3-4 kapsüle kadar reçete edilir; Kullanmadan önce kapsül açılmalı ve içindekiler oda sıcaklığındaki yiyeceklerle (yulaf lapası, meyve suyu, şekerli su) karıştırılmalıdır. Bactisubtil toksik değildir ve yüksek dozlarda bile yenidoğanlara doğumdan hemen sonra uygulanabilir. Kaza ihtimalinden dolayı (asfiksi vb.) çocuklara bütün, açılmamış kapsüller verilmemektedir.

“Şarbonun etken maddesi” konusunun içindekiler tablosu. Klinik bulgularşarbon enfeksiyonu. Bacillus cereus.":

Bacillus cereus. Bacillus cereus'un morfolojisi. Bacillus cereus'un kültürel özellikleri. Basil cereus zehirlenmesi kliniği. Bacillus cereus'un mikrobiyolojik tanısının ilkeleri. Basil cereus'un tanımlanması.

Basil cereus- doğada yaygın olarak bulunan bir toprak saprofit bakterisidir. Bakteriler sıklıkla gıda ürünlerine bulaşarak, Gıda zehirlenmesi. Zehirlenme fenomenine enterotoksin aracılık eder. Gıda ürünlerinin (genellikle sebzelerin) belirli ısıl işlem koşullarına dayanıklı sporlardan gelişen bakteriler tarafından oluşturulur. Bakteriler, spor çimlenmesi sırasında yalnızca in vivo olarak toksin üretirler. İÇİNDE son yıllar B. cereus'un ara sıra neden olduğu hastane enfeksiyonları da kaydedilmiştir - protez organları, kateterleri olan kişilerde, hemodinamik bozukluğu olan hastalarda ve ayrıca uzun süre sitostatik ve immünosupresan kullananlarda bakteriyemi, endokardit ve menenjit. Lezyonlar şiddetlidir ve sıklıkla ölümcüldür.

Bacillus cereus'un morfolojisi ve kültürel özellikleri

Morfolojik olarak Bacillus cereusşarbon basiline benzer; temel farklar hareketlilik ve hemolitik aktivitedir. Bulaşmalarda bakteriler çit deseninde düzenlenir. Büyüme için optimum sıcaklık 30 °C'dir; optimum pH 7-9,5. Agar üzerinde patojen, kenarları sivri uçlu "yayılmış" koloniler oluşturur; CA'da koloniler geniş bir hemoliz bölgesi ile çevrelenmiştir (bkz. Şekil 4 ek). Zamanla koloniler karakteristik mumsu bir görünüm kazanırlar [enlem. şimdi, balmumu, mum]. Sıvı ortamlarda yüzeyde hassas bir film, beyaz pul pul bir çökelti ve et suyunun bulanıklığı oluştururlar. Bakteriler yüksek proteolitik aktivite sergiler ve jelatini 1-4 günde sıvılaştırır; tüm suşlar lesitinaz ve asetoin üretir. Glikoz ve maltoz içeren ortamlarda asit oluştururlar.

Basil cereus zehirlenmesinin klinik belirtileri

Basil cereus iki tür besin zehirlenmesine (gastroenterit) neden olur.

Bacillus cereus zehirlenmesi ilk tip kısaltılmış bir şekilde ayırt edilir kuluçka süresi(yaklaşık 4-5 saat); Zayıflatıcı ishal ve kusma ile karakterizedir. Hastalık, çok sayıda mikroorganizmayla kontamine olmuş yiyecekleri yerken gelişir.

Bacillus cereus zehirlenmesiİkinci tip zehirlenmenin kuluçka süresi daha uzundur (yaklaşık 17 saat). Hastalar kramp tarzında karın ağrısı ve ishalden şikayetçidir. Bu semptomlar genellikle clostridia'nın neden olduğu gıda zehirlenmesi ile karıştırılır.

Bacillus cereus'un mikrobiyolojik tanısının prensipleri

Basil cereus'un tanısal belirtisiŞüpheli gıda ürünlerinde 1 g/ml üründe 10 5'ten fazla bakterinin veya 1 g/ml dışkı, kusmuk veya yıkama suyunda 10 2 -10 3 bakterinin tespitini göz önünde bulundurun. B. cereus ve B. anthracis arasındaki ana farklar hemolitik aktivite, hareketlilik, penisiline direnç, jelatinin hızlı sıvılaşması ve beyaz fareler için patojen olmamasıdır.

Zatsepilova Tamara Anatolyevna
MMA Eczacılık Fakültesi Farmakoloji Anabilim Dalı Doçenti. ONLARA. Seçenov

Dysbacteriosis, normalde steril olmayan boşlukları dolduran mikrofloranın mobil dengesinin ihlalidir ve deri kişi.

Disbakteriyoz durumunda normal mikroflora, patojenik ve çürütücü mikroorganizmaların aktivitesini baskılamaz; sindirim ve emilim süreçleri bozulur besinler bağırsak hareketliliği; vitamin sentezi bozulur; bağışıklık azalır. Disbiyozun nedenleri çeşitlidir: yetersiz beslenme, uzun süreli kullanım ilaçlar(antimikrobiyal vb.), radyasyon ve kemoterapi, toksinlerin vücuda girişi çevre(kurşun, kadmiyum, cıva vb.), stres koşulları, bağırsak enfeksiyonları, cerrahi müdahaleler, mide-bağırsak hastalıkları vb. ağız boşluğu, bağırsaklar, cinsel organlar ve idrar organları, ciltte buna karşılık gelen semptomlarla kendini gösterir. Aksine, disbiyoz gastrointestinal sistem, ağız boşluğu, ürogenital sistem, alerjik hastalıklara yol açar ve malign neoplazmların gelişme riskini artırır.

Normal mikrobiyoseozu eski haline getirmek için, canlı mikroorganizma kültürleri ve faydalı mikroorganizmaların büyümesini seçici olarak uyarmaya yardımcı olan çeşitli maddeler içeren müstahzarlar kullanılır.

Normal mikroflorayı eski haline getiren ilaçların kullanımına ilişkin endikasyonlar, disbiyozun neden olduğu veya tam tersine disbiyoza yol açan hastalıklar ve durumlardır: gastrointestinal hastalıklar (ishal, kabızlık, kolit, enterokolit, irritabl bağırsak sendromu, gastrit, duodenit, ülser mide ve duodenum), solunum organları, ürogenital sistem, alerjik hastalıklar, antibakteriyel ajanların uzun süreli kullanımı, hormonlar, NSAID'ler, akut bağırsak enfeksiyonları, gıda zehirlenmesi, malabsorbsiyon sendromu, mikrobiyosenozun düzeltilmesi ve bağırsaklarda operasyon öncesi ve sonrası cerahatli-septik hastalıkların önlenmesi , karaciğer, pankreas vb.

PROBİYOTİKLER (ÖBİYOTİKLER)

Canlı mikroorganizma kültürlerini içeren müstahzarlar. Probiyotikler normal mikrobiyosenozu geri kazandırır. Bağırsaklarda çoğalırlar, patojenik ve fırsatçı mikroorganizmaları inhibe ederler ve gelişme için uygun koşullar yaratırlar. normal mikroflora.

Probiyotiklerin varlığında antikorlar (IgA) uyarılır ve lökositlerin fagositik fonksiyonu aktive edilir. Probiyotikleri oluşturan mikroorganizmalar patojenik ve toksik değildir ve gastrointestinal sistemin tüm kısımlarından geçerken canlı kalırlar. Probiyotik preparatlara dahil edilen mikroorganizmaların bileşimi çeşitlidir ve bu nedenle şartlı olarak birkaç gruba ayrılabilirler.

1. Tek bileşenli ilaçlar:

Bir tür bakteri türü içeren müstahzarlar.

Kolibakterin(Escherichia coli suşu M 17), Bifidumbacterin (Bifidobacterium bifidum suşu 1).

Aynı türden birden fazla bakteri türünü içeren preparatlar.

Açlakt, Atsipol, Laktobakterin aktif laktobasil türlerinin bir karışımını içerir.

Sorbe edilmiş ilaçlar.

Bu, özel bir dozaj formundaki tek bileşenli ilaç türlerinden biridir.

Bifidumbakterin forte Ve Probifor bir taşıyıcı - taş aktif karbon üzerine adsorbe edilmiş aktif Bifidobacterium bifidum No. 1 bakterisini içerir. Kömür parçacıkları üzerinde immobilize edilen bifidobakteriler, kalın bağırsağın mukozasında hızla kolonize olur ve yüksek lokal kolonizasyon sağlar. İlaçlar çok çeşitli patojenik ve fırsatçı mikroorganizmalara karşı antagonizma sergiliyor, bağırsaklardaki toksinleri adsorbe ediyor ve uzaklaştırıyor.

2. Çok bileşenli ilaçlar

Çeşitli bakteri türlerinden oluşurlar.

Lineks— canlı liyofilize bakteri Bifidobacterium infantis v. liberorum, Lactobacillus acidophilus, Enterococcus faecium. Linex'in avantajı antibiyotiklerle ve diğer kemoterapötik ajanlarla eş zamanlı alınabilmesidir.

Bificol birlikte yetiştirilen canlı bifidobakteriler ve Escherichia coli'den oluşan mikrobiyal bir kütle içerir.

Bifiform Bifidobacterium longum ve Enterococcus faecium içerir.

Bu kombinasyon bağırsak mikroflorasını normalleştirir ve önemli sayıda patojenik ve fırsatçı bakteri türünün baskılanmasını sağlar. Linex ve Bifiform, kabuğu mide suyunun etkisine dayanıklı özel kapsüllerde üretilir. Bu, bakterilerin doğrudan bağırsaklara salınmasını sağlar.

3. Rekabetçi ilaçlar

Baktisubtil. Bacillus cereus IP 5832 bakterisinin sporlarını içerir.
Sporlar mide suyuna dayanıklıdır. Bakteri sporlarının çimlenmesi bağırsaklarda meydana gelir. Bitkisel bakteri formları, asidik bir ortamın oluşumuna katkıda bulunan, çürüme ve aşırı gaz oluşumunu önleyen enzimler üretir. Sporların çimlenmesine yoğun antibiyotik madde üretimi eşlik eder. Bacillus cereus IP 5832, Proteus, Escherichia coli, Staphylococcus aureus cinsi bakterilere karşı belirgin bir antagonistik etki gösterir.

EnterolÇok çeşitli bakterilere karşı doğrudan antimikrobiyal etkiye sahip olan Saccharomyces boulardii mikroorganizmalarını içerir: Clostridium difficile, Candida albicans, Candida krusei, Candida pseudotropicalis, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Yersinia enterocolitica, Escherichia coli, Shigelladysenteriae, Staphylococcus a ureus ve protozoa: Entamoeba histolitica, Lambliae.

Baktisporin, Sporobakterin Escherichia, Staphylococcus, Streptococcus, Proteus, Klebsiella ve diğer mikroorganizmaların gelişimini baskılayan bir protein antibiyotiği olan antibakteriyel bir madde salgılayan bir Bacillus subtilis süspansiyonu içerir.

PREBİYOTİKLER

Gastrointestinal sistemde bulunan mikroorganizmaların büyümesi ve aktivitesi üzerinde olumlu etkisi olan çeşitli maddeler. Prebiyotikler insan sindirim enzimleri tarafından hidrolize edilmez ve ince bağırsağın üst kısımlarında emilmez. Ulaşırlar alt bölümler bağırsaklarda bulunur ve esas olarak bifidobakteriler tarafından emilir, diğer mikroorganizma türleri tarafından erişilemez kalır.

Prebiyotikler ksilitol, sorbitol, fruktooligosakkaritler, galaktooligosakkaritler, laktuloz, lasitol, inülin, valin, arginin, glutamik asit, diyet lifidir. Prebiyotikler süt ürünleri, mısır gevreği, tahıllar, ekmek, soğan, hindiba, sarımsak, fasulye, bezelye, enginar, muz, yer elması vb. gıdalarda bulunur. Mikroorganizmalar için enerji kaynağı görevi görürler. Prebiyotikler bifidobakteriler tarafından asetik, laktik ve diğer asitlere fermente edilir, bu da kolondaki pH'ın düşmesine neden olur ve salmonella gibi diğer bakteri türlerinin gelişimi için elverişsiz koşullar yaratır. Ortaya çıkan asidik ürünler ve diğer metabolitler, paslandırıcı mikrofloranın gelişimini baskılar. Sonuç olarak patojenik bakteri ve toksik metabolitlerin (amonyak, skatol, indol vb.) kolonilerinin sayısı azalır. Prebiyotikler toksik değildir ve uzun süre kullanılabilir.

Laktuloz(Duphalac, Normaze, Portalac), galaktoz ve fruktoz kalıntılarından oluşan sentetik bir oligosakarittir. Laktuloz kalın bağırsağa değişmeden girer. Kolonun mikroflorası laktulozu hidrolize ederek asitleri (laktik, kısmen formik ve asetik) oluşturur. Aynı zamanda kolondaki ozmotik basınç artar ve pH değeri düşer, bu da amonyum iyonlarının tutulmasına, amonyağın kandan bağırsağa geçmesine ve iyonlaşmasına yol açar. Laktulozun arka planına karşı, dışarıdan getirilen bifidobakteriler ve laktobasillerin aktif bir çoğalması ve ayrıca doğal bağırsak mikroflorasının büyümesinin uyarılması söz konusudur.

Hilak kalesi normal bağırsak mikroflorasının (Escherichia coli, Streptococcus faecalis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus helveticus) metabolik ürünlerinin bir konsantresini içerir. Bu maddeler bağırsak epiteli için bir besin kaynağıdır, yenilenmesini destekler ve işlevini iyileştirir, pH ve su-elektrolit dengesini normalleştirir, normal mikrofloranın yenilenmesine yardımcı olur ve patojenik mikroorganizmaların büyümesini baskılar. İlaç, IgA sentezini artırarak bağışıklık sistemini uyarır.

KOMBİNE İLAÇLAR (SİNBİYOTİKLER)

Bu ilaçlar probiyotikler, prebiyotikler ve diğer maddeleri içerir.

Bifiliz Bifidobakteriler ve lizozim içerir. İkincisi patojenik mikroorganizmaların aktivitesini bastırır, bu arka plana karşı bifidumbakteriler bağırsaklarda aktif olarak kolonileşmeye başlar.

Normoflorin-L Ve Normoflorin-B canlı lakto ve bifidobakterileri ve bunların kültürel yaşam alanlarını (orta derecede sindirilmiş kazein hidrolizatı, peptidler, organik asitler, vitaminler, enzimler), prebiyotikler - bakteri üremesinin ve ayrışmayan metabolizmanın aktivatörleri ince bağırsak ve değişmeden kalın bağırsağa ulaşır.

Polibakterin yedi tür lakto ve bifidobakteri, yağsız süt ve Kudüs enginar konsantresi içerir.

Mikrobiyosinozu eski haline getirmek uzun ve karmaşık bir süreçtir, bu nedenle eczacı hastayı bu ilaçların dozaj rejimlerine ve doktor tarafından reçete edilen diğer tüm reçetelere sıkı sıkıya bağlı kalma konusunda uyarmalıdır.

Buluş tıp alanıyla yani mikrobiyolojiyle ilgilidir ve bakteriyolojik laboratuvarlarda Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) türünün antagonist aktivitesini tespit etmek için kullanılabilir. Birlikte kuluçkalama, saf bir kültürde izole edilmiş Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun fizyolojik bir çözeltisinde ve hastanın dışkısından fırsatçı bir patojenik mikroorganizmanın (OPM) izole edilmiş saf kültüründe gerçekleştirilir. Ortaya çıkan karışım, 0,01 U/ml konsantrasyonda penisilin içeren ve içermeyen besleyici agar üzerine Gold kullanılarak ekilir ve penisilin içermeyen ortamdaki UPM miktarına kıyasla penisilin içeren ortamdaki UPM miktarında bir azalma tespit edilirse Bacillus cereus IP 5832 suşunun UPM suşuna karşı antagonistik aktivitesinin varlığı belirlenirken (ATCC 14893), öbiyotiğin bağırsak disbiyozu testi sırasında hastadan izole edilen UPM suşuna karşı etkili olduğu değerlendirilir. Buluş, UPM test kültürlerinin çimlenmesinden ödün vermeden Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) türünün baskılanmasını sağlar. 3 masa

Buluş tıp alanıyla, yani mikrobiyolojiyle ilgilidir ve ana aktif madde olan ebiyotiklerin etkinliğinin bireysel olarak değerlendirilmesi amacıyla Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) türünün antagonist aktivitesini tanımlamak için bakteriyolojik laboratuvarlarda kullanılabilir. prensibi Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşu olup, bağırsak disbiyozuna yönelik bir çalışma sırasında bir hastadan izole edilen fırsatçı mikroorganizmalarla ilişkilidir. Buluş aynı zamanda gastroenterolojide ana aktif bileşeni Bacillus cereus türü IP 5832 (ATCC 14893) olan ebiyotiklerin bağırsak disbiyozunun tedavisinde bireysel seçimi için de kullanılabilir.

Değişmiş bağırsak mikrobiyosenozunu düzeltmeye yönelik ilaçlar arasında patojenik ve fırsatçı mikroorganizmaları baskılamayı amaçlayan öbiyotikler önemli bir yer tutar. Çoğu zaman, eubiyotikler, normal bağırsak mikroflorasının temsilcisi olmayan, çekildikten hemen sonra elimine edilen ve lizozim, proteolitik enzimler ve bakteriyosinlerin üretimi nedeniyle ilgisiz mikroorganizmaların güçlü antagonistleri olan Bacillus cinsinin temsilcilerini içerir. Basilin, patojenik enterobakterileri ve bağırsak biyotopunu kolonize eden bazı fırsatçı mikroorganizmaları en etkili şekilde bastırdığı bilinmektedir: S. aureus, Candida spp., E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae ve diğer fırsatçı enterobakteriler.

Birçok ülkede en yaygın kullanılan öbiyotik ilaçlardan biri, ana etken maddesi Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) türü olan “Baktisubtil” (Fransa) ilacıdır. Ana etken maddesi aynı zamanda Bacillus cereus suşu IP 5832 (ATCC 14893), BS Üreticisi: Galenika, A.D., Sırbistan olan eubiyotik "Flonivin" de bilinmektedir.

Bacillus cinsinin endüstriyel suşları, bağırsak epitel hücrelerine yapışma özellikleri zayıf olduğundan biyofilm oluşturmazlar. Bacillus cereus suşunun aktivitesinin bağırsak lümeninde meydana geldiği ve mukozaya bağlanma bölgeleri için rekabetçi ilişkilerle değil, öncelikle bu suşun yüksek antagonistik aktivitesiyle ilişkili olduğu gerçeğine dayanarak, o zaman öbiyotiklerin etkinliği, Ana aktif prensibi Bacillus cereus suşu IP 5832 (ATCC 14893) olan, bağırsak disbiyozunun tanısı sırasında bir hastadan izole edilen fırsatçı mikroorganizmalarla ilgili olarak Bacillus cereus IP suşunun antagonistik aktivitesinin varlığı veya yokluğu ile değerlendirilebilir. 5832 (ATCC 14893).

Bakteriyosinler veya bakteriyosin benzeri maddeler basiller tarafından esas olarak hücre dışı olarak üretilir ve besin ortamında birikme kapasitesine sahiptir. Bu sayede teorik olarak basillerin antagonistik aktivitesi, geleneksel olarak yalnızca probiyotik lakto ve bifidobakterilerin antagonizmasını tespit etmek için kullanılan doğrudan veya gecikmeli antagonizma yöntemlerinin çeşitli modifikasyonları kullanılarak tespit edilebilir: çizgi yöntemi, Frederick gecikmeli antagonizm yöntemi ve ara öldürme üretici suşun kloroform ile çift katmanlı agar yöntemi.

Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) türünün antagonist aktivitesini belirlemek için yukarıdaki yöntemleri kullandık.

Basilin antagonist aktivitesini doğrudan antagonizma yöntemiyle değerlendirmek için, günlük B.cereus kültürünün bir süspansiyonu, optik bulanıklık standardı GISC'ye göre 1x109 konsantrasyonunda besin agarı içeren bir Petri kabının çapı boyunca çizildi. adını almıştır. L.A. Tarasevich. Bağırsak disbiyozunun tanısı sırasında izole edilen fırsatçı mikroorganizmaların kültürleri dik olarak ekildi. 37°C'de 24 saat inkübe edildi. Antagonistik aktivitenin varlığı, test suşlarında büyüme geriliğinin varlığıyla dikkate alınmıştır.

Gecikmiş antagonizm yöntemini kullanarak basillerin antagonistik aktivitesini değerlendirirken, fırsatçı mikroorganizmaların test kültürleri, basilin aşılanmasından 24 ve 48 saat sonra aşılandı.

Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun antagonizmasını değerlendirmek için dikkate alınan seçeneklerde, kendi verilerimize göre suş, fırsatçı mikroorganizmaların (80 suş) test kültürlerine karşı antagonistik aktivite sergilemedi. Fırsatçı mikroorganizmaların bazı aktif olarak hareketli türleri (P. aeruginosa, E. coli) basil kolonilerinin yüzeyinde büyüdü.

Basil metabolitlerinin canlı kültürlere göre daha güçlü antagonistik etkiye sahip olduğuna inanılmaktadır. Bu nedenle üretici suşun kloroform ile ara öldürülmesiyle geciktirilmiş antagonizma yöntemini de kullandık. Bacillus cereus suşu IP 5832 (ATCC 14893), Petri kaplarına dökülen katılaşmış %1,5 besinli agara aşılandı ve 37°C'de 48 saat büyütüldü. İnkübasyondan sonra, elde edilen kültür kloroform buharı ile öldürüldü ve fırsatçı mikroorganizmanın test kültürünün bir süspansiyonu tabakalandı. Bunu yapmak için, optik bulanıklık standardına göre 10 8 hücrelik nihai konsantrasyondaki 0,1 ml kültürü eritilmiş ve 46-48°C sıcaklığa soğutulmuş 2,5-3 ml %0,7 yarı sıvı agar ile karıştırın. Bakteriyosin üretme kabiliyeti varsa, Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) kolonisi çevresinde test suşunun büyüme inhibisyonu bölgesi gözlemlenmelidir. Basilin antagonist aktivitesi tespit edilmedi çünkü Varsayılan bakteriyosinlerin bulunduğu ortamın yüzeyinde UPM "çimen" test kültürlerinin büyümesi kaydedildi.

Benzer verileri, basillerin çim ile aşılandığı, ardından UPM test kültürünün öldürülüp katmanlandırıldığı değiştirilmiş çift katmanlı agar yöntemini kullanarak elde ettik.

Teknik açıdan talep edilen yönteme en yakın olanı, Bacillus subtilis ve Escherichia coli içeren probiyotiklerin fırsatçı mayaya karşı antagonistik aktivitesini tanımlamak için açıklanan ters agar yöntemidir. Bunu yapmak için Bacillus subtilis ve Escherichia coli türleri katı bir besin ortamına ekilir, 2 gün sonra agar ters çevrilir ve üzerine yerleştirilir. ters tarafönceden titre edilmiş bir tohum dozunda maya aşılayın. Aerobik koşullar altında 37°C'de 24 saat inkübe edin. Antagonizmin varlığı, probiyotik suşları olmayan benzer bir aşılamayla karşılaştırıldığında maya büyümesinin baskılanmasıyla niceliksel olarak tespit edilir.

Ters agar yöntemi, Bacillus subtilis ve Escherichia coli içeren probiyotiklerin antifungal etkilerini değerlendirmek için tanımlanmış ve test edilmiştir. Ancak diğer fırsatçı mikroorganizmalar (fırsatçı maya değil) üzerindeki antagonist etkisi değerlendirilmemiştir. Ek olarak orijinal yöntem, agar üzerinde 70'ten fazla koloninin gelişmeyeceği bir maya tohum dozunun seçilmesini içerir. Bu, her bir türü test ederken titrasyon ve ek araştırma gerektirir. Öbiyotik üretici suş Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) ve bağırsak disbiyozunun tanısı sırasında izole edilen fırsatçı mikroorganizmaların 80 test kültürü kullanılarak bu yöntemin test edilmesi, Bacillus cereus IP 5832 suşunun tek bir antagonistik aktivite vakasını tanımlamamıza izin vermedi ( ATCC 14893).

Lakto ve bifido içeren probiyotiklerin antagonistik aktivitesini değerlendirmek için, bastırılmış UPM'lerin sayısını belirlemek için katı bir besin ortamına daha sonra tohumlama anlamına gelmeyen çeşitli dolaylı değerlendirme yöntemleriyle sıvı bir ortamda ortak yetiştirme yöntemleri de açıklanmaktadır.

Bu nedenle, yazarlara göre, probiyotik lakto ve bifidobakterilerin antagonistik aktivitesini tespit etmek için bilinen yöntemlerin hiçbiri, Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun bir hastadan izole edilen fırsatçı mikroorganizmalara karşı antagonistik aktivitesini tespit etmemize izin vermedi. Bağırsak disbiyozu için bir çalışma.

Literatürde, "Baktisubtil" ilacının veya ana aktif prensibi Bacillus cereus suşu IP 5832 (ATCC 14893) olan diğer öbiyotik ilaçların, bir bakteriden izole edilen fırsatçı mikroorganizmalara karşı etkinliğini bireysel olarak değerlendirmenin bir yolunu da bulamadık. Disbakteriyoz bağırsakları için yapılan bir çalışma sırasında spesifik bir hasta.

Buluşun amacı, Bacillus cereus suş IP 5832'nin (ATCC 14893) bağırsak disbiyozuna yönelik bir çalışma sırasında belirli bir hastadan izole edilen fırsatçı mikroorganizmalara karşı antagonistik aktivitesini tanımlamaktır.

Buluşun teknik sonucu, test kültürlerinin çimlenmesini tehlikeye atmadan öbiyotik suş Bacillus cereus IP 5832'nin (ATCC 14893) baskılanmasıdır.

Teknik sonuç, deneğin dışkısından fırsatçı mikroorganizmaların saf bir kültürünün izole edilmesi, ardından Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) türünün saf bir kültür içinde izole edilmesi ve ardından Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) türünün ortak olarak izole edilmesiyle elde edilir. -fırsatçı mikroorganizmaların her bir suşuyla fizyolojik çözelti içinde inkübe edilir, ardından 0,01 U/ml konsantrasyonunda penisilin içeren ve penisilin içermeyen besleyici agar üzerine altın ekim yapılır ve bir ortamda fırsatçı mikroorganizmaların sayısında bir azalma tespit edilirken Penisilin içermeyen bir ortamdaki fırsatçı mikroorganizmaların sayısıyla karşılaştırıldığında, Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun fırsatçı bir mikroorganizma suşuna karşı antagonistik aktivitesinin varlığı belirlenirken, öbiyotiğin bir fırsatçı mikroorganizmaya karşı etkili olduğu değerlendirilir. izole edilen fırsatçı bir mikroorganizmanın türü bu hastanın bağırsak disbiyozunu incelerken.

Yöntem şu şekilde gerçekleştirilir:

Standart yöntemler kullanılarak, hastanın dışkısından saf bir fırsatçı mikroorganizma kültürü ve eubiyotiklerin ana aktif prensibi olan saf bir kültür içinde Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) türü izole edilir. Eubiyotik "Baktisubtil"den saf bir Bacillus cereus suşu IP 5832 (ATCC 14893) kültürünü izole ettik. Optik bulanıklık standardına göre 109 hücrelik nihai konsantrasyondaki fizyolojik çözelti içindeki fırsatçı bir mikroorganizmanın bir test kültürünün 1 ml süspansiyonu, aynı konsantrasyondaki 1 ml Bacillus cereus süspansiyonu ile karıştırılır. Karışım 48 saat boyunca 37°C'de inkübe edilir. Daha sonra Gold'a göre ekim yapılır. Bunu yapmak için, kantitatif tohumlama, basilleri baskılamak için 0,01 U/ml konsantrasyonunda penisilin içeren besleyici agar üzerinde 3 mm çapında ve 2 ul kapasiteli bir ölçüm döngüsü kullanılarak ve basili kontrol etmek için antibiyotik içermeyen bir ortamda gerçekleştirilir. Her iki kültür türünün de büyümesi. UPM ve basillerin (besin bazı eksikliği) büyümesini baskılayan diğer olası faktörleri dışlamak için, benzer koşullar altında inkübasyondan sonra monokültürlerin kontrollü ekimi paralel olarak gerçekleştirilir. Yetiştirilen mikroorganizmaların sayısı tablo 1'e göre hesaplanır - 1 ml sıvıdaki bakteri sayısını belirlemek için hesaplama tablosu. Hastanın dışkısında birden fazla UPM tespit edilmesi durumunda UPM'lerin her biri ile anlatılan prosedür gerçekleştirilir. Penisilinli besiyerinde fırsatçı mikroorganizma sayısında kontrol ekimine göre bir azalma tespit edilirse Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun, tohumdan izole edilen fırsatçı mikroorganizma suşuna karşı antagonistik aktivitesinin varlığı belirlenir. Bağırsak disbiyozu çalışması sırasında hasta. Bacillus cereus suşu IP 5832'nin (ATCC 14893) antagonistik aktivitesinin varlığı veya yokluğu, ana aktif prensibi Bacillus cereus suşu IP 5832 (ATCC 14893) olan öbiyotiklerin bir suşuna karşı etkinliğini belirlemek için bir değerlendirme kriteridir. Bağırsak disbiyozu araştırması sırasında belirli bir hastadan izole edilen fırsatçı bir mikroorganizma. Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) türünün antagonistik aktivitesinin varlığında, eubiyotik, bağırsak disbiyozu testi sırasında bu hastadan izole edilen fırsatçı bir mikroorganizma türüne karşı etkili olarak değerlendirilir.

Önerilen yöntemin temel ayırt edici özellikleri şunlardır:

Deneğin dışkısından saf bir fırsatçı mikroorganizma kültürü izole edin;

Eubiyotiklerin ana aktif prensibi olan Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) saf kültürü izole edilir;

Daha sonra Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşu, fizyolojik çözelti içerisinde fırsatçı mikroorganizmaların her bir suşu ile birlikte inkübe edilir;

Karışımın Gold'a göre bir besin ortamına daha sonra ekilmesi;

Ekim, 0,01 U/ml konsantrasyonunda penisilinli ve penisilinsiz besin agarı üzerinde gerçekleştirilir;

Penisilin içeren bir ortamdaki fırsatçı mikroorganizmaların sayısında, penisilin içermeyen bir ortamdaki fırsatçı mikroorganizmaların sayısına kıyasla bir azalma tespit edilirse, Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun fırsatçı mikroorganizma türlerine karşı antagonistik aktivitesinin varlığı belirlendi;

Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun fırsatçı mikroorganizma türlerine karşı antagonistik aktivitesinin varlığında, eubiyotik, bağırsak disbiyozu testi sırasında belirli bir hastadan izole edilen bir fırsatçı mikroorganizma türüne karşı etkili olarak değerlendirilir.

Temel ayırt edici özellikler ile elde edilen sonuç arasındaki neden-sonuç ilişkisi:

Bacillus cereus suş IP 5832'nin (ATCC 14893) fırsatçı mikroorganizmalara karşı antagonistik aktivitesinin belirlenmesinin bireyselliği ve buna karşılık, ana aktif prensibi Bacillus cereus suşu IP 5832 (ATCC) olan ebiyotiklerin etkinliğini değerlendirmenin bireyselliği 14893) bağırsak disbiyozu çalışması sırasında bir hastadan izole edilen fırsatçı mikroorganizmalara karşı, fırsatçı mikroorganizmaların deneğin dışkısından saf bir kültürde izole edilmesi ve saf bir Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) kültürünün izole edilmesi ve ardından salin içinde ortak inkübasyon ve Gold'a göre bir besin ortamı üzerine kaplama.

Bastırılmış UPM'lerin sayısını belirlemek için Gold'a göre besin ortamına ekim yapılması gerekir.

0,01 U/ml konsantrasyonunda penisilin içeren besleyici agar, test kültürlerinin çimlenmesinden ödün vermeden Bacillus cereus IP 5832'nin (ATCC 14893) öbiyotik suşunu bastırmanıza olanak tanır, bu da B. cereus'un antagonistik aktivitesini tespit etmeyi mümkün kılar fırsatçı mikroorganizmalara karşı

Test kültürleri olarak, bağırsak disbiyozu olan hastalardan izole edilen fırsatçı mikroorganizma türlerini inceledik - her biri S. aureus, S. epidermidis, Klebsiella spp., tipik özelliklere sahip E. coli, değiştirilmiş enzimatik aktiviteye sahip E. coli, Enterobacter spp'den oluşan 20 izolat ., Citrobacter spp., P. aeruginosa.

Optik bulanıklık standardına göre 109 hücrelik nihai konsantrasyondaki fizyolojik çözelti içindeki 1 ml UPM test kültürleri süspansiyonu, aynı konsantrasyondaki Bacillus cereus türü IP 5832'nin (ATCC 14893) 1 ml'lik bir süspansiyonu ile karıştırıldı. Basillerin veya fırsatçı bakterilerin çoğalmasını önlemek için eklem inkübasyonu için herhangi bir sıvı kültür ortamının kullanılmasının uygun olmadığı değerlendirildi. Karışım 48 saat boyunca 37°C'de inkübe edildi. Bu süre zarfında UPM'nin basil metabolitlerinin etkisi altında öldüğü varsayılmıştır. Kantitatif tohumlama, Gold'a göre 3 mm çapında ve 2 ul kapasiteli bir ölçüm döngüsü kullanılarak gerçekleştirildi. Basilleri baskılamak için antibiyotikli besin agarına ve her iki kültür türünün büyümesini kontrol etmek için antibiyotiksiz ortama ekildiler. UPM ve basillerin (besin bazı eksikliği) büyümesini baskılayan diğer olası faktörleri dışlamak için, benzer koşullar altında inkübasyondan sonra monokültürlerin kontrol ekimi paralel olarak gerçekleştirildi. Yetiştirilen mikroorganizmaların sayısı tablo 1'e göre hesaplandı - 1 ml sıvı 1'deki bakteri sayısını belirlemek için hesaplama tablosu.

Tohumlama ortamında basillerin büyümesini baskılamak için, önceden seçici bir katkı maddesi seçilmişti - penisilin ve streptomisine karşı yaygın dirence ilişkin verilere dayanarak, basilleri baskılayan ancak mikroorganizmaların büyümesini engellemeyen bir konsantrasyonda bir antibiyotik. fırsatçı bakterileri (özellikle enterobakterileri) test etti. Eritilen ve 46-48°C'ye soğutulan besin agarına farklı konsantrasyonlarda antibiyotikler eklendi. Ortamı streptomisin ile test ederken ilaç, 1,0 U/ml, 0,5 U/ml, 0,25 U/ml ortam konsantrasyonlarında eklendi. 25 UPM kültürü ve Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) kültürü, antibiyotik içeren ve içermeyen ortamlarda 109 hücre/ml konsantrasyonunda aşılandı. Bununla birlikte, basilin büyümesi tamamen baskılanmamıştır - ortamın 1.0 U/ml'lik maksimum streptomisin konsantrasyonunda 109'dan 104 hücre/ml'ye. Aynı zamanda disbiyoz tanısı sırasında izole edilen UPM kültürleri (Klebsiella spp., Enterobacter spp., atipik E. coli, Citrobacter spp., S. aureus) 74 (%96) testte streptomisin ile değişen derecelerde baskılanmıştır ( Tablo 2 - Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşu ve fırsatçı mikroorganizmaların eşzamanlı büyümesini baskılamak için antibiyotik seçimi).

Ortamı penisilinle test ederken ilaç, 0,001 U/ml, 0,01 U/ml, 0,1 U/ml, 1,0 U/ml ortam konsantrasyonlarında eklendi. Ekim ve sonuçların kaydedilmesi benzer şekilde gerçekleştirildi. Fırsatçı enterobakteriler, ortamın maksimum 1,0 U/ml'lik penisilin konsantrasyonuyla bile baskılanmadı. S. aureus'un daha yoğun baskılandığı gözlendi. 0,01 U/ml besin ortamı penisilin konsantrasyonunda, S. aureus da dahil olmak üzere fırsatçı bakterilerin kabul edilebilir düzeyde çimlenmesi ve Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) türünün eş zamanlı tamamen baskılanması gözlendi (Tablo 2 - Antibiyotik seçimi) Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) türünün baskılanması ve fırsatçı mikroorganizmaların eş zamanlı büyümesinin baskılanması için).

Bacillus cereus suşu IP 5832'nin (ATCC 14893) fırsatçı mikroorganizmalara karşı antagonistik aktivitesinin varlığında, eubiyotik, bağırsak disbiyozu testi sırasında belirli bir hastadan izole edilen bir fırsatçı mikroorganizma türüne karşı etkili olarak değerlendirilir.

Bacillus cereus IP 5832 suşunun antagonist aktivitesini, fırsatçı bir mikroorganizma suşuyla ilişkili olarak ana aktif prensibi Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) olan öbiyotiklerin etkinliğinin bireysel değerlendirmesi için bir değerlendirme kriteri olarak seçtik. bağırsak disbiyozu için yapılan bir çalışma sırasında bu hastadan izole edilmiştir (ATCC 14893). Bu, Bacillus cereus suşunun aktivitesinin bağırsak lümeninde meydana gelmesi ve esas olarak bu suşun yüksek antagonistik aktivitesi ile ilişkili olması ve mukozaya bağlanma bölgeleri için rekabetçi ilişkilerle olmamasıyla açıklanmaktadır.

Önerilen yöntemin temel ayırt edici özellikleri yenidir ve test kültürlerinin çimlenmesinden ödün vermeden eubiyotik Bacillus cereus suşu IP 5832'nin (ATCC 14893) baskılanmasını mümkün kılar; bu da, bakterinin antagonist aktivitesinin tanımlanmasını sağlar. ana aktif prensibi Bacillus cereus olan ebiyotiklerin etkinliğinin bireysel değerlendirilmesi için kullanılabilen bir hastadan bağırsak disbiyozu için yapılan bir çalışma sırasında izole edilen fırsatçı mikroorganizmalarla ilgili olarak Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) eubiyotik suşu IP 5832 (ATCC 14893) suşu, bağırsak disbiyozu muayenesi sırasında bir hastadan izole edilen fırsatçı mikroorganizmalarla ilişkili olarak.

Özel uygulama örnekleri:

Şu tarihte: bakteriyolojik araştırma bağırsak disbiyozuna yönelik dışkı testinde (No. 247) 5x106 CFU/g miktarında Citrobacter freundii ortaya çıktı.

Optik bulanıklık standardına göre 10 hücrelik nihai konsantrasyonda fizyolojik çözelti içinde hastanın dışkısından izole edilen saf Citrobacter freundii kültürünün 1 ml süspansiyonu, saf Bacillus cereus kültürünün 1 ml süspansiyonu ile karıştırıldı. aynı konsantrasyonda öbiyotik “Bactistatin”den izole edilen IP 5832 (ATCC 14893) suşu. Karışım 48 saat boyunca 37°C'de inkübe edildi. Daha sonra, basilleri baskılamak için 0.01 U/ml konsantrasyonda penisilin içeren besleyici agar üzerine ve büyümeyi kontrol etmek için antibiyotik içermeyen bir ortama, 3 mm çapında ve 2 ul kapasiteli Altın içinde bir ölçüm döngüsü kullanılarak kantitatif tohumlama gerçekleştirildi. her iki kültür türünden Yetiştirilen mikroorganizmaların sayısı Tablo 1 - 1 ml sıvıdaki bakteri sayısını belirlemeye yönelik hesaplama tablosuna göre hesaplandı.

Kontrol varyantında Citrobacter freundii konsantrasyonu 108 CFU/g, deneysel varyantta ise 5 x 106 CFU/g idi. Bacillus cereus IP 5832 suşunun (ATCC 14893) Citrobacter freundii suşuna (No. 247) karşı antagonistik aktivitesi ortaya çıkarıldı. "Baktisubtil" ilacının, bağırsak disbiyozu araştırması sırasında bir hastadan izole edilen Citrobacter freundii türüne karşı etkili olduğu belirlendi.

Bağırsak disbiyozu (No. 512) için dışkının bakteriyolojik incelemesi, 106 CFU/g miktarında S aureus'u ortaya çıkardı.

Optik bulanıklık standardına göre 10 9 hücre/ml nihai konsantrasyonda fizyolojik çözelti içinde hastanın dışkısından izole edilen saf bir S aureus kültürünün 1 ml süspansiyonu, saf bir Bacillus kültürünün 1 ml süspansiyonu ile karıştırıldı. cereus suşu IP 5832 (ATCC 14893), aynı konsantrasyonda "Baktisubtil" öbiyotiğinden izole edilmiştir. Karışım 48 saat boyunca 37°C'de inkübe edildi. Daha sonra, basilleri baskılamak için 0.01 U/ml konsantrasyonda penisilin içeren besleyici agar üzerine ve büyümeyi kontrol etmek için antibiyotik içermeyen bir ortama, 3 mm çapında ve 2 ul kapasiteli Altın içinde bir ölçüm döngüsü kullanılarak kantitatif tohumlama gerçekleştirildi. her iki kültür türünden Yetiştirilen mikroorganizmaların sayısı Tablo 1 - 1 ml sıvıdaki bakteri sayısını belirlemeye yönelik hesaplama tablosuna göre hesaplandı.

Kontrol varyantında S aureus konsantrasyonu 5x106 CFU/g, deneysel varyantta ise 106 CFU/g olmuştur. Bacillus cereus IP 5832 suşunun (ATCC 14893) S aureus suşuna (no. 512) karşı antagonistik aktivitesi tespit edilmedi. "Baktisubtil" ilacının, bağırsak disbiyozu testi sırasında bir hastadan izole edilen S aureus suşuna karşı etkisiz olduğu belirlendi.

Bağırsak disbiyozu (No. 429) için dışkıda yapılan bakteriyolojik incelemede 10 4 CFU/g miktarında Klebsiella pneumoniae, 10 6 CFU/g miktarında Enterobacter aglomerans, 10 6 CFU/g miktarında Citrobacter freundii, 10 4 CFU/g miktarında Staphylococcus aureus.G.

Bir hastadan izole edilen fırsatçı mikroorganizma suşlarının her birinin saf kültürünün, optik bulanıklık standardına göre 109 hücrelik nihai konsantrasyondaki fizyolojik çözelti içindeki 1 ml'lik bir süspansiyonu, 1 ml'lik bir süspansiyonun süspansiyonu ile karıştırıldı. Aynı konsantrasyonda bir öbiyotik "Baktisubtil"den izole edilen saf Bacillus cereus suşu IP 5832 (ATCC 14893) kültürü. Böylece fırsatçı mikroorganizmaların ve basillerin 4 karışımı elde edildi. Karışımlar 48 saat boyunca 37°C'de inkübe edildi. Daha sonra, basilleri baskılamak için 0,01 U/ml konsantrasyonda penisilin içeren besleyici agar üzerine ve basili kontrol etmek için antibiyotik içermeyen bir ortama 3 mm çapında ve 2 ul kapasiteli Altın içinde bir ölçüm döngüsü kullanılarak kantitatif tohumlama gerçekleştirildi. izole edilmiş kültürlerin her birinin büyümesi. Yetiştirilen mikroorganizmaların sayısı Tablo 1 - 1 ml sıvıdaki bakteri sayısını belirlemeye yönelik hesaplama tablosuna göre hesaplandı.

Kontrol varyantında Klebsiella pneumoniae konsantrasyonu 108 CFU/g, deneysel varyantta ise 106 CFU/g idi. Kontrol varyantında Enterobacter aglomerans konsantrasyonu 107 CFU/g, deneysel varyantta ise 105 CFU/g idi. Kontrol varyantında Staphylococcus aureus konsantrasyonu 108 CFU/g, deney varyantında ise 5x106 CFU/g idi. Kontrol varyantında Citrobacter freundii konsantrasyonu 10 7 CFU/g, deneysel varyantta ise 10 6 CFU/g idi.

Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun Klebsiella pneumoniae, Enterobacter agglomerans, Staphylococcus aureus, Citrobacter freundii suşlarına karşı antagonistik aktivitesi ortaya çıktı. "Baktisubtil" ilacının, disbakteriyoz çalışması sırasında belirli bir hastadan izole edilen bu suşlara karşı etkili olduğu belirlendi.

Bağırsak disbiyozu (No. 449) için dışkıda yapılan bakteriyolojik incelemede 10 6 CFU/g miktarında Enterobacter aglomerans, 5x10 4 CFU/g miktarında Klebsiella pneumoniae, 10 6 CFU/g miktarında Citrobacter freundii ortaya çıktı. G.

Optik bulanıklık standardına göre 109 hücrelik nihai konsantrasyonda fizyolojik çözelti içindeki izole edilmiş fırsatçı mikroorganizma suşlarının her birinin saf kültürünün 1 ml'lik bir süspansiyonu, saf bir Bacillus cereus kültürünün 1 ml'lik bir süspansiyonu ile karıştırıldı. aynı konsantrasyonda eubiyotik "Baktisubtil"den izole edilen IP 5832 (ATCC 14893) suşu. Böylece fırsatçı mikroorganizmaların ve basillerin 3 karışımı elde edildi. Karışımlar 48 saat boyunca 37°C'de inkübe edildi. Daha sonra basilleri baskılamak için 0,01 U/ml konsantrasyonda penisilin içeren besleyici agar üzerine ve basili kontrol etmek için antibiyotik içermeyen bir ortama 3 mm çapında ve 2 µl kapasiteli Altın ölçüm döngüsü ile kantitatif ekim yapıldı. izole edilmiş kültürlerin her birinin büyümesi. Yetiştirilen mikroorganizmaların sayısı Tablo 1 - 1 ml sıvıdaki bakteri sayısını belirlemeye yönelik hesaplama tablosuna göre hesaplandı.

Kontrol varyantında Enterobacter aglomerans konsantrasyonu 108 CFU/g, deney varyantında ise 5x107 CFU/g idi. Kontrol varyantında Klebsiella pneumoniae konsantrasyonu 107 CFU/g, deneysel varyantta ise 5x106 CFU/g idi. Kontrol varyantında Citrobacter freundii konsantrasyonu 107 CFU/g, deney varyantında ise 5x105 CFU/g idi.

Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun Citrobacter freundii suşuna karşı antagonistik aktivitesi ortaya çıkarılmış, Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun Enterobacter aglomerans ve Klebsiella pneumoniae suşlarına karşı antagonistik aktivitesi tespit edilmemiştir. "Baktisubtil" ilacının Citrobacter freundii suşuna karşı etkili olduğu, disbakteriyoz araştırması sırasında bu hastadan izole edilen Enterobacter agglomerans ve Klebsiella pneumoniae suşuna karşı etkisiz olduğu belirlendi.

Bağırsak disbiyozu (No. 461) için dışkıda yapılan bakteriyolojik incelemede 106 CFU/g miktarında Klebsiella pneumoniae ve 106 CFU/g miktarında Citrobacter freundii ortaya çıktı.

Optik bulanıklık standardına göre 109 hücrelik nihai konsantrasyonda fizyolojik çözelti içindeki izole edilmiş fırsatçı mikroorganizma suşlarının her birinin saf kültürünün 1 ml'lik bir süspansiyonu, saf bir Bacillus cereus kültürünün 1 ml'lik bir süspansiyonu ile karıştırıldı. aynı konsantrasyonda eubiyotik "Baktisubtil"den izole edilen IP 5832 (ATCC 14893) suşu. Böylece fırsatçı mikroorganizmaların ve basillerin 2 karışımını elde ettik. Karışımlar 48 saat boyunca 37°C'de inkübe edildi. Daha sonra, basilleri baskılamak için 0.01 U/ml konsantrasyonda penisilin içeren besleyici agar üzerine ve büyümeyi kontrol etmek için antibiyotik içermeyen bir ortama, 3 mm çapında ve 2 ul kapasiteli Altın içinde bir ölçüm döngüsü kullanılarak kantitatif tohumlama gerçekleştirildi. izole edilmiş tüm kültürlerin Yetiştirilen mikroorganizmaların sayısı Tablo 1 - 1 ml sıvıdaki bakteri sayısını belirlemeye yönelik hesaplama tablosuna göre hesaplandı.

Kontrol varyantında Klebsiella pneumoniae konsantrasyonu 107 CFU/g, deneysel varyantta ise 5x105 CFU/g idi. Kontrol varyantında Citrobacter freundii konsantrasyonu 108 CFU/g, deney varyantında ise 5x107 CFU/g idi.

Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun Klebsiella pneumoniae suşuna karşı antagonistik aktivitesi ortaya çıkarılmış, Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun Citrobacter freundii suşuna karşı antagonistik aktivitesi tespit edilememiştir. Disbakteriyoz çalışması sırasında "Baktisubtil" ilacının Klebsiella pneumoniae suşuna karşı etkili olduğu, bu hastadan izole edilen Citrobacter freundii suşuna karşı ise etkisiz olduğu belirlendi.

0,01 U/ml konsantrasyonda penisilin içeren geliştirilen ortam kullanılarak, Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun ve bağırsak disbiyozu çalışması sırasında önemli miktarlarda izole edilen 96 UPM kültürünün antagonizması araştırıldı: Citrobacter spp. (16 suş), Klebsiella spp. (17), S. aureus (18), Enterobacter spp. (15), tipik E. coli (15), atipik özelliklere sahip E. coli (15). Öbiyotiğin antagonistik aktivitesi, bastırdığı test edilen mikroorganizma türlerinin sayısı (% olarak) ile değerlendirildi (Tablo 3 - Bacillus cereus türü IP 5832 (ATCC 14893) ve fırsatçı mikroorganizmaların antagonizması).

Çalışmalar, incelenen Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşunun, test edilen UPM suşlarının %17,7'sini (17 izolat) baskıladığını göstermiştir.

Ancak fırsatçı mikroorganizmaların sayısındaki azalma önemsizdi - 0,5-2 lg. Test edilen suşların %79,0'ının (81 izolat) dirençli olduğu ve hatta bir öbiyotik varlığında üreme yeteneğine sahip olduğu ortaya çıktı.

Buluşa ait yöntem, test kültürlerinin çimlenmesini tehlikeye atmadan eubiyotik Bacillus cereus suşu IP 5832'nin (ATCC 14893) baskılanmasını mümkün kılar ve bu da eubiyotik suşu Bacillus cereus IP 5832'nin (ATCC) antagonistik aktivitesinin tanımlanmasını sağlar. 14893) bir hastada bağırsak disbiyozunun tanısı sırasında izole edilen, ana aktif prensibi Bacillus cereus suşu IP 5832 (ATCC 14893) olan ebiyotiklerin etkinliğinin bireysel değerlendirilmesi için kullanılabilen fırsatçı bir mikroorganizma türüne karşı, Bağırsak disbiyozuna yönelik bir çalışma sırasında hastadan izole edilen fırsatçı mikroorganizmalara karşı.

tablo 1
1 ml sıvıdaki bakteri sayısını belirlemek için hesaplama tablosu
A	BEN	II	III	1 ml'deki miktar
1-6	-	-		<1000
8-20	-	-	-	3000
20-30	-	-	-	5000
30-60	-	-	-	10000
70-80	-	-	-	50000
100-150	5-10	-	-	100000
sayılmıyor	20-30	-	-	500000
-"-	40-60	-	-	1 milyon
-"-	100-150	10-20	-	5 milyon
-"-	sayılmıyor	30-40	-	10 milyon
-"-	-"-	60-80	Tek koloniler	100 milyon
Tablo 2
Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşu ve fırsatçı mikroorganizmaların eş zamanlı büyümesini baskılamak için bir antibiyotik seçimi
Belirli bir antibiyotik konsantrasyonunda UMR'nin büyümesi, CFU/ml	Belirli bir antibiyotik konsantrasyonunda yetiştirilen UPM suşlarının sayısı, abs (%)
Streptomisin, birim/ml ortamı	Penisilin, birim/ml ortam
1,0	0,5	0,25	1,0	0,01	0,01	0,001
10 8 (kontrol ile aynı)	1 (4)	8 (32)	10 (40)	16 (64)	19 (76)	22 (88)	23 (92)
10 6	4 (16)	2 (8)	0	4 (16)	3 (12)	3 (12)	2 (8)
10 5	15 (60)	12 (48)	15 (60)	5 (20)	3 (12)	0	0
10 4	3 (12)	3(12)	0	0	0	0	0
<10 4	2 (8)	0	0	0	0	0	0
Belirli bir antibiyotik konsantrasyonunda Bacillus cereus'un büyümesi, CFU/ml	10 4	10 4	10 4	Ots.	Ots.	Ots.	10 4

Tablo 3
Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) suşu ve fırsatçı mikroorganizmaların antagonizması
Kültürleri UPM'yi test edin	Suş sayısı	Duyarlı suşlar abs (%)	Dirençli suşlar abs (%)*
1 lg azalma	2 lg azalt	Toplam dirençli suşlar	Bunlardan bir öbiyotiğin varlığında büyüyebilme kapasitesine sahiptirler**
Klebsiella spp.	17	1 (5,9)	0	16(94,1)	1 (6.25)
Enterobakter spp.	15	4 (26,7)	1 (6,6)	10 (66,7)	1(10)
Citrobacter spp.	16	5(31,3)	0	11 (68,7)	1 (9,1)
tipik E. coli	15	1 (6,7)	0	14 (93,3)	0
atipik E. coli	15	2(13,3)	0	13 (86,7)	1 (7,7)
S. aureus	20	3 (15,0)	0	17 (85,0)	6 (35,3)
* - UPM sayısı kontrole kıyasla değişmedi veya 0,5 lg'den fazla değişmedi ** - UPM'lerin sayısı kontrole kıyasla arttı

Bilgi kaynakları

1. Osipova I.G., Mikhailova R.A., Sorokulova I.B., Vasilyeva E.A., Gaiderov A.A. Spor probiyotikleri // Mikrobiyoloji, viroloji ve immünoloji dergisi. - 2003. - No. 3. - S.113-119.

2. Blinkova L.P., Semenova S.A., Butova L.G. ve diğerleri Bacillus cinsinin taze izole edilmiş bakteri suşlarının antagonist aktivitesi // Mikrobiyoloji, viroloji ve immünoloji dergisi. - 1994. - No. 5. - S.71-75.

3. Viral ve bakteriyel enfeksiyonlara karşı bir ilacın bileşenleri olarak kullanılan Bacillus subtilis ve Bacillus licheniformis bakteri türleri ve bu türlere dayanan bir ilaç. / Patent RU 2142287, yayın. 12/10/99. - Boğa. N20.

4. Geniş bir antagonistik aktivite spektrumuna sahip bir Bacillus subtilis bakterisi türü. / Patent RU N2182172, yayın. 05/10/02.

5. Gataullin A.G., Mikhailova N.A., Blinkova L.P., Romanenko E.E., Elkina S.I., Gaiderov A.A., Kalina N.G. İzole edilmiş Bacillus subtilis suşlarının özellikleri ve deney farelerinin bağırsak mikroflorası üzerindeki etkileri // Mikrobiyoloji, Viroloji ve İmmünoloji Dergisi. - 2004. - No. 2. - S.91-94.

6. Davydov D.S., Mefed K.M., Osipova I.G., Vasilyeva E.A. Sağlık uygulamalarında spor probiyotiklerinin dünya çapında kullanımı // Klinik beslenme. - 2007. - Hayır. 1-2. - S.A36.

7. Sorokulova I.B. Basillerden gelen probiyotiklerin makrofajların fonksiyonel aktivitesi üzerindeki etkisi // Antibiyotikler ve kemoterapi. - 1998. - No. 2. - S.20-23.

8.Blinkova L.P. Bakteriyosinler: kriterler, sınıflandırma, özellikler, tespit yöntemleri // Mikrobiyoloji, Viroloji ve İmmünoloji Dergisi. - 2003. - No. 3. - S.109-113.

9. Postnikova E.A., Efimov B.A., Volodin N.N., Kafarskaya L.I. Yeni biyolojik ürünlerin geliştirilmesi için ümit verici bifidobakteri ve laktobasil türlerini arayın // Mikrobiyoloji, Epidemiyoloji ve İmmünoloji Dergisi. - 2004. - No. 2. S.64-69.

10. Gratia A., Fredericq P. Deversite des souches antibiotiques de Escherichia coli et étendue varibile de leur champ d'action.Ibid: 1031-1033.

11. Fredericq P. Actions antibiotiques reciproques chez les Enterobacteriaceae. REV. Belge Pathol. Med. Deney 1948, 19(Ek. 4): 1-107.

12. Ermolenko E.I., Isakov V.A., Zhdan-Pushkina S.Kh., Tets V.V. Laktobasillerin antagonistik aktivitesinin kantitatif değerlendirmesi // Mikrobiyoloji, viroloji ve immünoloji dergisi. - 2004. - No. 5. - S.94-98.

13.Ushakova N.A., Chernukha B.A. Sıcaklık şokunun probiyotik Bacillus subtilis 8130 // Klinik beslenmenin biyolojik etkinliği üzerindeki etkisi. - 2007. - Hayır. 1-2. - S.A70.

14. Arzumanyan V.G., Mikhailova N.A., Gaiderov A.A., Basnakyan I.A., Osipova I.G. Probiyotik kültürlerin fırsatçı mayalara karşı gecikmiş antagonizmasını değerlendirmek için niceliksel bir yöntem // Klinik laboratuvar teşhisi. - 2005. - No. 5. S.53-54.

15. Probiyotiklerin antagonist aktivitesini belirleme yöntemi. / RU Patent No. 2187801, yayın. 20.08.2002.

16. Zykova N.A., Molokeeva N.V. Yeni probiyotik ilaç “Trilact” // Klinik beslenme. - 2007. - Hayır. 1-2. - S.A42.

17. Klinik teşhis laboratuvarlarında birleşik mikrobiyolojik (bakteriyolojik) araştırma yöntemlerinin kullanımına ilişkin yönergeler: SSCB Sağlık Bakanlığı'nın 535 sayılı emrine Ek 1. - 1986.

18. Sanford Jay P., Gilbert David N., Moeliering Robert C. Jr., Sande Merle A. Yirmi dokuzuncu baskı The Sanford Guide to antimikrobiyal terapi, 1999.

İDDİA

Ana aktif prensibi Bacillus cereus suşu IP 5832 (ATCC 14893) olan ebiyotiklerin, bağırsak disbiyozu için bir çalışma sırasında bir hastadan izole edilen fırsatçı mikroorganizmalara karşı etkinliğinin bireysel değerlendirilmesi için bir yöntem; bu, fırsatçı mikroorganizmaların saf olarak izole edilmesini içerir. deneğin dışkısından kültür alınır, daha sonra Bacillus cereus STRAIN IP 5832 (ATCC 14893) saf kültürde izole edilir, ardından Bacillus cereus suşu IP 5832 (ATCC 14893), fizyolojik ortamda fırsatçı mikroorganizmaların her bir suşu ile birlikte inkübe edilir. solüsyonu, ardından 0,01 U/ml konsantrasyonunda penisilinli ve penisilinsiz besin agarına Gold'a göre ekim yapılır ve penisilinli bir besiyerinde fırsatçı mikroorganizmaların sayısında, fırsatçı mikroorganizmaların sayısına göre bir azalma tespit edilirse. Penisilin içermeyen ortamda, Bacillus cereus IP 5832 suşunun bir fırsatçı mikroorganizma suşuna karşı antagonistik aktivitesinin varlığı belirlenir (ATCC 14893), burada eubiyotik, belirli bir hastadan izole edilen bir fırsatçı mikroorganizma suşuna karşı etkili olarak değerlendirilir. bağırsak disbiyozu açısından test edilmiştir.

El yazması olarak

Gataullin Airat Gafuanovich

YENİ PROBİYOTİKLERİN OLUŞTURULMASI İÇİN UMUT VERİYOR BACILLUS SUBTILIS SUŞLARININ BİYOLOJİK ÖZELLİKLERİ

biyolojik bilimler adayı derecesi için tez

Moskova - 2005

Çalışma, adını taşıyan Devlet Kurumu Aşı ve Serum Bilimsel Araştırma Enstitüsü'nde gerçekleştirildi. AI. Mechnikov RAMS, Moskova.

Bilimsel sorumlular: Tıp Bilimleri Doktoru,

Profesör Mikhailova N.A. Biyolojik Bilimler Doktoru Blinkova L.P.

Resmi rakipler: Tıp Bilimleri Doktoru,

Profesör Baturo A.P. Tıp Bilimleri Doktoru, Profesör Likhoded V.G.

Önde gelen kuruluş: Federal Tüketici Haklarının Korunması ve İnsan Refahının Denetlenmesi Hizmeti Ulusal kontrol organı Federal Devlet Bilimsel Kurumu Tıbbi Biyolojik Preparatların Standardizasyonu ve Kontrolüne ilişkin GosNII adını almıştır. L.A. Taraseviç

Savunma, ¿3" ve 2005 tarihinde saat 14:00'te, I.I. Mechnikov RAMS Devlet Aşı ve Serum Araştırma Enstitüsü'nün D 001.035.01 numaralı tez konseyi toplantısında, 105064, Moskova, Maly Kazenny adresinde gerçekleştirilecektir. şerit, no. 5a.

Tez, I.I. Devlet Aşı ve Serum Araştırma Enstitüsü kütüphanesinde bulunabilir. Mechnikov RAMS.

Bilimsel Sekreter

tez konseyi

Biyolojik Bilimler Adayı

GENEL İŞ TANIMI

Sorunun alaka düzeyi

Tıbbi mikrobiyolojide, mikroorganizmaların hayati aktiviteleri sırasında patojenik mikroorganizmaların büyümesini baskılayan biyolojik olarak aktif maddeler (BAS) ürettiği disbiyotik bozuklukların düzeltilmesi için saprofitik mikrofloranın kullanımını haklı çıkaran veriler birikmiştir [Mikhailova N.A. ve diğerleri, 1993; Mazankova L.N. ve diğerleri, 1997; Osipova I.G. ve diğerleri, 2003].

Patojenik olmayan canlı mikroplara dayalı, doğal bir uygulama yöntemiyle, mikrobiyolojik durumunu optimize ederek konakçı vücudun fizyolojik ve biyokimyasal fonksiyonları üzerinde yararlı etkiler sağlayabilen terapötik ve profilaktik ilaçlar, probiyotik ilaçlar olarak sınıflandırılır [Shenderov B.A. , 1997].

Gastrointestinal sistem hastalıklarının önlenmesi ve tedavisi için, spor oluşturan bakterilerin canlı mikrobiyal kültürlerine dayanan biyolojik ürünler yaygın olarak kullanılmaktadır [Slabospitskaya A.T. ve diğerleri, 1990; Nikitenko V.I., 1991; Nikitenko L.I., Nikitenko V.I., 1992; Smirnov V.V. ve diğerleri, 1995; Shenderov B.A. ve diğerleri, 1997; Pobery IA. ve diğerleri, 1998].

Bacillus cinsi eski çağlardan beri araştırmacıların ilgisini çekmiştir. Bakterilerin mikrobiyolojisi, biyokimyası, fizyolojisi ve genetiği alanında elde edilen bilgiler, Bacillus'un biyolojik olarak aktif madde üreticileri olarak avantajlarını gösterir: enzimler, antibiyotikler, böcek öldürücüler [Smirnov V.V. ve diğerleri, 1982; Parshina S.N. ve diğerleri, 1990; Harwood K., 1992; Blinkova L.P. ve diğerleri, 1994].

Metabolik süreçlerin çeşitliliği, genetik ve biyokimyasal değişkenlik, litik ve sindirim enzimlerine karşı direnç, basillerin tıbbın çeşitli alanlarında kullanılmasının gerekçesini oluşturdu. ABD Gıda ve İlaç İdaresi, B. subtilis'e, ilaç üretiminde kullanılmaları için bir ön koşul olan GRAS (genellikle güvenli olarak kabul edilir) statüsü vermiştir [Harwood K., 1992; Nikitenko L.I., 1992; Kandybin N.V. ve diğerleri, 1995; Ivanovsky A.A., 1996, 1997; Boyko N.V. ve diğerleri, 1997; Payne J.M, 1992; Kubo K, 1994; Tsuge K. ve diğerleri, 1995; Rychen G. ve diğerleri, 1995, Donovan W.P. ve diğerleri, 1995].

Bacillus cinsinin birçok temsilcisinin aktivitesi belirgindir ve çok çeşitli patojenik ve koşullu patojenik mikroorganizmalara karşı kendini gösterir.Çeşitli enzimlerin ve diğer maddelerin sentezi sayesinde sindirimi düzenler ve uyarır, anti-alerjik ve antitoksik etkiye sahiptirler. Basil kullanımı makroorganizmanın spesifik olmayan direncini önemli ölçüde arttırır.Ayrıca bu mikroorganizmalar teknolojik olarak gelişmiş üretimdir, depolama sırasında stabildir ve en önemlisi çevre dostudur [Soroku Yu-va IB, 1996]

B türünün alt türleri biyoteknoloji açısından büyük ilgi görmektedir.Bunun için bakteriyel genomla ilgili tüm bilgilerin girildiği moleküler genetik üzerine bir veri bankası olan SubtiList oluşturulmuştur.

B subtilis bakterileri, bir dizi bakteriyel ve enzim preparatı üretme teknolojisinde yaygın olarak kullanılmaktadır [Shablinskas AI, 1990, Gulko MA, 1994, Gastro GR, 1992, Dercova K ve diğerleri, 1992, Kudrya VA, 1994, Lin S-C ve diğerleri. , 1994, Cromwick AM ve diğerleri, 1996, Buchell ME ve diğerleri, 1997, Oh MK ve diğerleri, 1995]

Bunlara dayanarak, çok çeşitli terapötik ve profilaktik etkiler ve çevre güvenliği ile karakterize edilen probiyotikler oluşturulmuştur [Nakhabin IM, Perelygin VV, 1996] Spor probiyotikleri, insanlarda ve çiftlik hayvanlarında gastrointestinal hastalıkların tedavisinde etkili bir şekilde kullanılmaktadır. [MPTopchiy, 1997, VGuida, 1978, Kharchenko, 1980, Nikitenko VI, 1992]

Şu anda en iyi bilinen ilaçlar şu ilaçlardır: bactisu btil, sporobacterin, biosporin, baktisporin, subalin, cereobiogen, enterogermin ve diğerleri [Smirnov VV ve diğerleri 1988, 1992, 1995,1997, Nikitenko VI, 1989, 1991, 1992, Gracheva NM ve diğerleri, 1996, Vinnik Yu Si ve diğerleri, 1998, Sorokulova I B, 1996, 1997, St gard H, 1989, Maruta K, 1996, Su Li ve diğerleri, 1996, Adami A ve diğerleri, 1997]

Spor probiyotiklerinin terapötik etkinliği, üretimleri için kullanılan suşların biyolojik özellikleriyle sağlanır.Anormalliklerin nedenlerinden biri olan patojenik ve koşullu patojenik mikroorganizmalara karşı antagonistik aktivite spektrumu belirleyici öneme sahiptir.

insan veya hayvan vücudunun çeşitli biyotoplarında mikroekolojinin gelişmeleri Ek olarak, basilin polipeptit antibiyotikler, enzimler, bakteriyosinler vb. gibi çeşitli biyolojik olarak aktif maddeler üretme yeteneğinin yanı sıra antibiyotik direnci de göz ardı edilemez.

Çalışmanın amacı:

İzole edilmiş B.subtilis suşlarının biyolojik özelliklerini incelemek ve bunların orijinal bir spor probiyotiğinin geliştirilmesinde kullanılma olasılığını değerlendirmek

Araştırma hedefleri:

Bilimsel yenilik.

İzole edilen suşların morfolojik, fizyolojik-biyokimyasal, genetik ve diğer biyolojik özelliklerinin incelenmesine dayanarak, çeşitli taksonomik grupların fırsatçı ve patojenik mikroorganizmalarına karşı antagonizma sergileyen, düşük yapışkanlığa sahip, plazmid içermeyen bir B. subtilis 1719 suşu seçildi. aktiviteye sahiptir ve gentamisin, polimiksin ve eritromisine dirençlidir.

Üretim teknolojisinin oluşturulmasına yönelik yaklaşımlar, B.subilhs 1719 suşunun orijinal besin ortamı üzerindeki büyüme özelliklerinin incelenmesi, yeni bir probiyotik ilacın elde edilmesinde aşamalar olarak yaşayabilirliğini ve antagonistik aktivitesini stabilize etme koşullarının incelenmesi de dahil olmak üzere deneysel olarak doğrulanmıştır.

Buluş için bir başvuru yapıldı (No. 2005111301, 19 Nisan 2005): "Bakillus subtllll.4 1719 bakteri türü, proteolitik, amilolitik ve lipolitik enzimlerin yanı sıra patojenik mikroorganizmalara karşı antagonistik olarak aktif biyokütle üreticisidir."

Pratik önemi.

İzole edilmiş ve tanımlanmış B.SllbtlllS 1719 suşu, adını taşıyan Devlet Kültür Koleksiyonu GISC'de saklanmıştır. L.A. Tarasevich No. 277 altında ve orijinal bir biyoterapötik probiyotik ilaç üretmek için endüstriyel teknolojinin geliştirilmesi için önerilebilir.

1. Tanımlanan üç bakteri kültürü suşu morfolojik, fizyolojik, biyokimyasal ve diğer özellikler açısından B. suhlllts türüne karşılık gelir. Plazmit içermezler, farklı taksonomik gruplardaki fırsatçı ve patojen bakterilere karşı antagonistik olarak aktiftirler ve düşük veya orta düzeyde yapışma özelliğine sahiptirler.

2. B.subtlhs 1719 suşu, deneysel disbiyozda normal mikrofloranın niceliksel ve niteliksel bileşiminin restorasyonu ile fırsatçı ve patojenik mikroorganizmaların ortadan kaldırılmasında ortaya çıkan probiyotik özelliklere sahiptir ve ayrıca makroorganizma üzerinde immünomodülatör bir etkiye sahiptir.

İşin onaylanması

“Bir metropolde fonksiyonel beslenme, gıda güvenliği ve insan sağlığı” konferansında sunulan materyaller (Moskova, 2003); Adını taşıyan Devlet Araştırma Enstitüsü'nün genç bilim adamlarının yarışmasında. I.I. Mechnikov (Moskova, 2004); toplum üzerinde

VOEMP (Moskova, 2004); 8. Uluslararası Putin Okulu Genç Bilim İnsanları Konferansında “Biyoloji - 21. Yüzyılın Bilimi” (Pushchino, 2004); Gastroenterologlar Bilimsel Derneği 5. Kongresinde (Moskova 2005).

Tezin onaylanması, adını taşıyan NIIWS'nin mikrobiyoloji bölümünün bilimsel konferansında gerçekleşti. I.I. Mechnikov RAMS (Moskova, Mayıs 2005).

Tez çalışmasının kapsamı ve yapısı

Tez 131 sayfadan oluşmaktadır. Giriş, literatür taraması (2 bölüm), kendi sonuçları (5 bölüm), sonuç ve çıkarımlardan oluşur. Referans listesi şunları içerir: 236 kaynak (169 yerli ve 67 yabancı). Eserde 10 şekil ve 19 tablo yer almaktadır.

Araştırma nesneleri

Suşlar: Bacillus subtilis çeşitli çevresel kaynaklardan izole edilmiştir.

Deneysel disbiyozlu farelerden izole edilen mikroorganizma kültürleri.

Test - adını taşıyan GISK koleksiyonundan, antagonist aktiviteyi belirlemek için kullanılan kültürler. L.A. Taraseviç

Besin ortamı:

Et Pepton Agar (MPA), Et Pepton Broth (MPB), değiştirilmiş Gause besiyeri No. 2, %7 NaCl ilaveli besin agarı - kültürleri büyütmek için, hemolitik özellikleri belirlemek için %5 kanlı agar, lesitinaz aktivitesini test etmek için yumurta suyu enzimatik özellikleri belirlemek için kazein ve patates agarları, AGV - antibiyotik direncini değerlendirmek için.

Basillerin biyokimyasal özellikleri Omelyansky ortamında bromotimol mavisi göstergesi ve karbonhidratlar - glikoz, ksiloz, mannitol, laktoz, sukroz, maltoz, salisin ve eskülin ile belirlendi. Sporsuz kültürler için karbonhidrat içeren Hiss ortamları ve amino asitli ortamlar kullanıldı.

Sitrat ve propiyonat kullanımı Coser ortamında test edildi ve nitratları azaltma yeteneği, nitratlı bir besiyerinde test edildi. Bir ortamda asetoinin belirlenmesi

(Voges-Proskauer reaksiyonu) Clark ortamı üzerinde gerçekleştirildi. Hidrojen sülfit üretme yeteneği Kligler ortamında araştırıldı; H2O2 ile reaksiyonda katalaz aktivitesi tespit edildi; kültürlerin indol üretme yeteneği, gösterge kağıdı ile bir besin besiyerinde tespit edildi; üreaz enzimi - Christensen'in üre içeren ortamında.

Ek olarak, farelerin mikroflorasının yapısını incelemek için soğuk peynir altı suyu suyu ve Hanks çözeltisi, ayırıcı tanı ortamı kullandık: Endo, CI-agar, Ploskireva, stafilokok ve enterokok agarları, 88-agar, Mac-Sopkay ortamı, setrimid agar, Blaurock ortamı, tiyoglikolat Çarşamba, Wilson Blair Çarşamba ve diğerleri.

Büyüme özelliklerini değerlendirmek için aşağıdaki ortamlar kullanıldı:

Patates-gliserin hidrolizatı ilaveli yarı sentetik ortam [Mikhailova N.A. 1995].

Ortam No. 5 (g/l): 3-su ile ikame edilmiş potasyum fosfat - 0,3; iki ikameli amonyum sülfat - 2; sodyum sitrat 5,5-sulu - 2; bakır sülfat 5-su - 0,005; çinko sülfat 7-su - 0,004; demir (II) sülfat 7-su - 0,0005; kalsiyum klorür - 0,165; manganez (II) sülfat 5-su - 0,05; magnezyum sülfat 7-su - 0,3; bakteriyolojik amaçlar için kuru enzimatik pepton - 5.

Ortam No. 9 (g/l): demir (II) sülfat 7-su - 0,01; magnezyum sülfat 7-su - 0,1; kalsiyum klorür - 0,08; bakteriyolojik amaçlar için kuru enzimatik pepton - 5,0; glikoz - 10.0, maya ekstraktı - 3.

Ortam VK-2 (g/l): manganez klorür - 0,01; kalsiyum klorür - 0,05; sodyum klorür - 5,0; sodyum fosfat iki ikameli 12-su - 2,0; potasyum fosfat diikameli 3-su - 2,0; glikoz - 10,0, bakteriyolojik amaçlar için kuru enzimatik pepton - 10,0.

SPAS-2 ortamı (g/l): disübstitüe edilmiş potasyum fosfat 3-su - 2,5; sodyum klorür - 5,0; nişasta - 2,5; Modifiye soya fasulyesi hidrolizatı - 10,0; bakteriyolojik amaçlar için kuru enzimatik pepton - 10,0.

SPAS-4 ortamı (g/l): sodyum klorür - 5,0, Modifiye soya fasulyesi hidrolizatı - 10,0; yem mayası ekstraktı - 1,0; kazein asit hidrolizatı - 5,0.

SPAS-6 ortamı (g/l), iki ikameli 3-su potasyum fosfat - 2,5; sodyum klorür - 5,0, kasamino asitler 5,0; değiştirilmemiş soya fasulyesi hidrolizatı - 10,0, nişasta - 2,5.

Araştırma Yöntemleri

Mikroorganizma suşlarının izolasyonu ve tanımlanması, Petri kapları veya test tüpleri içindeki ayırıcı tanısal besin ortamı üzerine kaplama yoluyla gerçekleştirildi. Kültürler 37 °C'de 18-24 saat süreyle termostata yerleştirildi, mahsuller sayıldıktan sonra smearlar hazırlandı, Gram ile boyandı, mikroskopla incelendi ve spor oluşturan bakteri kültürleri seçildi [Smirnov V.V., 1983, Murray P.R., 1999. ]

Bakteri kolonilerinin morfolojisinin incelenmesi.

Mikrobiyal popülasyondaki kolonilerin morfolojisini incelemek için, orijinal kültürün 10 kat seyreltmeleri %0,9 fizyolojik çözelti içinde hazırlandı ve MPA ortamına ekildi [Smirnov V.V., 1983, Murray P.R., 1999].

Biyokütle konsantrasyonunun incelenmesi.

Kültür sıvısındaki mikrobiyal hücrelerin konsantrasyonu, adını taşıyan endüstri standardı bulanıklık örneği GISC kullanılarak belirlendi. L.A. 10 adet için Tarasevich.

Antibiyotiklere karşı suş duyarlılığının belirlenmesi

Suşların antibiyotiklere duyarlılığı, AGV ortamında antibiyotik emdirilmiş standart diskler kullanılarak disk difüzyon yöntemiyle incelenmiştir [Birger M.O., 1982; Reshedko G.K., 2003; MUK 4.2.1980-04, 2004]

Fizyolojik ve biyokimyasal özellikler, çeşitli karbonhidratlardan yararlanma yeteneği ile incelenmiştir: glikoz, ksiloz, mannitol, sukroz, maltoz ve eskülin, laktoz ve salisin; glikozun parçalanması sırasında gaz oluşumuyla; %7 NaCl bulunan ortamlarda çoğalma, nitratları azaltma, indol, hidrojen sülfit üretme, üreaz, proteaz, amilaz ve lipaz gibi enzimleri sentezleme yeteneği sayesinde. Suşların hareketliliği de değerlendirildi.

İzole edilen suşların toksisitesi, toksisitesi ve virülansı, önerilen yöntemlere uygun olarak 14-16 g ağırlığındaki beyaz farelerde belirlendi [Smirnov V.V., 1983, Murray P.R., 1999].

B. subtils suşlarının yapışma aktivitesi Brilis B yöntemi kullanılarak belirlendi. Mikroorganizmaların yapışma indeksi (MAI) değerlendirilirken, MAI 1,00 - 2,49 olduğunda yapışma düşük, IAM 2,5 - 3,99 olduğunda orta, IAM > 4,0 olduğunda yüksek olarak kabul edildi [Brilis V.I., 1982,1990]

Antagonistik aktivite, adını taşıyan GISC koleksiyonundan elde edilenlerle ilgili olarak gecikmeli antagonizma yöntemiyle test edildi. L.A. Tarasevich testi - probiyotik preparatların kalite göstergelerinin değerlendirilmesinde kullanılan suşlar, [Boiko N.V., 1989; Blinkova L.P. 1994].

TNF-a konsantrasyonunu belirlemek için sitotoksik test TNF-a konsantrasyonu, fare serumunun L929 hattının hedef hücreleri üzerindeki sitotoksik etkisi ile belirlendi.

Nötrofillerin fagositik aktivitesi, fare fagositleri ile nitromavi tetrazolyumun indirgenmesine yönelik sitokimyasal testte (NBT testi) ve luminole bağımlı kemilüminesans kullanılarak incelenmiştir [Zinkin V.Yu., 2004]

Hayvan serumundaki sitokinlerin (IL-1P, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-I2, IFN-y) seviyesi, test sistemleri kullanılarak enzim bağlantılı immünosorbent tahlili (ELISA) kullanılarak belirlendi. Biosource'tan » (Belçika)

Deneysel disbiyoz, 14-16 g ağırlığındaki beyaz soylu fareler üzerinde modellenmiştir; burada normal mikrofloranın dekontaminasyonu, antibiyotik doksisiklin hidroklorür (JSC Belmedpreparaty) kullanılarak veya florokinolon ilacı siprofloksasin (Tsifrana) kullanılarak kolonun koşullu patojenik parietal mikroflorasının seçici dekontaminasyonu kullanılarak gerçekleştirildi. , Reddy's Lab., Hindistan).

Luminal ve parietal mikroflora çalışmaları, farelerden aseptik olarak alınan dışkı maddesi ve kolon bölümlerinin analiz edilmesiyle gerçekleştirildi [Zudenkov A.E., 2001; Vorobyov A.A., 2001,2003].

Enterositlerin yapışma aktivitesini belirlemek için "eldiven" yönteminin bir modifikasyonu kullanılmış ve ortalama yapışma indeksi (AIA) hesaplanmıştır [Gorskaya N.M., 1994, Brilis V.I., 1982, 1990]

Plazmid DNA analizi, alkalin lizis kullanılarak plazmid DNA'nın saflaştırılması için tasarlanmış standart bir prosedür kullanılarak gerçekleştirildi [Osterman LD, 1981; Maniatis T. ve diğerleri, 1984].

Yetiştirme sırasında besin ortamının büyüme özelliklerinin değerlendirilmesi, bir termostatla donatılmış bir tablet fotometre "Multiskan-Ascent" (Termo-Labsystems, Finlandiya) bazlı bir mikrobiyolog ve kemoterapist "Mikrob-Avtomat"ın Otomatik iş istasyonu kullanılarak gerçekleştirildi. ve bir çalkalayıcı. İstatistiksel yöntemler

Sonuçların istatistiksel işlenmesi genel kabul görmüş yöntemlere göre gerçekleştirildi (Ashmarin I P, Vorobyov A.A., 1962).Sonuçlar p'de güvenilir kabul edildi.<0,05. Достоверность различий между средними значениями (X) экспериментальных данных оценивали по критерию Стьюдента

ARAŞTIRMA SONUÇLARI Çalışmanın ilk aşamalarında 15 bakteri kültürü izole edildi. Sadece 3 suşun hemolitik ve lesitinaz aktivitesine (patojenite faktörleri) sahip olmadığı ortaya çıktı ve bu suşlar daha ileri çalışmalar için seçildi.

Smearların mikroskobik incelemesi, suşların gram pozitif olduğunu ve endosporların parasantral ve merkezi yerleşimi ile karakterize olduğunu gösterdi.

Agarla değiştirilmiş Gause besiyeri No. 2 üzerinde kültürler incelenirken, kolonilerin üç varyantı karakteristiktir.

Tüm suşlar, bakteri temsilcilerine özgü morfolojik ve fizyolojik-biyokimyasal özelliklere sahipti, hareketliydiler, %7 NaCl bulunan bir ortamda büyüdüler ve glikoz, sakaroz gibi substratları parçalayan bir dizi çeşitli enzimle karakterize edildiler. , maltoz, ksiloz, eskülin, jelatin, nişasta, kazein, indirgenmiş nitratlar, hidrojen sülfit oluşturmadı

B subtilis kültürlerinin çok çeşitli patojenik ve koşullu patojenik mikroorganizmalara karşı belirgin antagonistik özelliklere sahip olduğu bilinmektedir. Çalışmamızda bu özellik, adını taşıyan GISC koleksiyonundan alınan test kültürü suşları kullanılarak gecikmeli antagonizma yöntemi kullanılarak değerlendirildi. L.A. Taraseviç (Tablo 1).

Tablo 1. Bacillus subtilis suşlarının antagonist aktivitesi

Test suşlarının büyüme inhibisyonu bölgeleri (mm) _iX±m)___

İncelenen B.subtilis suşları o g- yi g-fi f) C ^ aureus FDA 209Р S aureus 29213 f, sch Tf GCH £ a o a 0 in s s 1 S I X. aureus "Filliov" a gch 1 G "s<3 о чО "о ГЧ Г4 О С (N 00 оо гц Гч| M1 "nJ

Bay O<Л _ VI m IT) (N о п ГЧ гч +1 fl

1719 N + g- G4 f, +1 f! +ben

O VI O f o oo _ o o O

№ 1594 <Ч| CJ +1 +1 «-I С сч; п!

O O O O o 00 ft 00 o

1318 Ni g", +1" +1 o! с> !Nj еч fl +1 О fj +1 fi + m + i + о + Г> f + о ГЧ + О CN ГЧ* +1 О + Гч ГЧ f. +1 (K

Elde edilen veriler, suşların antagonistik aktivite düzeyinin, kullanılan test suşuna bağlı olarak farklılık gösterdiğini gösterdi. Her üç suş da Shigella'nın iki türüne (Sflexncri 337 ve s.sonnei 170), S.aureus FDA 209P, S. aureus "Nikiforov", P.mirabilis 24a, P.vulgans 177, C.albicans 690'a karşı belirgin antagonistik aktiviteye sahipti. E.coli 1882, P.aeruginosa 9022 ve E.coh 212 (O157:H7), en yüksek oranlar S.aureus 29213, S.aureus 25423'e karşı da antagonizma gösteren B.subtilis suşu 1719'da tespit edilmiştir.

Çalışılan suşların, Shiga benzeri toksini (sitovertoksin) sentezleyebilen enteropatojenik E. coli 212 (0157:H7) suşuna karşı oldukça belirgin bir antagonizma gösterdiğine ve B. subtilis No. suşunun maksimum aktiviteye sahip olduğuna özellikle dikkat edilmelidir. (30 + 2,0) mm.1719.

Probiyotik kültürlerin en önemli özelliklerinden biri olan yapışma yetenekleri açısından üç orijinal B subtilis suşu incelenmiştir (Tablo 2).

Tablo 2. Bacillus subtilis suşlarının yapışkan aktivitesi.

İncelenen suşlar Yapışkan aktivite

Mikroorganizma yapışma indeksi (MAI) (X±w) Yapışma düzeyi

B. subtilis 1719 1,53+0,08 Düşük

B. subtilis 1594 2,84±0,47 Ortalama

B. subtilis 1318 3,08±0,33 Ortalama

B.subtilis 1719 suşunun düşük, B.subtilis 1594 ve 1318 suşlarının ise ortalama yapışma aktivitesine sahip olduğu ortaya çıktı.

Probiyotik ilaçlara aday olan suşun antibiyotik direnci de antibakteriyel ilaçlarla birlikte kullanılma olasılığını belirleyen önemli bir özelliktir. Bu bağlamda B. subtilis suşlarının klinikte en sık kullanılan 14 antibiyotiğe karşı antibiyotik direnci üzerine bir çalışma yapıldı. B.subtilis 1719 suşu gentamisin, polimiksin ve eritromisine dirençli iken B.subtilis 1594 ve B.subtilis 1318 suşları sadece gentamisine dirençliydi.

Antibiyotik direncinin bu özelliğin genetik belirleyicisinin kromozomal lokalizasyonuyla mı yoksa plazma kimliğinin varlığıyla mı ilişkili olduğunu bulmak ilgi çekiciydi.

B. subtilis suşlarının plazmit taşıma analizi, antibiyotik direncinin doğası hakkında bilgi sağlayabilir. %0,9 agaroz jelinde, elektroforezden sonra, analiz edilen bir dizi DNA örneğinde (izler 2, 4 ve 6) plazmid DNA'nın boyutuna uyan bir fraksiyon tanımlandı (Şekil 1). Ancak bu markaların agaroz jeldeki dağılım modeli, kontrol plazmit DNA'sından farklı olacaktır.

Sonuçta ortaya çıkan DNA'nın bir plazmit mi yoksa kromozomal fragmanlar mı olduğunu nihai olarak belirlemek için, izole edilen materyal ikinci tipte küçük kesilmiş endonükleazlarla (restriksiyon enzimi Pst I) işleme tabi tutuldu. Agaroz jeldeki kısıtlama ürünleri analiz edilirken (Şekil 1), DNA'nın düşük moleküler ağırlıklı kısmı izole edildi

Çalışılan suşlardan ekstrakte edilmiş, net parçalar oluşmadan parçalanmış, bu da örneklerde plazmid DNA moleküllerinin bulunmadığını göstermektedir.

Pirinç. 1. Suşlardan izole edilen DNA preparatlarının elektroforez verileri

Atama açıklaması

Görünen o ki, belirlenen antibiyotik direnci doğal direnci ifade ediyor ve muhtemelen kromozom üzerinde lokalize olan genler tarafından kontrol ediliyor.

İn vivo deneylerde B subtilis 1719 suşunun toksik olmadığı, toksik olmadığı ve avirulent olduğu ortaya çıktı.

Antibiyotik doksisiklin hidroklorürün farelere (14-16 g ağırlığında) 5 mg dozunda uygulanması, hayvanların bağırsaklarının koşullu patojenik ve patojenik mikroflora ile kontamine olduğu bir disbiyoz modelinin oluşturulmasını mümkün kıldı

B subtilis 1719 kültürünün 7 gün boyunca %0,5x10 1,0x109 m/fare dozunda uygulanması, kompozisyonun ve luminal ve sayının normalleşmesine katkıda bulunmuştur.

№1 №2 №3 №4 №5 №6 №7 №8 №9 № 10 №11

süreç işaretleyici

B suşunun yerli DNA'sı sullish 1719 B suşunun bölünmüş DNA'sı sullish 1719 B suşunun doğal DNA'sı sullish 1594 B suşunun bölünmüş DNA'sı syllish 1594 B suşunun yerli DNA'sı sullish 1318 B suşunun bölünmüş DNA'sı sullish (8 1318 B suşunun doğal DNA'sı 8 NHL 534 bölünmüş DNA suşu B 8db 534 doğal plazmit

bölünmüş plazmid pPETpB^et

gece mikroflorasının yanı sıra fırsatçı mikroorganizmaların ortadan kaldırılması (Tablo 3).

Tablo 3. Deneysel disbiyozlu farelerde ve çeşitli dozajlarda B. mutilum (Bs) 1719 kültürüyle düzeltme sonrasında mikroflora

D Farelerde CFU/ml Gösterge Ig sayısı (1g dışkı LII 11

1 cm bağırsak) (X±t)

Kontrol (sağlam) Uygulamadan sonra Bs dozuyla tedaviden sonra (mikrobiyal hücreler)

doksisiklin 0,5x10" 1,0x109

Mikroorganizmalar i a Bağırsakların Parietal tabakası i a o i Bağırsakların Parietal tabakası h i "X Bağırsakların Parietal tabakası I * s s = S c 5 H

e e e & S « ! s g a 3 C

E. coli: 7+0,42 7+0,7 7,3+0,64 6,5+1,4 710,7 6,5+0,48 811,4 5+0,43

1ac\ % 94 100 64 84 100 100 100 ay

lac, % b 0 36 16 * 0 0 0 0

hemoliz 0 0 0 0 0 0 0 0 1

R. vulgaris 0 0 710,26* 0 0 0 * 0 0

P. mirabilis * (1 0 6±0,42* 4,3І.7* 0* * 0 0 0

S. freundii 610.42* 0 0 0 0 0 0 0

Enterokok spp. 7±<).21 7+0.64 6±0,59 5.5Ю.84 7±0,42 5.5+0.84 710.48 510.47

S. epidermidis o 0 0 0 0 0 0 0

S. aureus 5±0,21 0 4±1,2* 4+0,21* * 0 0 * 0 "II

Stafilokok spp. 4+0,43* * 0 0 410,48* 0 0 0 «

Candida spp. 6i0,64 0 4,5±0,21 6+0,92* * 0 * 0 1 0* 0

Lactobacillus spp. ¡9.510,42 7.610,43 1 5,510,4* 1 4+0,23* 910,44 7+0,34 1 910,21 7,5+0,84

1 Bifidobacterium spp. 2±0,1 2±0,1 1 2+0,1 2+0,1 1 2+0,1 2+0,1 2Yu.1 I 210,1

Clostridium spp. 5±0,22 3,1±0,21 1 510,21 4,5+0,24 1 5+0,59 1 4.510,73 1 5M.21 1 4,65+0,24

Not: *p<0,05

Bifidobakteri ve laktobasil sayısını koruyan florokinolon ilacı siprofloksasin kullanılarak aşırı yetiştirilmiş farelerin kolonunun koşullu patojenik parietal mikroflorasının seçici dekontaminasyonu sırasında benzer sonuçlar elde edildi. B. subnhs 1719 kültürü,

benzer dozlarda uygulandığında, probiyotik kültürü verilmeyen kontrol grubu hayvanlarla karşılaştırıldığında stafilokok sayısında önemli bir azalmaya (8,3 kat) yol açmıştır. stafilokok: bakteri ve kültürün eklenmesi \ 1719 bu oranı sağlam farelerin seviyesine değiştirdi

Bir sonraki aşamada, antibiyotik doksisiklin hidroklorürün uygulanmasıyla indüklenen deneysel disbiyoz sırasında B ublin 1719 kültürünün bağırsak epitel hücrelerinin (enterositler) yapışma yeteneği üzerindeki etkisini inceledik.

Fare gruplarının tanımı:

Fare grupları

Temizleme hakkında

deneyin başında O Doksisiklin

Ø Doksisiklin

eşitleme olmadan B Doksisiklin + B cYi 0,5 0 Doksisiklin h-BvcYi 1,0 □ Saf +

VbYk 0,5 ■ Temiz +

V. eiYiL 0.5X109mk V diYiSi 1.0 x ] O"m k

Pirinç. Şekil 2. Deneysel bir disbiyoz modelinde enterositler üzerindeki 8.xy1oek 25 test suşunun ortalama yapışma indeksi (AIA) ve B. subtilis 1719 kültürü ile düzeltildiğinde.

Disbiyoz, B 8uNSh 1719 kültürü ile çeşitli dozlarda düzeltildiğinde, enterositlerin yapışma yeteneğinde bir azalma gözlendi (Şekil 2).

B suşunun etkisini incelemek için yapılan bir dizi deneyde. 1719 bu basillerin güvenilir bir şekilde çoğalma yeteneği

NBT testine göre nötroftların metabolik aktivitesini değiştirin (Şekil 3)

Hayvan grupları

Pirinç. 3. Deneysel disbiyozda kültür B SllbtlllS 1719'un nötrofillerin aktivitesi (NST testi) üzerindeki etkisi

Luminole bağlı kemilüminesans yöntemi kullanılarak nötrofillerin fonksiyonel aktivitesi üzerinde benzer sonuçlar elde edildi

Düzeyindeki en büyük artış, doksisiklin uygulanmasının neden olduğu disbiyozun maksimum tezahürü döneminde meydana geldi.

Subilla 1719'da K)LT)ra'nın etkisi altında üretimde azalma meydana gelir

IFNF-a Kültürün sağlam hayvanlara uygulanması, üretim seviyesini etkilemedi

Doksisiklin

Fare grupları

Pirinç. 4. B. nükleik asit 1719 kültürünün deneysel disbiyoz sırasında tümör nekroz faktörü a (TNF-a) üretim düzeyi üzerindeki etkisinin incelenmesi

Sitokin birikiminin belirlenmesi (1L-1P, 1L-2, 1L-4, 1L-6, [L-10, 1H2, 1PL-y)

B^tsynHu 1719 kültürünün tek bir enjeksiyonundan sonra farelerin kan serumundaki dinamikler aşağıdaki modelleri ortaya çıkardı.

Bakteri kültürünün uygulanmasından sonraki ilk 12 saat içinde, Ib-1(5) haricinde sitokinlerin seviyesinde herhangi bir değişiklik olmadı.Çalışılan diğer sitokinlerin içeriği, sağlam hayvanlarla karşılaştırıldığında yalnızca 24 saat kadar önemli ölçüde arttı. : I-1P (13,7 kez) ve I-4 (14,6 kez), 1b-2 (5,2 kez), 1b-6 (7 kez), 1N0 (1,5 kez), 1N2 (5,2 kez), 1RI- y (9,7) zamanlar).

Probiyotik preparatların üretiminde önemli bir teknolojik gösterge, mikroorganizmaların yetiştirilmesi sırasında biyokütlenin verimidir. Bu gösterge doğrudan kullanılan besin ortamının büyüme özelliklerine bağlıdır. Biz

Bisquid 1719'un çeşitli bileşimlerdeki yedi besin ortamında yetiştirilme işlemlerinin temel özellikleri incelenmiştir.

Elde edilen veriler Tablo 4'te sunulmaktadır. Ortam No. 5, SPAS-6 ve patates-gliserin ortamı, türün optik yoğunluk indeksi ile büyümesini sağladı

(OP), sırasıyla 0,24±0,01 (u=0,03 h"1), 0,22+0,01 (iKKOZZch1) ve 0,3+0,01 (u=0,025 h"1)'e eşittir. SPAS-2, SPAS-4, No. 9 ortamında maksimum OP değeri 0,42+0,03 (u=0,067 h"1), 0,38+0,02 (u=0,05h"") ve 0,58+0,03 (u) idi. =0,037 h"1) ve VK-2 ortamında - 0,85±0,6 (u=0,068 h""). Ulaşma zamanı

bu ortamlardaki maksimum biyokütle konsantrasyonu

9±0,7 saat (SPAS-2) ila 18±1,3 saat (KGG).

Tablo 4. 20 saatlik ekim sırasında B. nibiHn 1719 suşlarının çeşitli bileşimlerdeki ortamlarda biyokütle birikimi (X±t)

Orta ^-fazının ortalama süresi (h) Üstel fazın süresi (h) Biyokütle konsantrasyonuna ulaşma süresi (h) Maksimum biyokütle verimi (optik yoğunluk) Büyüme hızı (i)

Hayır 5 2 8+0,67 13±1,05 0,24+0,01 0,03

No.9 2 11 ±0,8 13+0,99 0,5810,03 0,037

KGG 2 2±0,12 18+1,3 0,3+0,01 0,025

SPAS-2 2 4+0,36 9±0,7 0,42+0,03 0,067

SPAS-4 2 4±0,34 11+1,1 0,38±0,02 0,05

SPAS-6 1,5 3+0,23 18+1,6 0,22±0,01 0,033

VK-2 1,5 8±0,72 14±1,0 0,85+0,6 0,068

Maksimum biyokütle verimi (BY), büyüme hızında VK-2 ortamında, en düşük ise büyüme hızında SPAS-6 ortamında tespit edildi.

Yetiştirme ortamlarında karbonhidrat kaynağı olarak en sık glukoz, maltoz, sükroz ve laktozun kullanıldığı bilinmektedir. Deneylerimizde, glikoz veya sükroz ilavesiyle VK-2 ortamında yüksek verimde biyokütle elde edildi; OD göstergeleri şuna karşılık geldi:

Maltoz kullanıldığında en yüksek OP şu tarihte kaydedildi:

ortam No. 9 0,695 ± 0,025 (u = 0,058 h "), ancak karbonhidrat kaynakları olarak laktoz, sakaroz ve glikozun dahil edildiği ortam VK-2'de elde edilen değerlerden daha düşük olduğu ortaya çıktı.

Besleyici ortamın bileşiminin suşun antagonistik özellikleri üzerinde herhangi bir etkisinin olmadığı tespit edildi.

Bir sonraki aşamada, B. lumbago 1719 suşunun 5±3 °C sıcaklıkta liyofilize ve sıvı halde saklandığında canlılığını ve antagonistik özelliklerini stabilize etme koşulları değerlendirildi (Tablo 5).

Sükroz-sarı stabilizatörlü liyofilize durumda Lybly 1719 kültürü, canlılığını ve antagonistik özelliklerini en az 4 yıl (gözlem süresi) boyunca korudu. Masada Şekil 5 ayrıca çeşitli stabilizatörlerin eklenmesiyle sıvı formda 3 yıl boyunca depolanan mahsullerin özelliklerinin incelenmesinin sonuçlarını da sunmaktadır.

Tablo 5. Çeşitli stabilizatörlerin varlığında saklandığında B. mlinth 1719 suşu hücrelerinin canlılığı

Tablo 5'teki verilerden, optimal sıvı stabilizatörün, 1719 suşunun canlılığını 2 yıl boyunca korumanıza izin veren %7'lik bir NaCl çözeltisi olduğu anlaşılmaktadır. Kültürün özelliklerini 1 yıl boyunca korumak için, ayrıca damıtılmış su ve %10 gliserol çözeltisi kullanın

Çeşitli stabilizatörlerin varlığında saklandığında B subtihs 1719 suşunun antagonistik özelliklerinde istatistiksel olarak anlamlı bir değişiklik olmamıştır.

Antagonist ve yapışkan için 1719 suşunun karşılaştırmalı analizi

Ticari probiyotik preparatların özellikleri Sporobak-

terin, Rusya (B subtihs 534), Cereobiogen, Çin (B cereus DM423), Subtil, Vietnam (Biemis var vietnamí), Baktisubtil, Fransa (B cereus IP5832), Nutrolin, Hindistan (B toagulans) (Tablo 6), izin verilir aşağıdaki sonuçları elde edin

B subi/lis 1719'un en yüksek antagonistik aktivitesi S flex neri 337 (30±3,0), S aureus "Nikiforov" (30+2,5), P uilgam 177 (30±2,0) P aeruginosa 9022 (27) suşlarına karşı ortaya çıkmıştır. ±1,5) ve E coli 212 (0157 H7) (30±1,5) Ecoh 1882 (26±1,2), Saw eus 25423 (21± 1,5), S sonnet 170 (20±) test kültürleriyle bu suşta biraz daha zayıf antagonizma tespit edildi. 2,0), 5 aureus “Phillipov” (20±1,5),

Test kültürlerinde daha az anlamlı büyüme geriliği tespit edildi Saurem FDA 209P (15±1,5), S aureus 29213 (15±3,0), P mirabilis 24a (12±1,2)

İncelenen probiyotik kültürler arasında, antagonist aktivite açısından 1719 suşuna en yakın fakat ondan daha düşük olan suş,

534 "Hint*" B suşu pıhtılaştırıcısının zayıf bir antagonist olduğu ve bu açıdan deneyde kullanılan tüm suşlara göre daha düşük olduğu ortaya çıktı

Yapışkanlık özelliklerinin karşılaştırılması, genel olarak ticari preparat suşlarının ortalama bir yapışma seviyesine sahip olduğunu, "Hint" suşu hariç IAM'nin 3,08 ile 3,8 arasında değiştiğini gösterdi (B suşu subtllis 1719 için IAM = 5,36 ± 0,56, bu gösterge döndü) en düşük olduğu ortaya çıktı (IAM = 1,53 ± 0,08)

Tablo 6. Deneydeki B. mlinth 1719 suşunun antagonistik aktivitesinin ve ticari probiyotik preparat kültürlerinin karşılaştırmalı özellikleri

Test suşlarının büyüme inhibisyonu bölgeleri (mm) (X+t)

Çalışılan Bacillus o G-vi Pi s, 3 s n yi s suşları. o sch< с bu S ГЛ (Ч О сч 5 Vi S.aureus 25423 Л", aureus «Никифоров» S 0 5 <=; s 1 ÍÜ 5 1". пи rabil is 24а 0 г-- ¡с 1 о W4 о 3 о сч (Ч о ^ 5 § ^ сч ОС оо "с го ^ г» ■П" о сч Ñ

V. subtihs No. 1719 Г-(cm "+1 N о с +1 о ГЛ ж +i t (Ч +i n 1П (N +1 о f, +i С СЧ СЧ +¡ yani + Pó о, сч'de) " +1 in сч in +i Г-- (N +Í vo p yaklaşık Сч" + о с.

B.subtihs 534 Sporobacterin (Rusya) (-; SCh +1 CS o +1 o SCh O GL +1 O g +1 g o. +1 00 +i SCh (Ch)

B. cereus DM423 Cereobiogen (Çin) SP +i h- (Hayır<4 О +1 о СЧ +1 <4 in +1 О о (Чг +1 о о о о о с +1

B. cereus var. Vietnam Subtil (Vietnam) 1P + O o<4 + СЧ О о + (N о" +1 СЧ О, +i О о о + CI + о о О о о

V. cereus IP 5832 Baktisubtil (Fransa) Ш оо + in о О g- + о +1 (N in +i in о CN + g"- ■h- + to o + g" o o o o + g ■p +¡ o

B. coagulans Nutrolin (Hindistan) s o O o + SCH "Í. O +1 p SCh o" -H (N O + o o o o o o

Dolayısıyla izole ettiğimiz B. bubik 1719 suşu, incelenen özellikler açısından diğer test edilen ticari preparat kültürlerine göre niteliksel avantajlara sahipti ve bu da onu yeni bir probiyotik preparatın geliştirilmesinde kullanım için umut verici olarak değerlendirmemize olanak tanıyor.

1. Morfolojik ve fizyolojik-biyokimyasal özelliklere dayanarak izole edilen suşlar B Raulym olarak tanımlandı. B.mth/bx suşlarının DNA preparatlarında plazmit bulunmaması antibiyotik direncinin kromozomal kontrolünün göstergesidir.

2. Beyaz farelerde bir disbiyoz modeli kullanılarak, B. thylish 1719 suşunun probiyotik aktivitesinin, normal mikrofloranın niteliksel ve niceliksel bileşiminin restorasyonu ile fırsatçı ve patojenik mikroorganizmaların ortadan kaldırılmasıyla ortaya çıktığı gösterilmiştir.

3. Tür yetiştirme sırasında biyokütle birikimi için en uygun ortam

1719, karbonhidrat kaynağı olarak glikoz veya sükroz ilaveli bir BK-2 ortamıdır.

4. B. lialisia 1719 suşunun, bir sükroz-jelatin stabilizatörü ile liyofilize halde canlılığını ve antagonistik aktivitesini en az 4 yıl (gözlem süresi) boyunca koruduğu, sıvı formda %7'lik bir çözelti No. 01 ile stabilize edildiği tespit edilmiştir. - Distile su veya %10 gliserin solüsyonu varlığında 2 yıl ve 1 yıl.

5. Antagonistik olarak aktif, düşük yapışkanlı, plazmit içermeyen, toksik olmayan, probiyotik ve immünomodülatör aktiviteye sahip olan B. naylisha 1719 suşu, GISC Devlet Kültür Koleksiyonunda saklanmıştır. L.A. Taraseviç.

6. V.zyysh 1719 (277) suşu, biyolojik özellikleri ve temel teknolojik özellikleri nedeniyle yeni probiyotik preparatların geliştirilmesinde kullanım açısından ümit vericidir.

1 Gataullin AG, Gaiderov A A Mikhailova N A, Osipova I G, Romanen-ko E E BaaNi alt türlerinin çeşitli kökenlerden biyolojik özellikleri Co “21. yüzyılda aşı-serum gelişiminin güncel sorunları” Perm 2003, s. 329-331

2 Gataullin AG, Mikhaitova NA, Btinkova LP, Elkina S I, Gorobets OB, Gaiderov A A, Kalina NG Diferansiyel teşhis ortamı kullanılarak farelerin bağırsak kanalının parietal mikroflorasının incelenmesi Koleksiyon "Mikrobiyolojik besin ortamlarının ve test sistemlerinin geliştirilmesi ve standardizasyonu" Makhachkala , 2003 s.48

3 Gataullin A G, Btinkova LP, Mikhaitova NA, Elkina S I, Gaiderov A A, Kalina N G, Gorobets OB Terapötik ilaçların makroorganizma üzerindeki etkisinin bir göstergesi olarak deneysel disbiyoz sırasında parietal mikrofloranın bileşimindeki değişiklikler Anapi Mechniivsky Enstitüsü Kharyv, 2003 , Sayı 4-5, s. 123-124

4 Mikhailova N A, Blinkova LP, Elkina S I, Gataullin A G, Gorobets OB, Gaiderov A A, Kalina N G İlaçların yan etkilerinin ayrılmaz bir göstergesi olarak disbiyoz Mesaj 1 Raporların toplanması “Fonksiyonel beslenme, gıda güvenliği ve metropol koşullarında insanların sağlığı " E, 2003, s. 38-39

5 Mikhailova N A, Blinkova LP, Elkina S I, Gataullin AG, Gorobets O B, Gaiderov A A, Kalina N G İlaçların yan etkilerinin ayrılmaz bir göstergesi olarak disbiyoz Mesaj 2 II Moskova Uluslararası Kongresi'nin Materyalleri “Biyoteknoloji durumu ve gelişme beklentileri” Moskova, 2003, s.162

6 Gataullin AG, Blinkova LP, Mikhailova NA, Elkina SI, Gaiderov A A, Kalina NG, Gorobets OB Deneysel disbiyozda tıbbi ilaç kullanımının etkinliğinin bir göstergesi olarak parietal mikrofloranın bileşimindeki değişiklik Analy Mechniyvsky Enstitüsü Kharyv, 2004 , Sayı 6, s.10-13

7 Gaiderov A A, Gataullin AG, Vasilyeva E A, Mikhailova N A, Osipova I G Probiyotik preparatların spesifik olmayan bağışıklığın makrofaj bağlantısı üzerindeki etkisinin incelenmesi Uluslararası "Probiyotikler, prebiyotikler, sinbiyotikler ve fonksiyonel gıdalar" konferansının materyallerinin toplanması Mevcut durum ve beklentiler ” M, 2004, s. 21-22

8 Blinkova LP, Mikhailova NA, Elkina S I, Gataullin A G, Kalina N G, Tokarskaya MM "Milife" ve spor probiyotiği ile kombinasyonlarının deneysel enfeksiyonlar sırasında beyaz farelerin direnci üzerindeki etkisi Uluslararası "Probiyotikler" Konferansı materyallerinin toplanması Prebiyotikler”, sinbiyotikler ve fonksiyonel gıdalar Mevcut durum ve beklentiler” M, 2004, s. 4041

9 Blinkova LP, Mikhailova NA, Shmygaleva TP, Gataullin AG, Novikov V Yu, Shmygalev P A Hücrelerin ve sporların yapışkan özellikleri Subtilis'te Uluslararası konferans materyallerinin toplanması “Probiyotikler, prebiyotikler, sinbiyotikler ve fonksiyonel gıdalar Mevcut durum ve beklentiler " M, 2004, s.41-42

10 Mikhailova N A, Godkov M A, Gataullin AG, Zinkin Yu V, Vetoshkin AI, Kharitonova AV, Gaiderov A A Kültürün immünomodülatör etkisi B subtilis Uluslararası konferansın materyallerinin toplanması “Probiyotikler, prebiyotikler, sinbiyotikler ve fonksiyonel gıdalar Modern durum ve beklentiler" M , 2004, s. 204-205

11 Gataullin AG, Mikhailova N A, Blinkova LP, Romanenko E E, Elkina SI, Gaiderov A A, Kalina N G İzole edilmiş Bacillus subtilis suşlarının özellikleri ve bunların deney hayvanlarının bağırsak mikroflorası üzerindeki etkileri Zh mikrobiol, 2004, No. 2, 91-94'ten

12 Gataullin AG, Zinkin YuV, Vetoshkin AI, Godkov MA, Gaiderov A A, Kharitonova AV Kemilüminesans analizi kullanılarak B subtilis ilacının disbiyozdaki etkisinin incelenmesi “8. Uluslararası Putin Okulu-Genç Bilim Adamları Konferansı” Uluslararası Konferansı materyallerinin toplanması Puşçino, 2004,s 256

13 Blinkova LP, Mikhailova NA, Gorobets OB, Elkina S I, Gataullin AG Kalina N G, Gaiderov A A Biyolojik olarak aktif ilaçların C albicans üzerindeki etkisinin deneysel çalışması Tıbbi mikolojideki ilerlemeler, 2004, cilt III, s. 48-49

14 Gataullin A G, Mikhailova N A, Khvatov V B, Blinkova LP, Zinkin Yu V, Kharitonova AV Anti-anti-değerlendirme için kemilüminesan analizin uygulanması

B subtil ilacının bakteriyel ve antifungal aktivitesi bulunmaktadır. Tıbbi mikolojideki gelişmeler, 2004, cilt III. s.50-51.

15. Mikhailova N., Blinkova L.P.. Gataullin A.G. Bacillus subtihs'in probiyotik suşlarının çeşitli besin ortamlarında yetiştirme parametrelerinin incelenmesi. III Moskova Uluslararası Kongresi'nin materyalleri “Biyoteknoloji: durum ve gelişme beklentileri”. Moskova, 2005, s.124.

16. Gataullin A.G., Blinkova L.P., Mikhailova N.A. B. subtihs'in probiyotik suşlarının biyokütlesinin çeşitli bileşimlerdeki besin ortamlarında birikmesi. Doygunluk. Uluslararası katılımlı Tüm Rusya bilimsel konferansının materyalleri: “21. yüzyılda tıbbi immünobiyolojik preparatlar: geliştirme, üretim ve uygulama” Ufa. 2005, bölüm 1.e. 134-136

19 Mayıs 2005'te yayınlandı. Baskı hacmi 1 p.l. Sipariş No. 615. Tiraj 100 kopya. Basan: Sprint-Print LLC, Moskova, st. Krasnobogatyrskaya, 92 tel.: 963-41-11, 964-31-39

-»« g.i» j» "-" Ж J

LİTERATÜR İNCELEMESİ

Bölüm 1. Mikrobiyal antagonizma - disbiyotik koşulların düzeltilmesi için biyoterapötik ilaçların oluşturulmasının temeli

Bölüm 2. Spor probiyotikleri ve makroorganizma üzerindeki etkileri

2.1. Bacillus cinsi bakterilerden elde edilen preparatlar

2.2. Bacillus cinsinin bakterilerinden probiyotiklerin terapötik ve profilaktik etki mekanizmaları hakkında modern fikirler

2.3. Aerobik spor oluşturan bakteriler tarafından üretilen biyolojik olarak aktif maddeler

2.4. Bacillus cinsi bakterilerin patojenik faktörleri 34 KENDİ ARAŞTIRMASI

Bölüm 3. Nesneler ve araştırma yöntemleri

3.1. Araştırma nesneleri

3.2. Araştırma yöntemleri 43 3.2.1. Ekipman ve teknikler

Bölüm 4. İzole suşların özellikleri

4.1. Suşların morfolojik ve fizyolojik-biyokimyasal özelliklerinin incelenmesi

4.2. B.subtilis suşlarının in vitro deneylerde antagonistik ve yapışkan aktivitesi

4.3. B.subtilis suşlarının antibiyotik direnci ve plazmit profilinin belirlenmesi

Bölüm 5. B.subtilis 1719 suşunun makroorganizma üzerindeki etkisi

5.1. B.subtilis 1719 suşunun in vivo deneylerde toksisitesi, toksijenitesi, virülansı ve probiyotik aktivitesinin incelenmesi

5.2. B. subtilis 1719 suşunun deneysel disbiyoz ile in vivo deneylerde bağışıklık parametreleri üzerindeki etkisinin incelenmesi

Bölüm 6. Probiyotik preparatın temeli olarak B.subtilis 1719 suşunun teknolojik özellikleri

6.1. Çeşitli sıvı besin ortamlarında büyüme özelliklerinin değerlendirilmesi

6.2. B.subtilis 1719 suşunun depolama sırasında yaşayabilirliği ve antagonistik aktivitesinin incelenmesi

Bölüm 7. B.subtilis\l9 suşunun ve bazı ticari probiyotik preparatların temelini oluşturan suşların özelliklerinin karşılaştırmalı özellikleri. ÇÖZÜM

giriiş "Yeni probiyotiklerin yaratılması için ümit verici Bacillus subtilis suşlarının biyolojik özellikleri" konulu biyoloji tezi

Sorunun alaka düzeyi

Tıbbi mikrobiyolojinin mevcut aşamasında, yaşam süreçleri boyunca patojenik mikroorganizmaların, kötü huylu tümörlerin büyümesini baskılayan ve çeşitli patolojik ve normalize eden biyolojik olarak aktif maddeler (BAS) üretebilen saprofitik mikrofloranın kullanımını doğrulayan yeni veriler ortaya çıkmıştır. İnsan vücudundaki biyokimyasal süreçler.

Son on yılda, spor oluşturan bakterilerin canlı mikrobiyal kültürlerine dayanan biyolojik ürünler, gastrointestinal sistem hastalıklarının önlenmesi ve tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır.

Mikroorganizmaların en çeşitli ve yaygın gruplarından biri olan Bacillus cinsine ait bakteriler, insan ve hayvanların ekzojen florasının önemli bileşenleridir.

Bacillus cinsi eski çağlardan beri araştırmacıların ilgisini çekmiştir. Mikrobiyoloji, fizyoloji, biyokimya ve bakteri genetiği alanındaki birikmiş bilgi, Bacillus'un biyolojik olarak aktif madde üreticileri olarak avantajlarını göstermektedir: enzimler, antibiyotikler, böcek öldürücüler. Çeşitli yaşam koşullarına yüksek adaptasyon (oksijenin varlığı veya yokluğu, geniş bir sıcaklık aralığında büyüme ve gelişme, çeşitli organik veya inorganik bileşiklerin gıda kaynağı olarak kullanılması vb.) basillerin toprakta, suda yayılmasına katkıda bulunur, hava, gıda ürünleri ve dış çevrenin yanı sıra insan ve hayvanların vücudundaki diğer nesneler.

Metabolik süreçlerin çeşitliliği, genetik ve biyokimyasal değişkenlik, litik ve sindirim enzimlerine karşı direnç, basillerin tıbbın çeşitli alanlarında kullanılmasının gerekçesini oluşturdu. ABD Gıda ve İlaç İdaresi, Bacillus subtilis'e, bu bakterilerin ilaç üretiminde kullanılması için bir ön koşul olan tamamen güvenli organizmalar olan GRAS (genel olarak güvenli olarak kabul edilir) statüsünü vermiştir.

Basillerin aktivitesi çok çeşitli patojenik ve koşullu patojenik mikroorganizmalara karşı ortaya çıkar. Çeşitli enzimlerin ve diğer maddelerin sentezi sayesinde sindirimi düzenler ve uyarır, anti-alerjik ve anti-toksik etkilere sahiptirler. Basil kullanıldığında makroorganizmanın spesifik olmayan direnci önemli ölçüde artar. Bu mikroorganizmaların üretimi kolaydır, rafta dayanıklıdır ve en önemlisi çevre dostudur.

Doğal bir uygulama yöntemi yoluyla, konakçı vücudun mikrobiyolojik durumunu optimize ederek fizyolojik ve biyokimyasal fonksiyonları üzerinde yararlı etkiler sağlayabilen, patojenik olmayan canlı mikroplara dayanan terapötik ve profilaktik ilaçlar, şu anda probiyotik ilaçlar olarak sınıflandırılmaktadır.

Basillerden B. subtilis suşları en büyük ilgiyi çekmektedir. Genetik ve fizyolojik özellikler açısından E. coli'den sonra ikinci sırada yer almaktadırlar. B. subtilis'in biyoteknolojideki büyük potansiyeli, bu suşun moleküler genetiğine ilişkin, bakteri genomu hakkındaki tüm bilgilerin girildiği SubtiList adlı bir veri bankasının oluşturulmasıyla kanıtlanmaktadır.

Bacillus cinsinin canlı bakterilerini temel alan, makroorganizmaya zararsız, çok çeşitli tedavi edici ve profilaktik etkilere sahip ve çevre açısından güvenli probiyotik preparatlar oluşturulmuştur. İnsanlarda ve çiftlik hayvanlarında mide-bağırsak hastalıklarının tedavisinde Bacillus cinsinin canlı mikrobiyal kültürlerinin kullanımına ilişkin sonuçlar büyük bilimsel ve pratik öneme sahiptir.

Şu anda, iyi bilinen probiyotik ilaçlar pratik sağlık hizmetlerinde yaygın olarak kullanılmaktadır: baktisubtil, sporobakterin, biyosporin, baktisporin, subalin, sereobiyojen, enterogermin ve diğerleri.

Bu ilaçların terapötik kullanım endikasyonları ve terapötik etkinliği, bunların üretiminde kullanılan suşların özellikleriyle sınırlıdır. İnsan veya hayvan vücudunun çeşitli biyotoplarında mikroekolojik rahatsızlıklara neden olan patojenik ve fırsatçı mikroorganizmalara karşı antagonistik aktivite spektrumu belirleyici öneme sahiptir. Ayrıca basillerin biyolojik olarak aktif maddeler (polipeptit antibiyotikler, enzimler vb.) üretme yeteneği ve antibiyotik direnci de göz ardı edilemez.

Bir yandan disbiyotik bozuklukların gelişiminde rol oynayan mikroorganizmaların çeşitliliği ve ortaya çıkan antibiyotik direnci, diğer yandan farklı B. subtilis suşlarının biyosentetik yeteneklerinin değişkenliği, hedeflenen suşların sürekli olarak izlenmesini tavsiye edilebilir hale getirmektedir. probiyotik aktiviteye sahip ve/veya çeşitli biyolojik olarak aktif maddelerin üreticileridir.

Çalışmanın amacı:

İzole edilmiş B. subtilis suşlarının biyolojik özelliklerini incelemek ve bunların orijinal bir spor probiyotiğinin geliştirilmesinde kullanılma olasılığını değerlendirmek.

Araştırma hedefleri:

1. İzole edilmiş B.subtilis kültürlerinin morfolojik, fizyolojik-biyokimyasal, antagonistik, yapışkan ve diğer özelliklerini in vitro deneylerde inceleyin ve daha ileri araştırmalar için en umut verici türü seçin.

2. Seçilen B.subtilis suşunun probiyotik aktivitesini in vivo deneylerde değerlendirin.

3. Çalışılan B.subtilis suşunun biyokütle birikimi için optimal olan bir besin ortamı seçin.

4. Seçilen B.subtilis suşunun depolama sırasında yaşayabilirliğini ve antagonistik aktivitesini belirleyin.

5. Orijinal B. subtilis suşunun özelliklerini ticari probiyotik preparatların üretiminde kullanılan kültürlerle karşılaştırın.

Bilimsel yenilik.

İzole edilen suşların morfolojik, fizyolojik-biyokimyasal, genetik ve diğer biyolojik özelliklerinin incelenmesine dayanarak, çeşitli taksonomik grupların fırsatçı ve patojenik mikroorganizmalarına karşı antagonizma sergileyen, düşük yapışkanlığa sahip, plazmid içermeyen bir B. subtilis 1719 suşu seçildi. aktiviteye sahiptir, gentamisin, polimiksin ve eritromisine dirençlidir.

Üretim teknolojisinin oluşturulmasına yönelik yaklaşımlar, B. subtilis 1719 suşunun orijinal besin ortamındaki büyüme özelliklerinin, yeni bir probiyotik ilacın elde edilmesinde aşamalar olarak yaşayabilirliğini ve antagonistik aktivitesini stabilize etme koşullarının incelenmesi dahil olmak üzere deneysel olarak doğrulanmıştır.

Buluş için bir başvuru sunuldu (19 Nisan 2005 tarihli No. 2005111301): "Bakillus subtilis 1719 bakteri türü, proteolitik, amilolitik ve lipolitik enzimlerin yanı sıra patojenik mikroorganizmalara karşı antagonistik olarak aktif bir biyokütle üreticisidir."

Pratik önemi.

İzole edilen ve tanımlanan B.subtilis 1719 suşu, adını taşıyan Devlet Kültür Koleksiyonu GISC'de saklandı. J.I.A. Tarasevich No. 277 altında ve orijinal bir biyoterapötik probiyotik ilaç üretmek için endüstriyel teknolojinin geliştirilmesi için önerilebilir.

Savunmaya sunulan başlıca hükümler:

1. Tanımlanan üç bakteri kültürü suşu, morfolojik, fizyolojik, biyokimyasal ve diğer özellikler açısından B. subtilis türüne karşılık gelir. Plazmit içermezler, farklı taksonomik gruplardaki fırsatçı ve patojen bakterilere karşı antagonistik olarak aktiftirler ve düşük veya orta düzeyde yapışma özelliğine sahiptirler.

2. B.subtilis 1719 suşu, deneysel disbiyozda normal mikrofloranın niceliksel ve niteliksel bileşiminin restorasyonu ile fırsatçı ve patojenik mikroorganizmaların ortadan kaldırılmasında ortaya çıkan probiyotik özelliklere sahiptir ve ayrıca makroorganizma üzerinde immünomodülatör bir etkiye sahiptir.

3. Teknolojik özelliklerine göre B.subtilis 1719 suşu, orijinal bir probiyotik ilacın oluşturulmasına aday olarak önerilebilir.

LİTERATÜR İNCELEMESİ

Çözüm "Mikrobiyoloji" konulu tez, Gataullin, Airat Gafuanovich

1. Morfolojik ve fizyolojik-biyokimyasal özelliklerine göre izole edilen suşların B. subtilis olduğu belirlendi. B. subtilis suşlarının DNA preparasyonlarında hiçbir plazmit bulunamadı; bu, açıkça antibiyotik direncinin kromozomal kontrolünü gösteriyor.

2. Beyaz farelerde bir disbiyoz modeli kullanılarak, B.subtilis 1719 suşunun probiyotik aktivitesinin, normal mikrofloranın niteliksel ve niceliksel bileşiminin restorasyonu ile fırsatçı ve patojenik mikroorganizmaların ortadan kaldırılmasıyla ortaya çıktığı gösterilmiştir.

3. B. subtilis 1719 suşunun yetiştirilmesi sırasında biyokütle birikimi için en uygun ortam, karbonhidrat kaynağı olarak glikoz veya sükroz ilaveli VK-2 ortamıdır.

4. B.subtilis 1719 suşunun, sakaroz-jelatin stabilizatörü ile liyofilize halde canlılığını ve antagonistik aktivitesini en az 4 yıl (gözlem süresi) boyunca koruduğu, sıvı formda %7 NaCl çözeltisi ile stabilize edildiği tespit edilmiştir - 2 yıl ve damıtılmış su veya %10'luk gliserin çözeltisi varlığında 1 yıl.

5. Antagonistik olarak aktif, düşük yapışkanlığa sahip, plazmid içermeyen, toksik olmayan, probiyotik ve immünomodülatör aktiviteye sahip olan B.subtilis 1719 suşu, GISC Devlet Kültür Koleksiyonunda saklanmıştır. J1.A. Taraseviç.

6. B.subtilis suşu 1719 (277), biyolojik özelliklerine ve temel teknolojik özelliklerine dayanarak, yeni probiyotik preparatların geliştirilmesinde kullanım açısından ümit vericidir.

ÇÖZÜM

Modern biyolojik ve tıp biliminin keşifleri ve başarıları, yeni biyolojik ürünlerin (probiyotikler) geliştirilmesini ve uygulamaya konulmasını mümkün kılmıştır. Bu ilaçlar canlı mikrobiyal kültürlere dayanmaktadır. Bu ilaçların terapötik etkisi, patojenik ve koşullu patojenik suşlara - patojenlere karşı belirgin mikrobiyal antagonizmaya dayanmaktadır. Tedavi sürecinde probiyotiklerin immünomodülatör aktivitesi daha az önemli değildir. Canlı bakterilerden üretilen ilaçların kimyasal olarak sentezlenen ilaçlara göre yadsınamaz avantajları, zararsızlıkları, insan vücudu için fizyolojik özellikleri ve alerjik reaksiyonların olmamasıdır. Zaten probiyotikler, gastrointestinal mikrofloranın, metabolik bozuklukların düzeltilmesinde ve antibakteriyel, kemoterapi, hormonal ve radyasyon tedavisinin sonuçlarının tedavisinde lider konumdadır. Bakteriyel translokasyon fenomeni üzerine yapılan bir araştırma, probiyotiklerin çeşitli cerrahi enfeksiyonların önlenmesinde ve tedavisinde başarıyla antibiyotiklerin ve proteolitik enzimlerin yerini alabileceğini gösterdi.

Son on yılda, spor oluşturan bakterilerin canlı mikrobiyal kültürlerine dayanan biyolojik ürünler, gastrointestinal sistem hastalıklarının önlenmesi ve tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır.

Metabolik süreçlerin çeşitliliği, genetik ve biyokimyasal değişkenlik, litik ve sindirim enzimlerine karşı direnç, basillerin tıbbın çeşitli alanlarında kullanılmasının gerekçesini oluşturdu. Bu mikroorganizmaların üretimi kolaydır, depolama sırasında stabildir ve en önemlisi çevre dostudur.

Suşların bir dizi test kültürüne karşı yüksek aktivitesi, diğerlerine karşı aktivitesini garanti etmez. Bu bakımdan spor probiyotiklerinin kullanımı spesifik terapötik amaçlarla sınırlıdır. Pürülan septik hastalıkların nozolojik formlarının değişkenliği ve disbiyotik bozuklukların gelişimi için etiyolojik olarak önemli mikroorganizmaların çeşitliliği, kullanılan biyolojik ürünün gerekliliklerini belirler. Bu, araştırmacıları sürekli olarak istenen özelliklere sahip antagonist suşları taramaya teşvik eder.

İncelediğimiz suşlar, B. subtilis'in temsilcilerine özgü morfolojik ve fizyolojik-biyokimyasal özelliklere sahipti ve çeşitli substratları parçalayan bir dizi enzimle karakterize ediliyordu.

Literatüre göre B.subtilis, sindirim süreçlerini normalleştirdiği ve aynı zamanda antitoksik ve antialerjik bir etki sağladığı için çok çeşitli patojenik mikroorganizmalara ve yüksek enzimatik aktiviteye karşı belirgin antagonistik özelliklere sahiptir.

İncelenen B. subtilis suşları, düşük (B. subtilis No. 1719) veya orta (B. subtilis No. 1594, B. subtilis No. 1318) düzeyde yapışma düzeyine sahip geniş bir antagonistik aktivite aralığına sahipti.

Dolayısıyla incelediğimiz suşlar yüksek probiyotik aktiviteye sahip olarak nitelendirildi. Ancak biyokimyasal özelliklerin incelenmesi, B. subtilis 1719 suşunun, incelenen substratların en büyük hidroliz bölgesinde ifade edilen daha yüksek enzimatik aktiviteye (proteaz, amilaz, lipaz) sahip olduğunu gösterdi. Ek olarak, B. subtilis 1719 suşunun düşük düzeydeki yapışma aktivitesi ve görünüşe göre kromozom tarafından kontrol edilen doğal antibiyotik direnci, bu kültürle ilgili daha fazla çalışmanın umut verici olduğu sonucuna varmamızı sağladı.

Bize göre, Bacillus cinsine dayalı ilaçların endüstriyel üretimini genişletme umutları çok büyük.

Basil kültür sıvısına birçok enzim salgılama yeteneğine sahiptir. Gıda ürünleri, deterjanlar ve biyomedikal maddelerin üretiminde kullanılan proteolitik ve amilolitik enzimlerin üretimi için önemli bir sanayi bölgesi olarak hizmet vermektedirler. Son on yılda onların katılımıyla bir dizi yeni antibiyotik, bakteriyel böcek ilacı ve diğer biyolojik olarak aktif maddeler elde edildi.

B. subtilis'in GRAS statüsünde olmasına rağmen literatürde bazı B. subtilis suşlarında patojenite faktörlerinin varlığına ilişkin izole raporlar bulunmaktadır. Yeniden tohumlama sırasında ortadan kaybolduğu için bunun kalıcı bir işaret olmadığı belirtilmektedir. Bakterilerin patojenik özelliklerinin plazmitlerin varlığıyla ilişkili olduğu öne sürülmüştür. Örneğin Le N. ve Anagnostopoulos S., incelenen 83 denekten alınan 8 B. subtilis suşundan plazmitleri izole etti. Plazmid DNA yalnızca B. subtilis'in toksijenik suşlarının hücrelerinde belirlendi ve aynı türün toksijenik olmayan diğer suşlarının hücrelerinde bulunamadı. Plazmidlerin eliminasyon ajanlarının etkisi altında toksijenik suşlardan elimine edilmesi, kültür filtratlarının toksijenik özelliklerinin ortadan kaldırılmasına yol açtı. Ancak plazmitlerin genetik rolü yeterince araştırılmamıştır.

Çalışmalarımızda incelenen üç B. subtilis suşunun izole edilmiş DNA preparatlarında plazmite rastlanmamıştır.

Basilin sıcakkanlı hayvanların vücudundaki etkisini inceleyen yazarlar, B. subtilis suşlarının insanlara ve hayvanlara tamamen zararsız olduğu sonucuna varmışlardır. Makroorganizmaya zararsızlığının kanıtı, parenteral uygulamadan sonraki birkaç gün içinde B. subtilis'in vücuttan atıldığını gösteren deneysel verilerle sağlanmaktadır. Bu mahsullerin terapötik etkisinin mekanizmaları hayvanlarda incelenmiştir. Şu anda, spor probiyotiklerinin terapötik etkisinin, aşağıdakileri içeren bir dizi faktör tarafından belirlendiğine inanılmaktadır: patojenik ve koşullu olarak patojenik mikroorganizmaların büyümesini baskılayan B. subtilis kültürleri tarafından bakteriyosin üretimi; yüksek derecede aktif enzimlerin sentezi: proteazlar, ribonükleazlar, transaminazlar, vb.; bakteriyel toksinleri nötralize eden maddelerin üretimi.

Farelerde seçilen suşun özellikleri üzerine yapılan bir çalışma, bunun avirülent olduğunu ve toksisite veya toksijeniteye sahip olmadığını gösterdi.

Probiyotiklerin makroorganizma üzerindeki olumlu etkisinin faktörleri, mikrobiyal sentezin çeşitli ürünleridir: amino asitler, polipeptit antibiyotikler, hidrolitik enzimler ve daha az öneme sahip bir dizi diğer biyolojik olarak aktif maddeler. Bu nedenle, Bacillus cinsinin mikroorganizmaları tarafından üretilen koruyucu maddelerin araştırılması, izolasyonu ve bunlara dayalı biyomedikal ilaçların oluşturulması acil bir ihtiyaçtır.

Gastrointestinal sistemde, patojenik ve koşullu patojenik mikroorganizmalara göre ağırlıklı olarak seçici olan basillerin doğrudan antagonistik etkisi ortaya çıkar. Aynı zamanda normal mikrofloranın temsilcilerine karşı düşmanlığın olmaması ile de karakterize edilirler.

Çalışmalarımızda, doksisiklin antibiyotiğinin uygulanmasıyla indüklenen deneysel disbiyozun düzeltilmesi sırasında, B. subtilis 1719 kültürü, bağırsak mikroflorasının bileşiminin ve sayısının normalleşmesine ve ayrıca bağırsaktaki koşullu patojenik mikroorganizmaların ortadan kaldırılmasına katkıda bulunmuştur. parietal ve luminal mikroflora.

Literatürden, Bacillus cinsinin endüstriyel suşlarının eritrositlere karşı düşük bir yapışma aktivitesi indeksine sahip olduğu ve bağırsak epitel hücrelerine karşı zayıf veya orta derecede yapışkanlığa sahip olduğu anlaşılmaktadır. B. subtilis 534 ve ZN suşlarının enterosit reseptörlerine, B. licheniformis suşunun kolonositlere, yani. Farklı suşların farklı bağırsak hücrelerindeki reseptörlere yapıştığı görülmektedir.

Aktiviteleri bağırsak lümeninde meydana gelir ve normal mikrofloranın temsilcileri üzerinde antagonistik bir etki göstermeden patojenik mikroorganizmalara yöneliktir. Spor probiyotikleri alırken, çeşitli bağırsak lokuslarında otoflorayı restore etme olasılığı fark edilir ve 3-5 gün sonra laktobasil, bifidobakteri, E. coli vb. sayısı artar ve ardından normal seviyelere geri döner.

Mikroorganizmaların enterositlere yapışması üzerine yaptığımız çalışmaların sonuçları, bağırsak hücrelerinin yapışma yeteneğinin normal mikrofloranın niceliksel ve niteliksel bileşimine bağlı olduğunu iddia etme olasılığını artırmaktadır. Disbiyotik koşullarda, şartlı olarak patojenik ve patojenik mikroorganizmaların bağlandığı enterositlerin yüzeyinde reseptörler açılır ve disbiyoz düzeltildiğinde bağırsakta normal mikroflora ve yüzeyine yapışabilen enterosit reseptörlerinin sayısı ile kolonize edilir. Yerli mikroorganizmalar azalır.

Normal mikrofloranın, bağışıklık oluşumu mekanizmasında ve makroorganizmanın doğum sonrası gelişiminde spesifik koruyucu reaksiyonlarda önemli bir tetikleyici rol oynadığı bilinmektedir.

Mikrofloranın immün yanıtın gelişimindeki rolü, immünstimülasyon ve immünsüpresyonu içeren evrensel immünomodülatör özelliklerinden kaynaklanmaktadır. Bakteriyel lipopolisakkaritlerin (LPS) Ig A immün tepkisi üzerinde immün düzenleyici etkiye sahip olduğu ve adjuvanların rolünü oynadığı tespit edilmiştir. Mikroflora, adaptasyon ve koruyucu mekanizmalar oluşturan, spesifik olmayan ve spesifik immünolojik reaksiyonlardan oluşan bir kompleksin gelişmesini sağlar.

Bir ilacın antimikrobiyal aktivitesi ne kadar yüksek olursa olsun, bulaşıcı patolojik durumun ortadan kaldırılmasında belirleyici bir rol oynar. Antimikrobiyal özelliklerde etkili olan ve bağışıklık tepkilerini uyaran ilaçların oluşturulması önemli bir görev gibi görünmektedir. Bu nedenle çok sayıda çalışma, probiyotik ilaçların insan ve hayvanların bağışıklık sisteminin farklı bölümleri üzerindeki etkisini incelemeyi amaçlamaktadır.

Aerobik basillerin canlı kültürlerinin uygulanması, Newcastle hastalığı virüsü tarafından in vitro olarak indüklenen serum interferon ve interferonun in vivo üretimini belirgin şekilde uyarır.

Bir dizi çalışma, probiyotik ilaçların immünomodülatör bir etkiye sahip olduğunu, patolojinin bozduğu bağışıklık durumunu düzelttiğini, endojen interferon üretimini arttırdığını, makrofaj hücrelerinin fonksiyonel aktivitesini arttırdığını, kan lökositlerinin - monositlerin ve nötrofillerin fagositik aktivitesini arttırdığını göstermektedir.

Çalışmalarımız, B. subtilis 1719 kültürünün, disbiyozun düzeltilmesi sırasında nötrofillerin metabolik aktivitesini önemli ölçüde değiştirdiğini ve yerli mikrofloranın normal durumunda nötrofillerin fonksiyonel aktivitesinde değişikliklere neden olmadığını göstermiştir. Ek olarak, disbiyozun TNF-a seviyesindeki bir artışın eşlik ettiği, bunun da makrofajların, lenfositlerin ve ayrıca ince bağırsağın endotel ve epitel hücrelerinin belirgin fagositik, sitotoksik, yapışkan aktivitesini gösterdiği bulunmuştur.

Disbiyozlu farelerde artan proinflamatuar sitokin salgılanması, muhtemelen bağışıklık sistemi yeterli hücrelerin (T lenfositleri, monositler/makrofajlar) aktivasyonunu yansıtır. B.subtilis 1719* kültürünün etkisiyle TNF-a üretiminde azalma gözlendi. Kültürün sağlam hayvanlara uygulanması, TNF-a üretim seviyesinde değişikliklere neden olmadı.

TNF-a'nın inflamatuar reaksiyonların bir belirteci olduğu göz önüne alındığında, probiyotiğin hayvanlarda immün sistemi sağlam hücrelerin anti-inflamatuar aktivitesinin arttırılmasında önemli bir rol oynadığı sonucuna varıldı.

B. subtilis 1719 suşunun etkisi altında sitokin üretiminin dinamiklerini incelemek için yapılan çalışmalar, kültürün, miktarı kademeli olarak biriken IL-lp dışında, uygulamadan sonraki ilk saatlerde sitokin üretimi üzerinde herhangi bir etkisinin olmadığını gösterdi. . İncelenen diğer sitokinlerin (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-y) seviyesi 12 ila 24 saat aralığında önemli ölçüde arttı.

Bu nedenle, bağışıklık sistemi hücrelerinin modülasyonu ve sitokin potansiyelindeki değişiklikler, B. subtilis 1719 kültürünün disbiyozun düzeltilmesine katkıda bulunduğu mekanizmalardan biri olabilir.

Ülkemizde ve yurt dışında yürütülen bilimsel araştırmaların sonuçlarının analizi, Bacillus cinsi bakterilerin bakteriyel biyokütleden veya bunların metabolitlerinden ürün elde etmek için kullanım ölçeğini göstermektedir. Bacillus cinsine ait bakterilerin yetiştirilmesine yönelik bilinen yöntemler, bir dizi bakteri ve enzim preparatının üretilmesine yönelik teknolojinin temelini oluşturur. .

B. subtilis 1719 kültürünün çeşitli sıvı besin ortamlarında büyüme özellikleri incelendiğinde, maksimum biyokütle birikimi için, türün yetiştirilmesi için en uygun substratın, glikoz ilavesiyle BK-2 ortamı olarak kabul edilebileceği veya sakaroz

Şu anda, mikroorganizmaların üretim kültürlerini seçerken ve karakterize ederken, esas olarak aşağıdaki biyolojik karakteristik göstergeler dikkate alınmaktadır: antagonistik aktivitenin spektrumu ve seviyesi, üretilebilirlik, yani. Biyo* kütleyi hızlı bir şekilde biriktirme yeteneği, dondurarak kurutmaya karşı direnç, depolama sırasında canlılık. İnsan sağlığı için kullanılan mikroorganizmaların güvenlik derecesine ilişkin kriterlere özellikle dikkat edilir.

B.subtilis 1719'un mikrobiyal hücrelerinin sıvı stabilizatörler eşliğinde saklandığında canlılığını değerlendirmek için yapılan çalışmalarda, en uygun stabilizatörün %7'lik bir NaCl çözeltisi olduğu ortaya çıktı; bu, türün canlılığının ve antagonistik özelliklerinin uzun süre korunmasına olanak sağladı. 2 yıl. Kültürün özelliklerini 1,5 yıl korumak için %10'luk gliserol çözeltisi, 1 yıl damıtılmış su kullanmak mümkün olup, bu dolgu maddelerinin B. subtilis 1719 suşu. Önemli bir gerçeğin, B.subtilis 1719 suşunun sıvı stabilizatörlerde S.sonnei ve S.aureus'a karşı 36 ay gibi uzun bir süre boyunca antagonistik aktiviteyi sürdürme yeteneği olduğu belirtilmelidir. (gözlem süresi).

Sakkaroz-jelatin stabilizatörüyle dondurarak kurutma, B. subtilis suşu 1719'un canlılığını ve antagonist aktivitesini 4 yıl boyunca (gözlem süresi) korudu.

Şu anda, iyi bilinen probiyotik ilaçlar pratik sağlık hizmetlerinde yaygın olarak kullanılmaktadır: baktisubtil, sporobakterin, biyosporin, baktisporin, subalin, sereobiyojen, enterogermin ve diğerleri

B. subtilis suşu 1719'un aşağıdaki probiyotik preparatların ticari kültürleriyle antagonistik ve yapışkan aktivite açısından karşılaştırmalı çalışması: Sporobacterin, Rusya (B. subtilis 534), Cereobiogen, Çin (B. cereus DM423), Subtil, Vietnam (B. cereus var) . vietnami), Baktisubtil, Fransa (B.cereus IP5832), Nutrolin, Hindistan (B.coagulans), izole edilen suşun orijinal olduğunu ve yeni bir probiyotik ilaç elde edilirken üretim olarak önerilebileceğini gösterdi.

Dolayısıyla, fizyolojik ve biyokimyasal özellikler açısından B. subtilis 1719 suşu, adını taşıyan GISC'nin kültür koleksiyonuna bırakıldığında kültür pasaportuna dahil edilen açıkça ayırt edilebilir bireysel özelliklere sahiptir. J.I.A. Taraseviç. Ek olarak, izole edilmiş B. subtilis 1719 suşunun antagonist aktivite açısından baskın konumu, bu kültürün, buna dayalı bir probiyotik preparatın geliştirilmesi için kullanılma umutlarını göstermektedir.

Kaynakça Biyoloji tezi, biyolojik bilimler adayı, Gataullin, Airat Gafuanovich, Moskova

1. Ashmarin I.P., Vorobyov A.A. Mikrobiyolojik araştırmalarda istatistiksel yöntemler. Medizd, 1962, 180 s.

2. Baibakov V.I., Karikh T.L., Borukaeva L.A. ve diğerleri Bifidobakteri konsantresinin etkisi altında bağırsak mikroflorasının normalleştirilmesi ve JCR farelerinin genel durumu.//Antibiyotikler ve kemoterapi. 1997. - T.42, Sayı 3. - S.20-24.

3. Baida G.E., Budarina Zh.I. Bacillus cereus'un hemolizin II geninin birincil yapısı ve analizi // 2 Rev. dağlar ilmi konf. onlar söylüyor Bilim adamları, Pushchino, 23-25 ​​Nisan. 1997: Özet. rapor Pushchino. - 1997 - s. 45-46.

4. Baida G.E., Kuzmin N.P. Escherichia coli'ye klonlanan Bacillus cereus'un HLY-III geni, gözenek oluşturucu yeni bir hemolizini kodlar. konf. özel akademisyenin anısına A.A. Baeva: Rapor özetleri, Moskova, 20-22 Mayıs 1996. M. - 1996. - S. 108, 291.

5. Baranovsky A.Yu., Kondrashina E.A. Dysbacteriosis ve bağırsak disbiyozu // St. Petersburg. "Peter". -2000. -209 s.

6. Bakhanova E.M., Nikolaev S.M., Nikolaeva I.G., ve diğerleri Rast. kaynaklar. 2001. T.37, hayır. 1. sayfa 70-76. Pentaphylloides fruticosa sürgünlerinden elde edilen bir ekstraktın, sülfadimetoksin ve izoniazidin neden olduğu deneysel bağırsak disbiyozunun seyri üzerindeki etkisi

7. Belyavskaya V.A., Sorokulova I.B., Ilyichev A.A. Rekombinant basil bazlı immün preparatların tasarımına yönelik beklentiler // Biyoteknolojinin yeni yönleri: Proc. doktor. YI Konf. RF, 24-26 Mayıs 1994. Puşçino. -1994.-S. 68.

8. Belyavskaya V.A., Sorokulova I.B., Masycheva V.A. Rekombinant probiyotikler: tıp ve veterinerlik tıbbında kullanıma yönelik sorunlar ve beklentiler // Dysbacteriosis ve eubiyotikler: Tüm Rusya Bilimsel ve Pratik Konf.'nin Özetleri. M. - 1996. - S. 7.

9. Belyavskaya V.A., Cherdyntseva N.V., Bondarenko V.M. ve diğerleri Probiyotik ilaç Subalin'in rekombinant bakterileri tarafından üretilen interferonun biyolojik etkileri. Günlük microbiol., 2003, No. 2, s. 102-109.

10. Belyaev E.I. Bağırsak mikroflorasını normalleştiren ilaçları geliştirmenin yolları / Rep. bilimsel makalelerin toplanması: “Normal ve patolojik koşullarda insan otoflorası. Acı. - 1988. - S.74-78.

11. Bilibin A.F. // Ter. kemer. -1967. 11. - s. 21-28.

12. Bilibin A.F. // Klin. İlaç. 1970. - No. 2. - S. 7-12.

13. Birger M.Ö. Mikrobiyolojik ve virolojik inceleme yöntemleri el kitabı. Mikroorganizmaların antibiyotiklere duyarlılığının belirlenmesi. M.: Tıp, 1982. - S. 180.

14. Blinkova L.P., Semenov S.A., Butova L.G. ve diğerleri Bacillus // JMEI cinsinin taze izole edilmiş bakteri suşlarının antagonist aktivitesi. 1994. -N5.-S. 71-72.

15. Boyko N.V., Turyanitsa A.I., Popovich E.P., Vyunitskaya V.A. Bacillus subtilis kültürlerinin Klebsiella / Microbiol cinsi bakteriler üzerindeki antagonist etkisi. Ve. 1989. - T. 51, N 1. - S. 87-91.

16. Boyko N.V., Lisetska M.V. Rozrobka probutiyuv vib1rkovostn: Protiskle-romna efektivshst dyakikh suşları V. subtilis // Nauk. Vyun. Uzhgor. un-tu. Ser. Boğa. 1997. - N 4. - S. 194-198.

17. Bondarenko V.M., Petrovskaya V.G. Bulaşıcı sürecin gelişiminin erken aşamaları ve normal mikrofloranın ikili rolü // Rusya Tıp Bilimleri Akademisi Bülteni. -M.- 1997.-N3.-C. 7-10.

18. Bondarenko V.M., Chuprinina R.P., Aladysheva Zh.I., Matsulevich T.V. Probiyotikler ve terapötik etkilerinin mekanizmaları // Deney. ve kama, gastroenterol. 2004. No. 3. S. 83-87.

19. Bochkareva N.G., Belogortsev Yu.A., Udalova E.V. ve diğerleri Bacillus subtilis bakteri suşu, b-glukanaz ile zenginleştirilmiş bir hidrolitik enzim kompleksinin üreticisidir // Pat. N 2046141 Rusya, C12 N 9/42, Yayın. 10.20.95. - Boğa. N 29.

20.Brilis V.I. Laktobasillerin yapışkan özellikleri // Özet. dis. Doktora Bal. Bilim. Tartu. -1990. - 25 saniye.

21. Brilis V.I., Briline T.A., Lenzner H.P., Lenzner A.A. Laktobasillerin yapışkan ve hemaglutinasyon özellikleri. Günlük Microbiol., 1982, 9:7578.

22. Vasilyeva V.L., Tatskaya V.N., Reznik S.R. Laboratuvar hayvanlarında immün asit sıvılarının elde edilmesinde bitki ve mikrobiyal adjuvanların kullanılması deneyimi // Mzhrobyul. dergi 1974. T. 36, N 3. - S. 358-360.

23. Vershigora A.E. İmmünolojinin temelleri // Kiev: Vishcha okulu. 1975. - 319 s.

24. Vinnik Yu.S., Peryanova O.P., Yakimov S.V. ve diğerleri, Antagonistler kullanılarak cerahatli yaraların tedavi yöntemi / Uluslararası immünorehabilitasyon dergisi. 1998. - N 4., s.143.

25. Vinogradov E.Ya., Shichkina V.P. Buzağılarda spesifik olmayan bağışıklığın biyostimülatörünün üreticisi olarak bakteri suşu B. mucilaginosus // A.S. 1210452, SSCB -1/00. Yayın 04/27/96. - Boğa. N 12.

26. Vladimirov Yu.A., Sherstnev M.P. Bilim ve teknolojinin sonuçları: Biyofizik 1989; 24:172.

27. Vorobyov A.A., Abramov N.A., Bondarenko V.M., Shenderov B.A. Dysbacteriosis tıpta acil bir sorundur // Tıp Bilimleri Akademisi Bülteni. -1997. - Hayır. 3. -P.3-9.

28. Vorobyov A.A., Nesvizhsky Yu.V., Zudenkova A.E., Budanova E.V. Fareler üzerinde yapılan deneylerde kolonun parietal ve luminal mikroflorasının karşılaştırmalı çalışması. Günlük microbiol., 2001, 1: 62-67.

29. Vorobyov A.A., Nesvizhsky Yu.V., Lipnitsky E.M. ve diğerleri İnsan bağırsağının parietal mikroflorasının incelenmesi. Günlük microbiol., 2003, 1: 6063.

30. Vyunitskaya V.A., Boyko N.V., Spivak N.Ya., Ganova L.A./ Yeni mikrobiyotiklerin bazı etki mekanizmaları // Bitkisel üretim ve yem üretiminin yoğunlaştırılmasının mikrobiyolojik ve biyoteknolojik temelleri: Özetlerin toplanması Alma-Ata, 1990. - P 17.

31. Galaev Yu.V. Bakterilerin patojenik enzimleri // M .: Tıp. 1968. - 115 s.

32. Goncharova G.I., Semenova A.P., Lyannaya A.M., ve diğerleri Bağırsaktaki bifid floranın kantitatif seviyesi ve bunun insan sağlığı ile ilişkili ilişkisi. // Antibiyotikler ve insan ve hayvanların mikroekolojisi. -1988.-S.118-123

33. Gorskaya E.M. Bağırsaklarda mikroekolojik bozuklukların gelişim mekanizmaları ve bunların düzeltilmesine yönelik yeni yaklaşımlar.//Bilimsel Tez

34. Gracheva N.M., Goncharova G.I. ve diğerleri Bağırsak enfeksiyonu olan hastaların tedavisinde bakteriyel biyolojik preparatların kullanımı. Bağırsak disbiyozunun tanı ve tedavisi. Yönergeler. 1986, s.23

35. Gracheva N.M., Gavrilov A.F., Avakov A.A. vb. - Yeni ilaçlar. 1994, Sayı 1, s. 3-12

36. Gracheva N.M., Gavrilov A.F., Solovyova A.I. ve diğerleri Akut bağırsak enfeksiyonlarının tedavisinde yeni bakteriyel ilaç biyosporinin etkinliği // Journal. mikrobiyol. 1996. - N 1. - S. 75-77.

37. Grebneva A.J1., Myagkova L.P. Bağırsak disbiyozu // 3 ciltte gastroenteroloji kılavuzu M., 1996. -T.Z. -S.324-334

38. Grigorieva T.M., Kuznetsova N.I., Shagov E.M. Colorado patates böceğine karşı spesifik aktiviteye sahip bir ekzotoksin sentezleyen Bacillus thuringiensis 4KN suşu // Biyoteknoloji. 1994. - N 9-10. - S.7-10.

39. Gulko M.A., Kazarinova JI.A., Pozdnyakova T.M. İnosin üretme yöntemi // Pat. N 175583, C12P 19/32. Yayın 08/30/94. - Boğa. N 16.

40. Demyanov A.V., Kotov A.Yu., Simbirtsev A.S., Klinik pratikte sitokin düzeylerinin incelenmesinin tanısal değeri. Sitokinler ve İnflamasyon Dergisi, 2003, Cilt 2, Sayı 3, s. 20-35

41. Egorov N.S., Zarubina A.P., Vybornykh S.N., Landau N.S. Bacillus cinsinin bakterilerini yetiştirmek için sentetik * ortam // Moskova Devlet Üniversitesi Bülteni. 1989. N 4.1. S.52.

42. Ermakova L.M., Smirnova T.A., Alikhanyan S.I. ve diğerleri, Değişmiş bir proteinaz spektrumuna sahip bir Bacillus subtilis mutantındaki kristal kapanımları // Dokl. SSCB Bilimler Akademisi. 1977. - T. 236, N 4. - S. 1001-1003.

43. Zhirkov I.N., Bratukhin I.I. Buzağılarda disbiyozun düzeltilmesinde probiyotik RAS'ın kullanımı // Veterinerlik. 1999. N 4. - s. 40-42.

44. Zgonnik V.V., Furtat I.M., Vasilevskaya I.A. ve diğerleri Lizin üretimi sürecini kirleten spor oluşturan bakterilerin antagonistik özellikleri // Microbiol. Ve. 1993. -T.55, N4. - s. 53-58.

45.Zinkin V.Yu. İnsan kanı nötrofilleri ile fotometrik NBT testi ve kas-iskelet sistemi travmalı hastalarda klinik ve immünolojik önemi. Yazarın özeti. dis. Doktora Bal. Bilimler - Moskova, 2004.

46. ​​​​Zudenkov A.E. Normal koşullarda ve bazı patolojik durumlarda kolon parietal müsininin immünokompetan hücrelerinin mikroflorası ve bileşimi. Yazarın özeti. dis. Doktora Bal. Bilimler, Moskova, 2001.

47. Ivanovsky A.A., Hayvanlarda çeşitli patolojiler için yeni probiyotik baktosellolaktin // Veterinerlik. 1996 - N11. - s. 34-35.

48. Ivanovsky A.A., Vepreva N.S., Zimireva V.V., Lagunova O.P. Veteriner hekimliği için probiyotik üretme yöntemi / RU Patent N 2084233, yayın. 07.20.97. Boğa. N 20.

49. Kandybin N.V., Ermolova V.P., Smirnov O.V. Bakterikülisit kullanımına ilişkin sonuçlar ve beklentiler // Sovrem. başarı biyoteknoloji: Mater. 1 Konf. Kuzey Kafkasya bölge, Stavropol, Eylül. 1995. Stavropol. - 1995. - s. 14-15.

50. Kashirskaya N.Yu. Bağırsak mikroflorasının düzenlenmesinde probiyotik ve prebiyotiklerin önemi.//Rus Tıp Dergisi. 2000. - T.8, Sayı 13-14. - sayfa 572-575.

51. Kovalchuk L.V., Gankovskaya L.V., Rubakova E.I. Sitokin sistemi. M., 2000.

52. Kozachko I.A., Vyunitskaya V.A., Berezhnizkaya T.G. ve diğerleri 4 Bacillus cinsinin bakterileri, bitkileri hastalıklardan korumak için biyolojik araçların oluşturulması için umut verici ürünlerdir. // Mshrobyul. Ve. - 1995.- T.57, N 5. - S. 69-78.

53.Krasnogolovets V.N. Bağırsak disbiyozu. M., 1979. -198 s.

54. Kudryavtsev V.A., Safronova J.I.A., Osadchaya A.I. ve diğerleri Canlı Bacillus subtilis kültürlerinin organizmanın spesifik olmayan direnci üzerindeki etkisi // Microbiol. Ve. 1996 - T.58, N 2. - S.46-53.

55. Kuznetsova N.I., Smirnova T.A., Shamshina T.N. ve diğerleri Bacillus thuringiensis suşu, karasinekler için toksik // Biyoteknoloji. 1995.-N3-4.-S. 11-14.

56. Lapchinskaya A.V., Shenderov B.A. Sefaleksin ve bazı immünomodülatörlerin neden olduğu disbiyozun düzeltilmesi.//Mikrobiyal ekolojinin tıbbi yönleri. M., 1991.-S.70-79

57. Lenzner A.A., Lenzner H.T., Michelsaar M.E. ve ark. Laktoflora ve kolonizasyon direnci.//Antibiyotikler ve bal. biyoteknoloji. -1987. -32. -Numara 3. -İLE. 173-180.

58. Leshchenko V.M. Visseral kandidiyazın kliniği, tanı ve tedavisi. Yönergeler. M., 19871.

59. Lisetska M.V. Bacillus subtilis suşu 1b ve Klebsiella rhinoscleromatis // Nauk'un antagonistik aktivitesinin deneysel çalışması. Vyun. Uzhgor. un-tu. Ser. Boğa. 1997. - N 4. - S. 207-212

60.Lopatina T.K. ve ark. Öbiyotik ilaçların immünomodülatör etkisi * // Rusya Tıp Bilimleri Akademisi Bülteni. M., “Tıp”. -1997. Numara 3. -S.30-34

61.Lukin A.A. Plazmid ve plazmid içermeyen mikroorganizmalarda antibiyotik oluşumu ve sporülasyonu // Pushchino. 1978. - s. 25-28.

62. Mazankova JI.H., Mikhailova N.A., Kurokhtina I.S. ve diğerleri Bactisporin, çocuklarda akut bağırsak enfeksiyonlarının tedavisi için yeni bir probiyotiktir // İnsan ve Tıp: Proc. rapor V Rusya Ulusal Kongresi, Moskova, 8-12 Nisan 1997. - M. - S. 199.

63. Mazankova L.N., Vaulina O.V. Disbiyotik bozuklukların düzeltilmesi için yeni ilaçlar.//Çocuk Doktoru. 2000. No.3. - S.51-53.

64. Maniatis T., French E., Sambrook J. Genetik mühendisliği yöntemleri. Moleküler klonlama, 1984.

65. Markov I.I., Zhdanov I.P., Markov A.I. Mycobacterium tuberculosis'in Bacillus subtilis MZh-6 antagonisti suşu // Pat. N 2120992, C 12N 1/20. - Yayın. 10.27.98.-Bul.N30.

68. Mikshis N.I., Shevchenko O.V., Eremin S.A. ve diğerleri, Bacillus anthracis suşlarının popülasyon heterojenliği II Dep. VINITI'de 06/04/98. Saratov. -1998.-7 s.

69. Mitrokhin S.D. // Antibiyotikler ve kemoterapi. 1991. - Sayı 8. - S.46 - 50.

70. Mitrokhin S.D. Kolon disbiyozunun hızlı teşhisi ve tedavisinin izlenmesinde normal insan mikroflorasının metabolitleri: Tezin özeti. Dr. med. Bilimler, M., 1998. 37 s.

71. Mitrokhin S.D., Ardatskaya M.D., Nikushkin E.V., Ivanikov I.O. ve diğerleri - M., 1997. 45 s. İç hastalıkları kliniğinde bağırsak disbiyozunun (disbiyoz) kapsamlı tanısı, tedavisi ve önlenmesi (Kılavuz).

72. Mitrokhin S.D., Shenderov B.A. Rifampisinin etkisi altında sıçanların kalın bağırsağının mikrobiyal ekolojisindeki değişikliklerin mikrobiyolojik ve biyokimyasal göstergeleri. Antibiyotikler ve kemoterapi - 1999, T. 34 No. 6 (482-4).

73. Molchanov O.JL, Poznyak A.JI. Bakteriyel vajinozun karmaşık tedavisinde biyosporinin kullanımı // Proc. Dokl: Bulaşıcı hastalıkların tanı ve tedavisi için modern teknolojiler. St.P. - 1999, s.187.

74. Muzychenko JI.A., Senatorova V.N., Alkhovskaya JI.JI. ve diğerleri Mikroorganizmaların gelişiminin morfometrik analizi / Biyoteknoloji. 1990. - N 3. - S. 3-6.

75. Müller G., Litz P., Munch G. Bitkisel kökenli gıda ürünlerinin mikrobiyolojisi// M.: B.I..- 1977.- P.343 347

76. Nikitenko V.I. İnflamasyonun önlenmesi ve tedavisi için bakteriyel ilaç. yanma süreçleri ve alerjik hastalıklar // Uluslararası başvuru. N 89/09607, WO, yayın. 10/19/1989.

77. Nikitenko V.I. İlaçlar yerine bakteri // SSCB'de bilim. - 1991. - N 4. -S. 116-121.

78. Nikitenko V.I. Diatez, disbakteriyoz ve bakteriyel enfeksiyonların tedavisine yönelik bir süt ürünü elde etmek için kullanılan bir Bacillus subtilis bakteri türü // A.S. N 1648975, S.U. 15.05'te yayınlandı. 91.

79. Nikitenko V.I., Nikitenko I.K. Hayvanlarda bakteriyel enfeksiyonlara karşı terapötik ve profilaktik bir ilacın üretiminde kullanılan bir Bacillus pulvifaciens bakteri türü // A.S. N 1723117, S.U. yayın. 12. 1992.

80. Nikitenko V.I., Nikitenko I.K. Antiinflamatuar süreçlerin ve alerjik hastalıkların önlenmesi ve tedavisi için bir ilaç elde etmek için kullanılan bir Bacillus subtilis bakteri türü // A.S. N 1723116, S.U. yayın. 12. 1992.

81. Nikitenko L.I., Nikitenko V.I. Bakteri suşu Bacillus sp. Disbiyoz ve alerjilere karşı terapötik ve profilaktik bir ilacın bileşeni // A.S. N 1710575, S.U. - yayın. 5. 1992.

82. Nikitenko V.I., Gorbunova N.N., Zhigailov A.V. Sporobacterin, disbakteriyoz ve pürülan iltihaplı süreçlerin tedavisi için yeni bir ilaçtır // Disbakteriyoz ve öbiyotikler: Tüm Rusya'daki raporların özetleri. bilimsel-pratik konf. -M.- 1996.-S. 26.

83. Nikolicheva T.A., Tarakanov B.V., Golinkevich E.K., Komkova E.E. Bacillus micilaginosis diyete dahil edildiğinde domuz yavrularının sindirim sisteminin biyosinozunda meydana gelen değişiklikler // Bülten. Tüm Rusya Fizik Araştırma Enstitüsü, Çiftlik Hayvanlarının Biyokimyası ve Beslenmesi. 1989.-N 2. - S.31-35.

84. Obukhova O.V., Soboleva N.N. Saprofitik spor bakteri kültürlerinde bir dağılım faktörünün varlığı üzerine // Journal. mikrobiyol. 1950. - N 12. S. 482-485.

85. Mikroorganizmaların antibakteriyel ilaçlara duyarlılığının belirlenmesi. Metodolojik öneriler MUK 4.2.1980-04, 2004.

86. Osadchaya A.I., Kudryavtsev V.A., Safronova JI.A. Su altında ekim sırasında orta asitliğin ve sıcaklığın Bacillus subtilis polisakkaritlerinin büyümesi ve atılımı üzerindeki etkisi // Misrobyul. dergi 1998. - T. 60., N 4. - S. 25-32.

87. Osipova I.G. Kolibakterin ve spor eubiyotiklerinin koruyucu etki mekanizmasının bazı yönleri ve bunların kontrol edilmesinde yeni yöntemler. // Yazarın özeti. Biyoloji alanında doktora tezi - M., 1997. - 25 s.

88. Osipova I.G., Sorokulova I.B., Tereshkina N.V., Grigorieva JI.B. Bazı probiyotiklerin temelini oluşturan Bacillus cinsinin bakterilerinin güvenliğinin incelenmesi // Journal. mikrobiyol. 1998. - N 6. - S. 68-70.

89. Osipova I.G., Mikhailova N.A., Sorokulova I.G., Vasilyeva E.A., Gaiderov A.A. Spor probiyotikleri. Günlük mikrobiyol. - 2003. No.3. İle. 113-119.

90. Osterman L.D. Proteinleri ve nükleik asitleri inceleme yöntemleri. 1981.

91. Panin A.N., Serykh N.I., Malik E.V. ve diğerleri Domuz yavrularında probiyotik tedavisinin etkinliğinin arttırılması / Veterinerlik, 1996. - N 3. - S. 17.

92. Panchishina M.V., Oleinik S.F. Bağırsak disbiyozu. Kiev, 1983

93. Parshina S.N., Imshenetsky A.A., Nesterova N.G. ve diğerleri Bacillus segesh bakteri suşu, trombolitik etkilere sahip bir proteolitik enzim üreticisidir // A.C.N 1615177, C 12N 1/20. Yayın tarihi 12/23/90. - Bülten N 4. 1988.

94. Perth S. D. Mikroorganizmaların ve hücrelerin yetiştirilmesinin temelleri. M. Mir, 1978, 332 s.

95. Petrov L.N., Verbitskaya N.B., Vakhitov T.Ya. İnsan endo-ekolojisi hakkındaki fikirlere dayanarak disbiyozun tedavisi ve önlenmesi için ilaçların tasarımı // Rus. Ve. HIV/AIDS ve ilgili sorun 1997.- T.1, N 1.P.161-162.

96. Petrovskaya V.G., Marko O.P. Normal ve patolojik koşullarda insan mikroflorası. M.: Tıp. -1976. -217 C.

97. Poberiy I.A., Kharechko A.T., Sadovoy N.V., Litusov N.V. Çocuklar ve yetişkinler için yeni kompleks eubiyotik “biyosporin” / Başkurdistan Sağlık Hizmetleri. 1998. -N 1. - S.97-99.

98. Pogosyan G.P., Nadirova A.B., Kaliev A.B., Karabaev M.K. Plazmid pCL1 ve Bacillus sp.'nin antimikrobiyal aktivitesi. 62 II Moleküler genetik, mikrobiyol. ve viroloji. 1999. - N 1. - S. 37-38.

99. Podberezny V.V., Parikov V.A. Simbiyotik bakterilerin yetiştirilmesi için ortam Bacillus pulvifaciens veya Bacillus subtilis - probiyotik üreticisi // RU Patent No. 2100029, yayın. 12/27/97. 36 Sayılı Bülten.

100. Podberezny V.V., Polyantsev N.I., Ropaeva L.V. Peynir altı suyunda Bacillus subtilis üretim suşlarının yetiştirilmesi // Veterinerlik - 1996.-N 1.-S. 21-29.

101. Podoprigora G.I. Bağışıklık ve spesifik olmayan kolonizasyon direnci mekanizmaları.//Antibiyotikler ve kolonizasyon direnci/Tüm Rusya Antibiyotik Araştırma Enstitüsü Yığınları. - M. -1990. - X1X'i sorun. -İLE. 15-25.

102. Polkhovsky V.A., Bulanov P.A. Bacillus cereus'taki amino asit dekarboksilazlar hakkında // Mikrobiyoloji. 1968. - T. 37, N 4. - S. 600-604.

103. Pospelova V.V., Gracheva N.M., Antonova L.V. ve diğerleri Biyolojik mikrobiyal preparatlar, dozaj formları ve uygulama alanları // Yeni ilaçlar: Ekspres bilgiler. -1990. -Cilt. 5. - s. 1-8.

104. Pospelova V.V., Rakhimova N.G., Khaleneva M.P. ve diğerleri İnsan vücudundaki bakteriyosenozun düzeltilmesi için mikrobiyal biyolojik ürünlerin yeni uygulama alanları.//Immunobiol. ilaçlar. M.-1989. -İLE. 142-152.

105.Reznik S.R. Hayvanların viral ve bakteriyel hastalıklarının tedavisi ve önlenmesi için bir yöntem // SU, A.s. N 1311243, yayın. 1982.

106. Reznik S.R., Sorokulova I.B., Vyunitskaya V.A. ve diğerleri Önleyici biyolojik ürün sporolakt // Patent N 2035186. RU. - A 61 K 35/66, yayın. 05/20/95, bülten. N 14.

107. Reznik S.R., Shust I.I. Bacteria-SL ilacı verildiğinde buzağıların hematolojik ve sitokimyasal parametreleri // Tarım hayvanlarının biyokimyası ve gıda programı: Proc. rapor Tüm Birlik sempozyum -Kiev, 1989. S. 25.

108. Reshedko G.K., Stetsyuk O.U. Disk difüzyon yöntemini kullanarak mikroorganizmaların duyarlılığını belirlemenin özellikleri. Modern klinik mikrobiyoloji yöntemleri, sayı 1. Smolensk, 2003.

109.Ryapis JI.A., Lipnitsky A.V. Bakteriyel patojenitenin mikrobiyolojik ve popülasyon genetik yönleri // Journal. mikrobiyol. 1998. - N 6. S. 109-112.

110. Savitskaya K.I. Gastrointestinal sistemin mikroekolojisinin bozuklukları ve kronik bağırsak hastalıkları // Terra medica. - 1998. N 2. - s. 13-15.

111. Svechnikova E.B., Maksyutova L.F., Khunafin S.N. ve diğerleri, Termal yaralanmalı çocukların karmaşık tedavisinde baktisporin kullanma deneyimi // Proc. Dokl: Bulaşıcı hastalıkların tanı ve tedavisi için modern teknolojiler. St.P. - 1999 - S.268.

112. Sinev M.A., Budarina Zh.I., Gavrilenko I.V. ve diğerleri, Bacillus cereus hemolisin II'nin varlığının kanıtı: hemolizin II'nin genetik belirleyicisinin klonlanması // Molek. biyol. 1993. - T. 27, N 6. - S. 1218-1229.

113. Slabospitskaya A.T., Krymovskaya S.S., Reznik S.R. Biyolojik ürünlere dahil edilmeyi ümit eden basillerin enzimatik aktivitesi // Microbiol. Ve. 1990. - N2. - S.9-14.

114. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vasilevskaya I.A. Spor oluşturan aerobik bakteriler biyolojik olarak aktif maddelerin üreticileridir. - Kiev, 1982 - 280 s.

116. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vasilevskaya I.A. Spor oluşturan aerobik bakteriler - biyolojik olarak aktif madde üreticileri // Kiev. Naukova Duması.- 1983.- 278 s.

117. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. ve diğerleri Asemptomatik bakteriyemi oluşumunun bazı mekanizmaları hakkında // Microbiol. dergi 1988 -T. 50, N6.-S. 56-59.

118. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. ve diğerleri Pürülan septik doğum sonrası hastalıkların canlı kültürlerin süspansiyonu ile tedavi yöntemi // A. s. N 1398868 S.U. - 61 K 35/74. - yayın. 05/30/88, bülten. N 20.

119. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. ve diğerleri İnsan gastrointestinal hastalıklarının önlenmesi ve tedavisi için ilaç biyosporin // A. s. N 1722502. S.U. - A 61 K. 39/02, yayın. 03/30/92.

120. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B., Vyunitskaya V.A. Sıcak kanlı hayvanların mikroflorasının düzeltilmesi için bakteriyel preparatların oluşturulması ve kullanılmasıyla ilgili tartışmalı konular // Microbiol. dergi 1992. - T.54, N 6.- S.82-92.

121. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vyunitskaya V.A., ve diğerleri Bacillus II Microbiol cinsinin bakterilerinden probiyotiklerin terapötik ve profilaktik etki mekanizmaları hakkında modern fikirler. dergi - 1993. - 55, - Sayı. 4. S. 92-112

122. Smirnov V.V., Osadchaya A.I., Kudryavtsev V.A., Safronova JI.A. Bacillus subtilis'in çeşitli havalandırma koşullarında büyümesi ve sporlanması // Microbiol. dergi 1993. - T. 55, N 3. - S. 38-44.

123. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. ve diğerleri Önleyici biyolojik ürün subalin // Patent N 2035185, RU. A 61 K 35/66, yayın. 05/20/95, bülten. N 14.

124. Smirnov V.V., Sorokulova I.B., Osipova I.G. Bulaşıcı hastalıkların önlenmesi ve tedavisi için biyolojik ürün alt başlığı // Patent N 2129432. -A. 61 K 35/74. - Boğa. N 12, yayın. 04/27/99.

125. Smirnov V.V., Reva O.N., Vyunitskaya V.A. Probiyotiklerin tasarımında basillerin antagonistik etkisinin matematiksel bir modelinin oluşturulması ve pratik uygulaması // Mshrobyulopchnyi zhurn. 1995. -T. 64, N 5.-S. 661-667.

126. Smirnov V.V., Kosyuk I.V. Bacillus cinsinin bakterilerinin yapışkan özellikleri - drobiyotik bileşenleri // Mshrobyulopchnyi zhurnal. 1997. - T. 69, N 6. - S. 36-43.

127. Sorokulova I.B. Yeni biyolojik ürünlerin tasarımında Bacillus cinsi bakterilerin kullanım beklentileri // Antibiyotikler ve kemoterapi. -1996. T.41, N 10. - s. 13-15.

128. Sorokulova I.B. Biyo-sporin ve basil bazlı diğer ticari preparatların biyolojik özelliklerinin karşılaştırmalı olarak incelenmesi // Mshrobyu-lopchny dergisi. 1997. - T. 69, N 6. - S. 43-49.

129. Sorokulova I.B. Basillerden gelen probiyotiklerin makrofajların / Antibiyotiklerin ve kemoterapinin fonksiyonel aktivitesi üzerindeki etkisi. 1998. - T.43, N 2. - S.20-23.

130. Storozhuk P.G., Bykov I.M., Storozhuk A.P. Vücudun immün yetmezlik durumlarında protein beslenmesinin ve enzim replasman tedavisinin patogenetik yönelimi // Uluslararası immünorehabilitasyon dergisi. 1998. - N 10., s. 110-115.

131. Tabolin V.A., Belmer S.V., Gasilina T.V. ve diğerleri Çocuklarda bağırsak disbiyozunun akılcı tedavisi. Yönergeler. M., 1998.-11 s.

132. Topchy M.P. Buzağılarda disbakteriyoz tedavisinde Bacillus subtilis'in canlı kültürlerinden elde edilen ilaçların kullanımı: Tezin özeti. dis. Doktora biyol. Bilim. Minsk, 1997. -21 s.

133. Trishina N.V. Bağırsak disbiyozunun gelişimi ile antiendotoksin bağışıklığının durumu arasındaki ilişki. Yazarın özeti. dis. Doktora Bal. Bilim. -Moskova, 2003., 24 s.

134. Öğretmen I.Ya. Bağışıklık sistemindeki makrofajlar. M 1978; 175.).

135. Fazylova A.A. Küçük çocuklarda bağırsak disbiyozunda sporobakterin ve baktisporin kullanımının klinik ve immünolojik gerekçesi // Yazar. olabilmek. dis. Ufa. - 1998. - 24 s.

136. Harwood K. Bacillus. Genetik ve biyoteknoloji. M., 1992. - S.52.

137. Kharchenko S.N., Reznik S.R., Litvin V.P. Yem küfüyle mücadele yöntemi // A.S. N 751382, SSCB, yayın. B.I., 1980, Sayı 28.

138. Khmel I.A., Chernin L.S., Levanova N.B. ve diğerleri Fitopatojenik mikroorganizmalara karşı bir ilaç elde etmek için Bacillus pumilus bakteri türü // Patentler 1817875 Rusya F01N 63/00, C12N 1/20. yayın. 05.20.95. - Boğa. N 14.

139. Chernyakova V.I., Bereza N.M., Selezneva S.I. Spesifik olmayan ülseratif kolitte ilaç biyosporinin bakteriyolojik ve immünolojik etkinliği // Mikrobiol.zh. 1993. - T. 55, N 3. - S. 63-67.

140. Chkhaidze I.G., V.G. Likhoded ve diğerleri Deneysel disbakteriyozda antikorların düzeltici etkisi // Journal. Mikrobiyol. 1998, sayı 4: 12-14.

141. Sharp R., Skaven M., Atkinson T. Bacillus: Genetik ve biyoteknoloji. -M. 1992. - 398 s.

142. Şeveva S.A. Probiyotikler, prebiyotikler ve probiyotik ürünler. Sorunun mevcut durumu // Beslenme sorunları. -1999. -T.68. -No.2. -S.32

143. Shenderov B. A. Tıbbi mikrobiyal ekoloji ve fonksiyonel beslenme - M., 1998, T. I, P. 287.

144. Shenderov B.A. Kolonizasyon direnci ve kemoterapötik ve antibakteriyel ilaçlar. // Antibiyotikler ve kolonizasyon direnci: Tüm Rusya Antibiyotik Araştırma Enstitüsü Bildirileri. M.-1990. - X1X'i sorun. -S.5-16.

145. Shenderov B.A., Manvelova M.A., Stepanchuk Yu.B., Skiba N.E. Probiyotikler ve fonksiyonel beslenme // Antibiyotikler ve kemoterapi. 1997. - T.42, N 7. - S.30-34.

146. Shenderov B.A. Tıbbi mikrobiyal ekoloji ve fonksiyonel beslenme.-M., 1998, T. II, S. 413

147. Yampolskaya T.A., Velikzhanina G.A., Zhdanova N.I. vb. L-fenilalanin üreten Bacillus subtilis bakteri suşu: A.s. N 1693056, C12R 13/22, yayın. 23.11.91. Boğa. N 43.

148. Adami A., Sandrucci A., Cavazzoni V. Doğumdan itibaren katkı maddesi olarak probiyotik Bacillus coagulans ile beslenen domuz yavruları: Zooteknik ve mikrobiyolojik yönler // Ann. mikrobiyol. Ed enzimol. 1997. - V.47, N 1. - S.139-149.

149. Azuma I., Sugimura C., Iton S. Bakteriyel glikolipidlerin adjuvan aktivitesi // Jap. J. Microbiol. 1977. - V.20, N 5. - S.465-468.

150. Benedettini J. ve diğerleri. Bacillus subtilis sporları ile immünomodülasyon // Boll. 1., Sierote Milan. 1983.-V. 62.,N6.-P. 509-516.

151. Berkel H., Hadlok R. Lecithinase-und Toxinbildung durch Stamme der Gat-tung Bacillus // Lebensmittelhygiene. 1976. - V. 27, N 2. - s. 63-65.

152. Bernheimer A., ​​​​Avigad L. Bacillus subtilis tarafından üretilen Sitolitik Ajanın Doğası ve Özellikleri // J. Gen. Microb. - 1970. V. 61, N 2. - S. 361-369.

153. Blaznic J, Kumel I.M., Salamum B. ve diğerleri. Sdravljenje kronikne granülomotozne bolezni ve asitofilnem mlecom // Zdrav.Vesth. 1976. N 45. - S. 77-79.

154. Boer A.S., Priest F., Diderichsen B. Bacillus licheniformis'in endüstriyel kullanımı üzerine: Bir inceleme // Başvuru. Mikrobiol ve Biyoteknoloji. 1994. - V.40, N 5. - S.595-598.

155. Buchell M.E., Smith J., Lynch H.C. Toplu ve döngüsel beslemeli toplu kültürde eritromisin üretiminin kontrolü için fizyolojik bir model // Mikrobiyoloji. -1997. V. 143, N 2. - S. 475-480.

156. Cipradi G. ve diğerleri. Gıda alerjisi için Bacillus subtilis ile yardımcı tedavinin etkileri // Kemioterapia. -1986. 5, N6. -S.408-410

157. Cromwick A.M., Birrer G.A., Gross R.A. Kontrollü parti fermentör kültürlerinde pH ve havalandırmanın bacillus licheniformis tarafından y-poli (glutamik asit) oluşumu üzerine etkileri // Biotechnol. ve Bioeng. 1996. - V. 50, N 2. - S. 222-227.

158. Danchin A., Glasser P., Kunst F. ve diğerleri. Bacillus subtilis devoile ses genleri // Biofutur. 1998. - N 174. - S. 14-17.

159.Devin K.M. Bacillus subtilis genom projesi: Amaçlar ve ilerleme // Trendler Biyoteknoloji. 1995. - V. 13, N 6. - S. 210-216.

160. Donovan W.P., Rupar M.J., Slanei A.C. Bacillus thuringiensis crytic, koleopteran böcekleri için toksik protein // Patent N 5378625 ABD A61K 31/00. Yayın 01/03/95.

161. Dubos R. Çamaşır ürünlerinde kullanılan enzimlerdeki toksik faktörler // Bilim. 1971. - N 3993. - S. 259-260.

162. Edlund C., Nord C.E. Kinolonların bağırsak ekolojisi üzerine etkisi. İlaçlar, 1998, 58(2): 65-70.

163. Flindt M. Proteolitik enzim içeren Bacillus subtilis türevlerinin solunmasına bağlı pulmoner hastalık // Lancet. - 1969. V. 1, N 7607. - P. 1177-1181.

164. Fox M. Prokaryotların filogenisi // Bilim. -1980. V. 209, N 4455. S. 457-463.

165. Fuller R.J Appl Bacteriol 1989; 66:5:365-378.

166. Gastro G.R., Ferrero M.A., Abate C.M. ve ark. Bacillus subtilis Mir-5 ile toplu ve sürekli kültürde alfa ve beta amilazların eşzamanlı üretimi // Biotechnol. Lett. 1992. - V. 14, N 1. - S. 49-54.

167. Glatz B.A., Spira W.M., Goepfert J.M. Tavşanlarda vasküler geçirgenliğin Bacillus cereus ve ilgili türlerin kültür filtratları ile değiştirilmesi // Infect ve Immunol. 1974. V. 10, N 2. - S. 299-303.

168. Guida V., Guida R. Importansia dos Bacillos esporulados aerobios em gastroenterologia e nutricao // Rev. Brezilya. med. 1978. - V. 35, N 12. - S. 702707.

169. Haenel H., Bending J. Sağlık ve hastalıkta bağırsak florası // Progr. Gıda ve Beslenme bilim.- 1975.-V. 21, N l.-P. 64.

170. Himanen J.-P., Pyhala L., Olander R.-M. ve ark. Bacillus subtilis'in lipo-teikoik asit ve peptidoglikan teikoik asidinin biyolojik aktiviteleri 168 // J. Gen. Mikrobiyol. - 1993.-V. 139,N 11.-P. 2659-2665.

171. Hirano Y., Matsudo M., Kameyama T. Bacillus subtilis 168'in aktinomisin D // J. Basic Microbiol varlığında erken çimlenmesi sırasında sentezlenen proteinlerin iki boyutlu poliakrilamid jel elektroforezi. 1991. - V. 31, N 6. - S. 429-436.

172. Humbert Florence Les probiotigues: un sujet d" factite // Bull. inf. Stat. exp. auicult. Ploufragan. 1988. - V. 28, No. 3. - S. 128-130.

173. Inouye S., Kondo S. Amicoumacin ve SF-2370, mikrobiyolojik kökenli farmakolojik olarak aktif ajanlar // Novel Mikrobiyal Prod. Med. ve Agr. Amsterdam. -1989.-P. 179-193.

174. Johnson S. E. Bacillus cereus'un öldürücü toksini 1. Toksin, hemolizin ve fosfolipazın ilişkileri ve doğası // J. Bacterid. 1967. V. 94, N 2. - S. 306316.

175. Kakinuma A., Hori M., Isono M. Sürfaktin içindeki yağ asidinin belirlenmesi ve sürfaktin toplam yapısının aydınlatılması // Agric. ve Biol. Kimya 1969. - V. 33. - S. 973-976.

176. Kaneko J., Matsushima H. ​​Bacillus subtilis 168 // J. Electron'un sporülasyon hücrelerinde kristal benzeri yapı. Microsc - 1973. V. 22, N 2. - S. 217-219.

177. Kaneko J., Matsushima H. ​​Sporlu Bacillus subtilis hücrelerinde kristalin kapanımlar // In: Spores YI. Seçme. Pap. 6. Uluslararası Spor Konf. Washington. - 1975. -P. 580-585.

178. Kitazawa H, Nomura M, Itoh T.J Dairy Sci 1991; 74:7:2082 2088.

179. Kubo Kazuhiro. Bacillus subtilis'in saf kültürü FERM BP-3418 // Pat. N 5364738. ABD. MKI A01N 25//00. - yayın. 11/15/94.

180. Kudrya V.A., Simonenko L.A. Bacillus subtilis'in kültür sıvısından alkalin serin proteinaz ve lektin izolasyonu // Appl. Mikrobiol ve Biyoteknoloji. -1994.-V. 41,N5.-P. 505-509.

181. Le H., Anagnostopoulos C. Doğal olarak oluşan plazmitlerin tespiti ve karakterizasyonu // Molec. Gen. Genet. 1977. - V. 157. - S. 167-174.

182. Legakis N.J., Papavassilion J. Bakteriyel fosfolipazların hızlı tespiti için ince tabaka kromatografik tekniği // J. Clin. Microbiol - 1975. V.2, N 5. - P. 373-376.

183. Leviveld H.L.M., Bachmayer H., Boon B. ve diğerleri. Güvenli biyoteknoloji. Bölüm 6. Biyoteknolojide kullanılan mikroorganizmaların insan sağlığı açısından güvenlik değerlendirmesi // Uyg. Mikrobiol ve Biyoteknoloji. 1995. V.43, N 3. - S.389-393.

184. Lin S.-C., Carswell K.S., Sharma M.M., Georgiou G. Bacillus licheniformis JF-2'nin lipopeptit biyosürfaktanının sürekli üretimi // Appl. Mikrobiol ve Biyoteknoloji. 1994. - V.41, N 3. - S.281-285.

185. Lovett P., Bramucci M. Basillerde plazmid DNA // In: Microbiology-Washington. 1976. - S.388-393.

186. Markham R., Wilkie B. Deterjanın, enzimlerle aerosol alerjik duyarlılığına etkisi. subtilis // Int. Arch. Alerji ve Uygulama. İmmünol. 1976.-V. 51, N 5. - S.529-543.

187. Maruta Kiyoshi Bacillus subtilis C-3102 ile sürekli besleme yoluyla bağırsak patojenlerinin dışlanması ve piliçlerde bağırsak mikroflorası üzerindeki etkisi // Anim. Bilim. ve Technol. 1996. - V. 67, N 3. - S. 273-280.

188. Moszer I., Glaser P., Danchin A. SubtiList: Bacillus subtilis genomu için ilişkisel bir veri tabanı // Mikrobiyoloji. 1995. - V. 141, N 2. - S. 261-268.

189. Murray P.R., Baron E.J., Pfaller M.A., Tenover F.C., Jolken R.H., Manual of Clinical Microbiology, 7. Baskı, Washington D.C., ASM Press, 1999

190. Nozari-Renard J. İndüksiyon d 5, OInterferon par Bacillus subtilis // Ann. Mikrobiyol. 1978. - V.129a. - N 4. - S. 525-542.

191. Oh M.K., Kim B.G., Park S.H. Bacillus subtilis'in kesikli ve sürekli fermantasyonu için spor mutantlarının önemi // Biotechnol. ve Bioeng. 1995.-V. 47, N 6. - S. 696-702.

192. Payne Jewel M. Bacillus thuringiensis Hist izolatları aktif ayanist nematodlardır / Patent N 5151363, C12 N 1/20, A 01 N 63/00, başvuru. 07/27/90, yayın. 09.29.92.

193. Pepys J., Hargreave F., Longbotton Y. Akciğerlerin Bacillus subtilis // Lancet enzimlerine alerjik reaksiyonları. 1969. - V.1, N 44 - 7607. - S.1181-1184.

194. Peterson W.L., Mackrowiak Ph.A., Barnett C.C. ve ark. İnsan mide bakterisidal bariyeri: Etki mekanizmaları, göreceli antibakteriyel aktivite ve diyet etkileri.//J. enfeksiyon Hastalıklar. -1989. -159 Sayı. 5. -s.978-985.

195. Prasad S.S.V., Shethna G.J. Bacillus thuringiensis'in proteinli kristalinin biyokimya biyolojik aktiviteleri // J. Sci. ve Ind. Res. 1976. - V. 35, N 10. - S. 626-632.

196. Rocchietta I. Bacillus subtilis'in hastalıkların tedavisinde kullanımı/Minerva Med. -1969. -60. N3/4. -P. 117-123.

197. Rosenthal G.J., Corsini E. // Yöntemler Immunotoksikol. 1995. V 1, S 327-343

198. Rychen G., Simoes Nunes C. Effets des flores lactigues des produits laitiers fermentes: Une temel bilim için l "etude des probiotiques microbiens dans l"espece porcine // Prod. animasyon. 1995. - V.8, N 2. - S.97-104.

199. Salminen Seppo Probiyotiklerin klinik yönleri //Ecol. sağlık ve Hastalık.-1999.- 11.-N4.-P. 251-252

200. Shore N., Greene R., Kezeni H. Bacillus subtilis'e maruz kalan işçilerde akciğer disfüzyonu // Environm. Res. 1971. - V.4, N 6. - S.512-519.

201. Slein M., Logan G., Fosfolipazlarınızın karakterizasyonu. cereus ve eritrositler, kemik ve böbrek hücreleri üzerindeki etkileri // J. Bacteriol. 1965. - V. 90, Nl.-P. 69-81.

202. Somerville H.J. Bacillus thuringiensis'in böcek öldürücü endotoksini // In: Sem. etüt teması Prod, natur. ve koruma. bitki. 1977. - S.253-268.

203. Spira W., Goepfert J. Bacillus cereus // Can tarafından üretilen bir enterotoksinin biyolojik özellikleri. J. Microbiol. 1975. - V. 21, N 8. - S. 1236-1246.

204. Stgard Henri Microbielle v kstfremmer til svin. Teori ve prasksis/ Veterinaertidsskr. 1989. - V. 72, N 15. - S. 855-864.

205. Su Li, Zhang Zhihong, Xiao Xianzhi, Wang Xiaomin Wuhan daxue xuebao. Ziran kexue yasağı // J. Wuhan Üniv. Doğa. Bilim. Ed. 1996. - V.42, N 4. - C.516518.

206. Sumi H. Natto'nun fizyolojik fonksiyonu // J. Brew. Sos. Japon. 1990. - V.85, N 8.-P. 518-524.

207. Tihole F. Fizioloski pomer backteriemije z geiunalo microflora // Zdravstv vestn 1982. - V. 51, N 1. P. 3-5.

208. Towalski Z., Rothman H. Enzim teknolojisi //in: Biyoteknolojik Mücadele. Cambridge Üniversitesi Yayınları. Cambridge, 1986 - S. 37 -76.

209. Tsuge Kenji, Ano Takashi, Shoda Makoto. Lipopeptitlerin sürfaktin ve plipastatin B1 ortak üreticisi olan Bacillus subtilis YB8'in karakterizasyonu //J. Gen. ve Appl. Mikrobiyol. 1995.- 41, N 6. S. 541-545.

210. Van der Waaij D. Sindirim sisteminin kolonizasyon direnci: mekanizma ve klinik sonuçlar.//Nahrung. -1987. -31 Sayı 5. -s.507-524.

211. Vollaard E.J., Clasener H.A.L., Janssen J.H.M. Escherichia coli'nin Antimikrobiyal Kemoterapinin mikrobiyal kolonizasyon direncine katkısı.//.!. -1990.- 26. -s.411-418