Kültürel yöntem - daha sonra saf bakteri kültürünün izolasyonu ve birikmesi. Bölgedeki belirli bakterileri tanımlayın ve dirençli olduklarından bakteri analizi belirli bir hassasiyet içerebilir. a\b'ye kadar temizle

Özellik: çok aşamalı. Eksi süre.

Muayene: kan, idrar, Beyin omurilik sıvısı, boğaz ve burundan gelen mukus, dışkı

İzole etmek için yoğun bir beslenme ortamı kullanılır Aşamalar: saf kültürün izolasyonu

Ön sınıflandırma yöntemleri:

1) bakteri kolonilerinin morfolojik analizi ve özel\diferansiyel ortamdaki özellikleri

2) mikroskop - Tankı boyadım

Bakterilerin nihai tanımlanması için: biyolojik aktivitenin incelenmesi (biyotipleme);

bakterilerin tespiti Cam vb. üzerinde Ag (serotip-e)-1) p-tion aglütinasyonu. enterobasiller için

2) agardaki immün farklılık (corynebacterium diphtheria)

Bakteriyofajlara karşı kesin hassasiyet (fagotipir)

İMMÜNOLOJİ

Lenfositlerin antijen tanıma reseptörleri.

Karşılaştırmalı özellikler BCR ve TCR

B hücresi reseptörü (BCR)			T hücresi reseptörü (TCR)
1. Yapı
Membran IgM (mIgM), daha az yaygın olarak, plazma zarına bağlanmak için ek bir hidrofobik alana sahip IgD monomeri (2 paratopun özgüllüğü, salgılanan antikorların özgüllüğü ile çakışır)	Heterodimer, 2 glikopeptit zincirinden oluşur - α Ve β (bir disülfit bağıyla bir arada tutulur). Her biri işlevsel olarak farklı 2 bölümden oluşur - değişken Ve devamlı Her iki zincirin değişken bölgeleri (domainleri) biçim TCR antijen bağlama merkezi (paratop CDR 1-3).α, β zincirlerinin sabit parçaları şunları sağlar: sabitleme Plazma zarındaki TCR ve kostimülatör moleküllerle temas
2. Antijenik sinyalin amplifikasyon mekanizması fonksiyonel olarak aşağıdakilere bağlıdır:
CD79a Ve CD79b		TCR zincirleri hücre zarında yalnızca CD3 ile kombinasyon halinde ifade edilir
Serbest antijenin veya MHC-protein kompleksinin tanınması ve bağlanmasından sonra bile lenfositleri aktive edecek yeterli sinyal yoktur. Ek moleküllerle etkileşim gereklidir. Sitoplazmik parçaları, aktivasyonu gen ekspresyonuna yol açan bir kademeyi tetikleyen hücre içi enzimlerle (tirozin kinazlar) ilişkilidir. Bu, saf hücrelerin çoğalmasını ve efektör ve hafıza hücrelerine farklılaşmasını sağlar.
Saf lenfositlerin reseptör kompleksi
BCR kompleksi= mIgM+CD79a+CD79b		TCR kompleksi= TCR+CD3+CD4/8
3. Salgı formunun varlığı
Evet (serbest immünoglobulin pentamer)		Hayır (hücre dışı olarak salgılanmaz)
4. Antijen tanıma mekanizması (ana özellik)!!!
Epitopu tanıyın direkt olarak "aracılar olmadan"		Mevcut epitoplar algılanmıyor Çift tanıma ilkesi Sadece bir molekülle kombinasyon halindeMHC kendi APC'sinin yüzeyinde HLA kısıtlı(aşağıya bakınız)
5. İmmünojenez sırasındaki değişim
1. Reseptör izotipinin değiştirilmesi IgG, IgA ve IgE salgılanan antikorların sınıfının değiştirilmesinin bir sonucu olarak (yani kısa bir IgM dalgalanmasından sonra IgG antikorları hakim olmaya başlar). Antijenle tekrarlanan temas üzerine, IgG antikorları en başından itibaren baskın hale gelir, çünkü hafıza hücrelerindeki reseptörler en başından itibaren esas olarak IgG molekülleri tarafından temsil edilir. 2. Afiniteyi Artırır		1. Değişiklik yok, stabil izotip 2. Afinite sabittir
6. Benzerlikler: Ag'ye duyarlılık için klonlanmıştır (antijenik epitopların tanınması) Her lenfositin reseptörleri vardır bir özgüllük(bir idiyotip, yani V alanları tarafından klonlanmış) yani Farklı antijenlere tepki veren lenfositlerde farklılık gösterir

2. İmmünolojide “klonlama” kavramı şu anlama gelir:

1. Her B/T lenfositinin tek bir antijene (epitop) yanıt verme yeteneği. 2. Her B/T lenfositinin çeşitli epitoplara yanıt verme yeteneği. 3. Antijen sunan hücrelerin HLA molekülleri tarafından antijenik peptitlerin seçici bağlanması. 4. Lenfositlerin antijen tanıma reseptörlerinin özgüllüğü (epitop tamamlayıcılığı).Şekil 5. T ve B lenfositlerinin CD fenotipinin klon özgüllüğü.

Lenfositlerin antijenleri tanıma ve onlarla reaksiyona girme yetenekleri heterojendir. Üstelik her lenfosit ve onun yavruları (klon), tek bir antijenle (daha doğrusu bir epitopla) etkileşime girecek şekilde yapılandırılmıştır. Başka bir deyişle, lenfositler antijenlere duyarlılık açısından klonlanır ve bu, bağışıklık tepkisinin seçiciliğini (antijen spesifikliğini) belirleyen şeydir. Klonlamanın moleküler temeli, antijenleri bağlayan reseptörlerin özellikleridir: her klonun reseptörleri benzersizdir ve yalnızca bir antijenle reaksiyona girer. Bu, klonların ve klona özgü reseptörlerin sayısının, çok sayıda potansiyel antijene karşılık gelecek şekilde çok fazla olması gerektiği anlamına gelir. Antijenle karşılaşmadan önce her klon, az sayıda olgun dinlenme hücresiyle temsil edilir ("naif" olarak adlandırılırlar). Antijen, tamamlayıcı reseptörlere bağlanarak lenfositin aktivasyonunu sağlar ve bir seçim faktörü (klon seçimi) görevi görür. Klonun sayısı artar (klon genişlemesi) ve onu oluşturan lenfositler, efektör hücrelere ve hafıza hücrelerine farklılaşır.

BAKTERİYOLOJİ

3. Hücre duvarının özellikleriyle ilişkili Mycobacterium tuberculosis belirtileri:

1. Asit direnci. 2. Yavaş üreme hızı. 3. Fagositlere karşı direnç. 4. Dış ortamda stabilite. 5. Antibiyotiklere karşı yüksek hassasiyet.

TÜBERKÜLOZ. cins Micobacterium Genel karakteristik - asit, alkol ve alkali direnci. aile Micobacteriaceae (saprofit) bölümü Firmicutes. Hareketsiz, aerobik gr+ çubuk şeklindeki bakteriler. Bazen miselyuma benzeyen yapılar oluştururlar, dolayısıyla adı da buradan gelir. Boyama için Ziehl-Neelsen yöntemi kullanılır. Hastalığa 3 tür mikobakteri neden olur: Mycobacterium tuberculosis - insan türü, Mycobacterium bovis - sığır türü, Mycobacterium africanum - ara tür. [Mikobakteriyel antroponozların etken maddeleri: M.leprae, m.tuberculosis. Mikobakteriyel zoonoz etkeni: M.bovis.] rezervuar hastadır, enfeksiyon yolu aerojeniktir. Hijyen seviyesinin düşük olması vb. nedeniyle hastalıkların görülme sıklığı artıyor. Koch'un asası ince, düz veya hafif kavislidir ve dallanmaya eğilimlidir. Ziehl-Neelsen yöntemi kullanılarak kırmızıya boyanırlar, aside dirençli granüller içerirler (Sitoplde çok tanecik vardır). Büyüme faktörlerine ihtiyaç vardır. Sıvı ortamda bir virülans faktörü olan kord faktörünü sentezler. Çok fazla nikotinik asit - niasin (niasin test yöntemi diferansiyel mikobakter) sentezler. Hücre duvarı lipitleri: mikolik asitler, kord faktörü, mikozitler, sülfatidler. Bu yüzden asitlere karşı dayanıklı, "zırhlı bir canavar". Fagositlere karşı direnç. dış ortamda stabildir. Antifagositik aktivitenin faktörleri: hücre duvarı lipitleri, sideroforlar.

Patogenez: alveollere penetrasyon; alveolar makrofajlarda üreme (fagozomal-lizozomal füzyonun kord faktörü inhibisyonu); spesifik olmayan bir preimmün granülomun oluşumu (enfekte olmuş hücrelerin çevresinde bir makrofaj şaftı oluşur); bakterinin bölgesel lenf düğümlerine nüfuz etmesi; T hücresi immünitesinin indüksiyonu; Makrofajların T'ye bağlı aktivasyonu (önce Thelp, enfekte makrofajların biyosidal aktivitesini arttırır, ardından Tkil enfekte makrofajları yok eder); Spesifik bir postimmün granülomun oluşumu. Sürecin tamamlanması fibroz, kalsifikasyon, gizli enfeksiyon oluşumu, eksojen yeniden enfeksiyona karşı bağışıklık formlarıdır. [Sürecin başlatılması intramakrofaj istilasıdır. Mekanizmalar: agresif olmayan fagositoz, fagoliz yoluyla oluşumun baskılanması, fagolizozomların biyotoksik faktörlerine karşı aktif direnç, makrofajlar ve T-lenfositler arasındaki fonksiyonel işbirliğinin baskılanması.] Birincil tüberküloz - ağırlıklı olarak çocukluk döneminde ortaya çıkar (+ alt ateş) - Birincil bağışıklık kompleksi - Gon'un odak noktası. Granülomda Pirogov-Lnghans hücreleri vardır, çevre boyunca lenfositler ve mononükleer hücreler vardır. Endojen enfeksiyonun (sekonder tüp) veya eksojen yeniden enfeksiyonun olası yeniden aktivasyonu nadirdir, tüberküloproteinlere karşı alerjinin arka planında gelişir.Bağışıklığı zayıf olan kişilerde yayılmış tüberküloz mümkündür. Tüberkülin, alerji teşhisinde kullanılan bir tüberküloprotein (protein türevleri) kompleksidir. [Freund adjuvanı kullanılır: peptidoglikan + hücre duvarı lipitleri]. Tüberküloproteinler immünolojik olarak bağımlı patojeniteye sahiptir, koruyucu bağışıklığın uygulanmasına katılır ve alerji tanısında kullanılır. Hücre duvarı lipitleri: antimakrofaj aktivitesi, adjuvan olarak T hücresi immünitesinin indüklenmesine katılır, bakterilerin kültürel ve renklendirici özelliklerini belirler. Ana işlev spesifik olmayan granülom bölgesindeki makrofajlar: hücresel bağışıklık reaksiyonlarının uyarılması. Postimmün granülom: tüberküloproteinlere karşı gecikmiş tipte aşırı duyarlılık reaksiyonunun arka planında ortaya çıkar, makrofajlar ve T efektörleri arasında fonksiyonel işbirliği için bir bölge, yıkıcı reaksiyonların temeli, sanogenezin (iyileşmenin) temeli, asemptomatik kalıcılıkla sona erer. patojen. Tüberkülozdaki yıkıcı süreçler belirlenir: Mycobacterium AG'nin immünolojik aracılı etkileri, makrofajların sitokine bağlı aktivasyonu, tüberküloproteinlere karşı alerji. Bağışıklık Tüberküloza karşı bağışıklık, steril olmayan enfeksiyöz, [vücuttaki mikobakterilerin L formlarının varlığı nedeniyle.] hücresel, antibakteriyel

Laboratuar teşhisi. Zorunlu muayene yöntemleri arasında bakteriyoskopik, bakteriyolojik inceleme, biyolojik test, tüberkülin teşhisi, vücudun tüberküline karşı artan duyarlılığının belirlenmesine dayalıdır (tüberküline uyarılabilir proteinlerin bir karışımı saflaştırılmıştır). Enfeksiyonu tespit etmek için daha sık ve alerjik reaksiyonlar Standart bir seyreltmede (14 yıla kadar) saflaştırılmış tüberkülin ile intradermal Mantoux testi yapılır. Florografi. Tedavisi antibiyotik tedavisidir, cerrah müdahale edecektir.

Çocuğun doğumundan sonraki 5. günde canlı koruyucu aşı BCG (BCG) intradermal olarak uygulanarak spesifik önleme gerçekleştirilir. Sonraki yeniden aşılamalar 7, 13 yılda gerçekleştirilir.

VIROLOJİ

4. Ortomiksovirüslerin hemaglutinin:

1. Virüsün hücreyle etkileşimini başlatır. 2. Sınırlı proteolizden sonra aktif hale gelir. 3. Birleşme faktörü. 4. Koruyucu antijen. 6. İnfluenza cinsinin tüm tiplerinde (türlerinde) mevcuttur.

Ortomiksovirüsler Ortomixoviridae familyasından Influenzavirus cinsi (mukus, müsine afinitesi olanlar). 3 tip vardır - A, B, C. "-" RNA (8 bölüm, A ve B için tek sarmallı, C için 7 bölüm). Bu tür bir bölümleme, iki virüsün etkileşime girdiğinde kolayca genetik bilgi alışverişinde bulunmasına olanak tanır ve böylece yüksek düzeyde katkıda bulunur. virüsün değişkenliği., spiral nükleokapsid (RNA, nükleoprotein (yapılar ve ag'nin rolünü ve türünü düzenleyen) ve proteinden oluşur), süperkapsid (= kompleks). RNA polimeraz kompleksinin proteinleri (enzimleri): protein PB1 (transkriptaz), protein PB2 (endonükleaz), protein PA (kopya). Daha sonra M-proteini (virüs parçacıklarının toplanmasına katılan, spesifik AG tipi) gelir, ardından hemaglutinin (H)'den oluşan glikoprotein sivri uçlarının bulunduğu bilipid tabakası (konakçı hücrenin zarından oluşur, eter hissinden oluşur) gelir. ) ve nörominidaz (N (tip C'de yoktur))

AG yapısı: dahili - NP, protein-M, RNA polimeraz kompleksinin proteinleri. Dış - N (çeşit 15, insanlar için: N1-3) ve N (9, insanlar için: N1, N2). Replikasyon h/w mRNA.

(transkriptaz, endonükleaz, replikaz). Çekirdekte yenileme ve sentez

hz H'nin endozom içine endositozu ile, burada asidik ortam konformasyonu değiştirir, peptitler (F-proteinleri) açığa çıkar ve viral ve fagolizozomal membranın füzyonuna neden olur => deprotenasyon

Sürüklenme, kayma. viremi. Remantadin.

Belirtileri: -RNA (=>transkript olmadan mRNA'nın işlevlerini yerine getiremez, parçalıdır), zarflı (iç olanlar M-proteini, nükleoprot, Ferm polimer kompleksini içerir), akut solunum yolu enfeksiyonlarının uyarılabilirliği, nükleokapsid sarmal sim. Türlere ayırın: (A, B, C) AG'ye özgü dahili proteinler (nükleoprotein). A, B, C şu açılardan farklılık gösterir: ekolojist, AG-izm ölçeği, virion çiftlikleri spektrumu, adım Epidemiyoloji (patojende lider tip A virüs, tip B orta seviyedir, tip C sporadik hastalıkların ve izole salgınların nedenidir) . Süper kapak proteinleri: N, H. H: virin hücrelerle etkileşimini başlatır (sialile edilmiş glikopeptitler ve glikolipitler için bir afiniteye sahip olduğundan, viryonlar plazma zarlarına bağlanır), proteoliz (önceki formdaki sentez) ile aktive edilir. yöntem reçete hücreleriyle reaksiyona girer, ancak obolo virionunun hücre zarları ile füzyonunu garanti etmez => sınırlı proteolize tabi tutulmalıdır, proteaz hemaglutu H1 ve H2'ye ayırır ve endozomların asidik ortamında ilave konformasyondan sonra, füzyonun H2 başlatılması), f -füzyon (nükleokapsidin sitoplazmaya salınma yöntemi: endozomların asidik ortamında, hemaglutun özel yapısına (füzyon bölgeleri) maruz kalan kedi, virüs ve hücre zarları tarafından heyecanlanır), koruyucu-AG (virüsü bloke edenler ve enfeksiyonu baskılar), tüm Grip türlerinde., Nöraminidaz: koruyucu AG, yayılma faktörü (bunlar, sialik asidin glikolipidlerden ve glikopeptitlerden (hemaglutinin reseptörlerini esasen etkisiz hale getirir) bölünmesiyle enfeksiyon bölgesini genişletir), epitop değişkendir. AG-kayması (bu bir kaymadır, beklenmedik, sıçramaya benzer bir kedi antijenin tamamen değişmesine yol açar) profil H,N ve yeni alt tipler ortaya çıktı): yalnızca A tipi, çevresel olarak belirleyici (virüslerin solunum yoluna bağlanması), genetik belirleyici (hücreleri aynı anda birkaç suşla enfekte ederken genlerin genetik olarak yeniden birleştirilmesine bağlı olarak), virion proteininin alt tiplerinin değişmesi, vn pandemik (H1N1 (bu İspanyol gribi) H3N2 (Hong Kong virüsü) Sürüklenme (ana suşun üstündeki antijenle ilgili antijen korunurken H, N-epitoplarının nokta mutasyonları yardımıyla yavaş kısmi yenilenme, suş özelliklerini belirler) alt tip içinde, epidemi açıklığının arttığı bir suşa neden olur) salgın Alınan aşının yapılması zor: AG- değişim, sürüklenme.

Sınav bileti 58.

GENEL MİKROBİYOLOJİ

Spesifik önleme kavramı bulaşıcı hastalıklar. Aşı önlemenin immünolojik temeli. E Jenner ve L. Pasteur'un çalışmaları. Aşı türleri (ölü, canlı, alt birim; mono ve ilişkili). Rekombinant aşıların üretim prensibi. Konjuge aşılar. Mukozal aşılar.

Bağışıklık pasif (1. doğal olarak edinilmiş - bir enfeksiyondan sonra ve 2. yapay olarak edinilmiş - bir aşıdan sonra) ve aktif (1. doğal olarak edinilmiş - anneden süt veya plasenta yoluyla elde edilmiş ve 2. yapay olarak edinilmiş - seroterapi) olabilir. Spesifik olmayan profesyonelin amacı kontaminasyonu önlemektir, spesifik olan ise spesifik patojenlere karşıdır. Aşılamanın özü, hızlı bir bağışıklık tepkisi sağlayacak olan hipertansiyon hafızasını oluşturmaktır. Aşı yalnızca koruyucu antijenlere (yani antijen üretimine neden olanlara) ihtiyaç duyar.

TARİHÇE: 1778'de Jenner, "inek çiçeği" aşısının çiçek hastalığına karşı koruduğunu kanıtladı. Saf deneylerin bir ürünüydü. Bu aşı biliminin doğum tarihidir. “Aşı” terimi Pasteur tarafından verilmiştir. 1881'de, baktaları elverişsiz koşullarda yetiştirerek bakterinin öldürücülüğünü "bilinçli olarak" zayıflattı. Tavuk kolera ve şarbona karşı ilk aşıları hazırladı. 885 yılında besh-va'ya karşı aşı yaptırdı (daha sonra bunun ölü bir aşı olduğu ortaya çıktı)

Aşı türleri:

1. CANLI - zayıflatılmış (zayıflamış) bakteri enjekte edilir. Osl-t fiziksel, kimyasal yöntemler. “+” - yüksek immünojenite ve etki süresi (zayıflamış bakteriler vücutta yayılabileceğinden, “-” devam edebildiğinden - artan reaktojenite, kararsızlık, ihmal edilebilir. Ancak öldürücü fenotipin tersine dönme olasılığı. Örnek: BCG

2. ÖLDÜRÜLMÜŞ sod-t bakteri, prost, mantar veya virionları etkisiz hale getirir. Dezavantajları ve avantajları canlı aşıların tersidir. Daha sık yapılması gerekiyor. Örnek: grip, tifo ateşi

3. ALT BİRİM – saflaştırılmış koruyucu antijenlerden oluşur. Reaktojenite minimum düzeydedir. O adjuvanların kullanımıyla güçlendirilmiş yüksek immünojenite

1) Konjuge - T'den bağımsız hipertansiyona karşı bağışıklık oluşturmak için kullanılır. T-bağımsız AG hafızadan ayrılmaz.

2) Toksoidler nötralize edilmiş bakteriyel toksinlerdir. Sorun, monotoksikasyonun nadir olmasından kaynaklanmaktadır. Ekzotoksinler formaldehit ile muamele edilir ve toksik özelliklerini kaybederler, ancak bağışıklıkları bozulmadan kalır. Bakteri taşınmasına karşı koruma sağlamazlar. Örnek: sütunlu toksoid

3) Rekombinant - bunlar, içine koruyucu antijenler için genlerin yerleştirildiği bakteriyel plazmidler temelinde yapılan rekombinant DNA molekülleridir. Bu tür DNA sentet antijenleri humoral ve hücresel immüniteyi indükler.

1) Çıplak kullanılan serbest plazmitler veya sanat taşıyıcıları üzerine emdirilenler. Onlar güvende. Örnek: hepatit B'ye karşı

2) Vektör - teslimat için zayıflatılmış bakteri kullanılır

4. MUCOSAAL - mukoza zarlarının solunum, bağırsak ve genital sistem enfeksiyonlarına karşı bağışıklanması için özel olarak yaratılmıştır. Pomiso d-ya yerinde genel imm-t'yi de etkiliyorlar. Bunlara yardımcı maddeler eşlik etmelidir. Ancak bunların uygulanması çok yavaş

Mikobakterilerin izolasyonu ve tanımlanması için patolojik materyalin incelenmesine yönelik bakteriyolojik yöntem 3 yöntemi içerir: bakteriyoskopik, kültürel ve biyolojik / R.V. Tkzova, 1983; I.I.Rumachik, 1987,1993; GİBİ. Donçenko, 1989; Yu.Ya. Kassica, 1990; A.Kh.Naimanov, 1993; L.P.Khodun, 1997/. Bakteriyolojik incelemenin süresi 3 ayı geçmemelidir.

Büyük organ ve dokularda makroskobik tüberküloz değişiklikleri göz önüne alındığında sığırlar Sığır tüberkülozunun etken maddesinden kaynaklandığı için, bu tür materyali bakteriyolojik olarak incelemenin bir anlamı yoktur. Bu tür materyalin araştırma için laboratuvara teslim edilmesi durumunda komisyon incelemesi yapılır ve bir rapor düzenlenir. Malzeme zararsız hale getirilir.

Materyalin bakteriyoskopik (mikroskobik) muayenesi, her organdan (veya tüberküloz açısından şüpheli değişiklik gösteren organ parçalarından) ve inceleme için teslim edilen lenf düğümünden 2 parmak izi smearının hazırlanması, havada kurutulması, bir alkol lambasının alevi üzerine sabitlenmesinden oluşur. Zil-Nielsen'e göre boyama ve lekeli yaymaların mikroskop altında her bir yaymada en az 50 görüş alanıyla görüntülenmesi. Bir mürekkepten malzemeden en az 20 parmak izi smear hazırlamak gerekir. Ek olarak, besin ortamına ekilen materyalin bir süspansiyonundan mikroskopi için smearlar da hazırlanır.

Yaymaların Ziehl-Neelsen boyaması mikobakterilerin tanımlanması için seçicidir: boyalı dokuların veya yabancı mikrofloranın mavi arka planında mikobakteriler kırmızı, pembe veya yakut kırmızısı çubuklar halinde görülebilir. Lekeleri binoküler mikroskop altında 1,5 (ek) x 7 (mercek) x 90 veya 100 (lens) büyütmede görüntülemek en iyisidir.

Bu yöntem bir sinyal yöntemi olarak kullanılır, çünkü yaymalarda mikobakterilerin varlığı veya yokluğu daha sonraki araştırmaların gidişatını kesinlikle etkilemez ve pozitif bir bakteriyoskopi sonucunun bile yasal bir önemi yoktur (kuşlar hariç). Malzemenin daha detaylı incelenmesi gerekiyor.

Kuş türlerinin mikobakteri kültürünün (papağanlardan - insan veya kuş türlerinden) test materyalinden izole edilmesi ve elde edilmesi durumunda kuşlarda tüberkülozun laboratuvar tanısının konulduğu kabul edilir. olumlu sonuç biyoanalizlerin yanı sıra mikroskobik inceleme sırasında patolojik materyalden alınan smearlarda mikobakteriler tespit edildiğinde (kılavuzun 7.3.2 maddesi).

Ayrıca parmak izi yaymalarının hazırlanmasının, düzeltilmesinin ve görüntülenmesinin çok zaman aldığına ve ekilmiş bir malzeme süspansiyonundan kaynaklanan lekelerde bile içlerinde mikobakterilerin tespit edilmesinin çok nadir olduğuna dikkat etmek gerekir. Bu nedenle, kesim sırasında hiçbir değişiklik olmayan hayvanlardan alınan materyali incelerken çalışma süresinden ve paradan tasarruf etmek için, kendimizi yalnızca besin ortamına ekilen materyalin bir süspansiyonundan smear hazırlamak ve incelemekle sınırlamamız tavsiye edilir. Bu durum tüberküloz tanısında herhangi bir zarara yol açmayacak çünkü materyalin incelenmesi daha da devam ediyor.

Geleneksel ışık mikroskobuna ek olarak floresans mikroskobu da kullanılabilir. Smear'lar benzer şekilde hazırlanır, sabitlenir ve bir florokrom karışımı ile boyanır. Lekeli lekeler floresan mikroskop altında incelenir. Yöntem daha duyarlıdır ancak daha az spesifiktir ve bu nedenle özellikle pratik laboratuvarlarda daha az kabul edilebilirdir.

Mikobakterilerin besin ortamındaki kültürel izolasyonu, kültürdeki önemli bağlantılardan biridir. laboratuvar teşhisi tüberküloz açık modern sahne. Bununla birlikte, materyalin ekildiği besin ortamı (talimatlara uygun olarak 5-10 test tüpü için), ekim sırasında kısırlığın ihlali nedeniyle kural olarak ilk 2-3 haftada kısmi veya tam çimlenmeye sahiptir. malzeme. Mahsuller, atipik mikobakterilerin ilk büyümesinin en muhtemel olduğu zamanda atılır (daha sonra büyüme gösteren tüberküloz patojeninin ilk büyümesinden bahsetmeye bile gerek yok). Bu gibi durumlarda mikobakterilerin besin ortamlarında izole edilmesine yönelik kültürel yöntem mekanik olarak ortadan kaldırılır. Malzemenin bakteriyolojik incelemesi sırasında olumsuz sonuç alınmasının ana nedenlerinden biri de budur. Sonuç olarak, materyalin aşılanmasının ardından besin ortamında mikobakteriyel kolonilerin üremediği ve laboratuvar hayvanlarının 3 ay boyunca canlı kaldığı göz önüne alındığında, laboratuvarlardan gelen standart yanıt şu şekildedir: "Tüberküloza neden olan ajan izole edilmemiştir" veya " Materyalin tüberküloz açısından incelenmesi negatif çıktı.” Çalışmaların sonuçlarına göre, sığırların tüberküline reaksiyonunun nedeni belirlenememiştir ve bu, büyük ekonomik zarara neden olan sığır tüberkülozu olmayan çiftliklerde tüberküline reaksiyon gösteren önemli sayıda hayvanın daha fazla mantıksız katledilmesine yol açmaktadır. sürünün cirosunu ve üremesini bozar.

Yukarıdakiler göz önüne alındığında, bölgesel veteriner laboratuvarlarında tüberkülozun bakteriyolojik teşhisinde en zayıf halka olarak mikobakterilerin besin ortamlarındaki materyalden izole edilmesine yönelik kültürel yönteme öncelikli dikkat gösterilmesi gerekmektedir.

Mikobakterileri izole etmeye yönelik kültürel yöntemin olumlu sonuçları temel olarak iki duruma bağlıdır: mikobakterilerin materyalden ekilmesinin güvenilirliğinin arttırılması ve bir kutuda çalışırken sterilite koşullarının korunması.

Araştırma için alınan materyalden mikobakterilerin aşılanmasının güvenilirliğinin arttırılması, öncelikle kalite seçimine, ekim öncesi işleme ve aşılamanın yapıldığı besiyerinin test tüpü sayısının arttırılmasına bağlıdır.

Besin ortamlarına materyal ekerken uyulması mikobakteriyel kolonilerin büyümesini garanti eden temel koşullar:

a) kesim sırasında hiçbir değişiklik göstermeyen öldürülmüş hayvanlardan bakteriyolojik araştırma için materyali her karkastan ayrı olarak seçin ve her numuneyi (her hayvandan materyal) aşağıdaki şemaya göre besiyerinin 10-20 test tüpüne aşılayın:

Başın lenf düğümleri (submandibular, retrofaringeal);

Bronşiyal ve mediastinal lenf düğümleri;

Mezenterik (mezenterik) lenf düğümleri;

Diğer lenf düğümleri (şüpheli alanlar varsa);

Organlar (gerekirse).

Sonuç, bir hayvandan alınan materyalin 30-50 tüp besiyerine aşılanmasıdır. Bu, mikobakterilerin ekim güvenilirliğinde 3-5 kat artış sağlar, çünkü numune ayırma olmadan (talimatlara göre), malzemenin bir çiftliğin iki başından yalnızca 5-10 tüp besiyerine tohumlanması tavsiye edilir.

b) Doğrudan materyalin bakteriyolojik ekimi sırasında, lenf nodu veya organın morfolojik yapısı bozulan parçalar (hiperplazi, sıkışma, noktasal ve çizgili kanamalar vb.) kesilir. Üstelik değiştirilen tüm alanların kesilmesi gerekiyor. Bir harçta hacim olarak çok fazla malzeme varsa ikiye bölünebilir.

c) Malzemenin işlenme ve ekim şeklini ihlal etmeden, iş için benimsenen metodolojiyi kesinlikle takip edin.

d) Malzemeyi homojenleştirirken, özellikle Lenf düğümleri, steril kum veya ince kırılmış steril cam kullanmalısınız. Mikobakterilerin test materyalinden daha iyi ekstraksiyonu için materyali mümkün olduğu kadar (krem kıvamına gelinceye kadar) öğütün

e) Bir havan içindeki homojenleştirilmiş malzemeye, malzeme süspansiyonunun besin ortamına ekilmesi ve biyoanaliz için gerekli miktarda (bir test tüpünde ortalama 0,5 cm3'e kadar ve bir ginenin deri altı enfeksiyonu için 1-2 cm3'e kadar) salin solüsyonu ekleyin. domuz). Bu miktardaki tuzlu su çözeltisi önceden hesaplanabilir.

f) Malzemenin mahsulünü 3, 5, 7, 10, 15 gün sonra ve ardından haftada bir kez görüntüleyin.

g) Besiyerinde büyüyen herhangi bir mikroorganizma kolonisi (tipik veya atipik, pigmentli veya pigmentsiz, sümüksü veya kuru vb.), seçici Ziehl-Neelsen boyaması kullanılarak mikroskopiden geçirilmelidir.

Malzemenin yabancı mikroflora ile kirlenmesini önlemek için kullanılan asitten (veya alkaliden) yıkanma derecesine dikkat edilmelidir. Ekilen materyalin süspansiyonunda her zaman bir miktar asit bulunacaktır, ancak bu minimum düzeyde olmalıdır. Bunun bir göstergesi, malzemenin ekiminden sonraki 2-4. Günde ortamın orijinal rengine dönmesidir. Ortamın rengi eski haline getirilmezse, bu durum asit kalıntısının arttığını gösterir. Ortamın rengi değişen yoğunlukta mavimsi bir renk tonu alır. Bu durumda (varsayılan) mikobakterilerin büyümesi yavaşlar veya hiç var olmaz, özellikle de yetiştirme rejimini daha fazla talep ettiğinden tüberküloza neden olan ajan. Kalan asit miktarı mikobakteriler üzerinde bir dereceye kadar bakteriyostatik olarak etki eder.

Malzemeyi aşıladıktan sonra tüpleri kapatmak için, pamuklu ve pamuklu gazlı bez tıkaçlarını kullanabilirsiniz, ardından bunları parafin, kauçuksuz ve kesik eğik oluklu kauçuk, mantar ve metal tıpalar (kapak) ile doldurabilirsiniz.

İzole edilmiş bir mikobakteri kültürünün tür kimliğini belirlerken birçok (yaklaşık 300) farklı test bilinmektedir: kültürel-morfolojik, biyolojik, biyokimyasal, serolojik, belirleme İlaç direnci vesaire. Ancak veterinerlik uygulamalarında bunların minimum bir kısmı kullanılmaktadır (kılavuza bakınız). Laboratuvarlar için, aşağıdaki türlerdeki mikobakterilerin izole kültürünü belirlemek yeterlidir: bir biyoanaliz ile belirlenen sığır, insan ve kuş ve Runyon'a (1959) göre gruplara ayrılan atipik mikobakteriler: I - fotokromojenik (oluşturucu) ışığın etkisi altında pigment), II - skotokromojenik (ışığa maruz kalmadan bağımsız olarak pigment oluşturan - hem karanlıkta hem de ışıkta), III - kromojenik olmayan (pigment oluşturmayan) veya ayrıca pigmentsiz olarak da adlandırılır (nedensel) kuş tüberkülozu etkeni de buraya dahil edilmiştir), IV - hızlı büyüyen mikobakteriler ve aside dirençli saprofitler.

Bu amaçla, izole edilmiş bir kültürün özelliklerini kısaltılmış bir şemaya göre incelemek oldukça etkili ve ekonomik olarak haklıdır; burada asıl dikkat kolonilerin birincil büyümesinin ortaya çıkış zamanlamasına, pigment oluşumuna, kültürel-morfolojik ve Ziehl-Neelsen'e göre boyandığında renk özellikleri. Bir birincil veya hatta alt kültürde kordon oluşumuna yönelik test, bir biyoanalizin sonuçlarıyla birlikte özellikle önemlidir. Yetiştirilen kolonilerden smear hazırlamak için, bunların aynı anda hem kolonilerden hem de süspansiyon ve yoğuşma kalıntılarından yapılması tavsiye edilir; Test tüpünün altındaki sıvı kısımdan.

Buna ek olarak, laboratuvar personeli yalnızca tüberküline reaksiyon gösteren hayvanların kontrollü kesimini gerçekleştirmek ve araştırma için materyal örnekleri almakla kalmayıp, aynı zamanda hayvanlar canlıyken bakteriyolojik araştırma için seçim yapma (bronşiyal veya nazal mukus, süt, dışkı, idrar, eksüda, kan vb.) ve ayrıca mikobakterilerin izolasyonu için yem, su ve çevresel nesne örneklerini kullanır ve böylece çiftlik hayvanlarının tüberküline reaksiyonunun nedenini dolaylı olarak kanıtlar. Çevresel nesnelerden ek materyal ve numuneler aşılarken, mikobakterileri konsantre etmek için iyi bilinen yöntemler kullanılır: sedimantasyon, flotasyon, flotasyon-sedimantasyon ve diğerleri.

Biyoanaliz kullanılarak mikobakterilerin ayırt edilmesine yönelik kısaltılmış şema

Bazı laboratuvar araştırma yöntemleri nozolojik formlaröncü ve bir dizi klinik durumda yalnızca tanıda değil, aynı zamanda hastalığın nihai sonucunun belirlenmesinde de belirleyici bir rol oynar. Teşhisin rolü, erken, doğru, kapsamlı ve en spesifik teşhisin, çoğu durumda öngörmeyi mümkün kılan akılcı ve etkili tedavinin temelini oluşturmasıdır. olası seçenekler Hastalığın ileri seyri ve sonuçları, zamanında ve hedefe yönelik anti-salgın ve önleyici tedbirlerin uygulanmasında başlangıç ​​noktası görevi görür.
Bulaşıcı hastalıkların teşhisi neredeyse her zaman karmaşık laboratuvar yöntemlerinin kullanılmasını içerir.

Modern koşullarda bulaşıcı hastalıkların tanısı, son on yılda oluşan tüm geleneksel özelliklerini korumaktadır. Aynı zamanda, hastalıkları tanımak için halihazırda bulunan teknik ve yöntemlerin sürekli iyileştirilmesi ve ekspres olanlar da dahil olmak üzere yeni, daha etkili olanların araştırılması ile karakterize edilir.
Bakteriyel enfeksiyonların mikrobiyolojik tanısı için aşağıdaki yöntemler ayırt edilir: bakteriyoskopik (mikroskobik), bakteriyolojik (kültürel), biyolojik (deneysel), immünolojik (serolojik), alerjik.
Ana yöntem bakteriyolojik incelemedir. Test materyalinin besin ortamına aşılanmasını, patojenin saf kültürünün izole edilmesini ve tanımlanmasını içerir. Patojenin türü bir dizi özelliğe göre belirlenir: morfoloji, renklendirici özellikler (çeşitli boyalarla boyanabilme yeteneği), kültürel özellikler (yapay besin ortamlarında büyüme modeli), biyokimyasal özellikler (karbonhidratların ve proteinlerin fermantasyonu). İzole edilen kültürün belirli bir mikroorganizma tipine nihai aitliği, çeşitli immünolojik reaksiyonlar (aglütinasyon, çökeltme, nötrleştirme vb.) kullanılarak antijenik yapının incelenmesinden sonra belirlenir. Genel olarak bakteriyolojik araştırma yöntemi, 18-24 saatten birkaç güne kadar süren çok aşamalı bir bakteriyolojik çalışmadır.

Bakteriyolojik yöntemin birçok avantajı vardır. Bunlardan ilki, incelenen biyolojik materyalin mikroflorasının niteliksel bileşimini onun yardımıyla incelemektir. Teşhis koymak için, incelenen maddenin 1 gramındaki ve 1 ml sıvıdaki mikroorganizmaların sayısı, yani kolin oluşturan birimler (CFU/g veya CFU/ml) cinsinden ölçülen toplam mikrobiyal sayı önemlidir. Bunu yapmak için, belirli bir miktarda test materyali katı besin ortamına aşılanır; bir termostatta inkübasyondan sonra, büyüyen kolonilerin sayısı sayılır (bir koloni, bir tür mikroorganizmanın temsilcilerinin görünür izole edilmiş bir kümesidir; koloni oluşturan birim katı bir besin ortamında çoğalır).
Mikrobiyolojinin elde ettiği en etkileyici sonuçlar arasında antibiyotiklerin yaratılması ve uygulanması yer alıyor. İlaca dirençli bakteri formlarının yaygın dağılımı nedeniyle, rasyonel kemoterapiyi reçete etmek için, antibiyogramın (patojenin izole edilmiş saf kültürünün antibakteriyel ilaçlara duyarlılığı) belirlenmesi gerekir. Bir antibiyogram için kağıt disk yöntemi veya seri seyreltme yöntemi kullanılır.
Kağıt disk yöntemi, antibiyotiklerle emprenye edilmiş disklerin etrafındaki bakteri üremesinin baskılandığı bir bölgenin belirlenmesine dayanmaktadır. Seri seyreltme yöntemi kullanıldığında, antibiyotik test tüplerinde sıvı besin ortamıyla seyreltilir, ardından test tüplerine aynı sayıda bakteri aşılanır. Bakteri üremesinin yokluğuna veya varlığına bağlı olarak sonuçlar kaydedilir. Seri seyreltme yöntemini kullanarak, ilacın terapötik dozunu hesaplamaya yarayan antibiyotiğin minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) belirlenir.

Bakteriyolojik yöntem, izole edilmiş kültürlerin antibiyotik direncinin mekanizmalarının (metisilin direnci, b-laktamaz üretimi) incelenmesine olanak sağlar. Ayrıca lezyondaki antibiyotik konsantrasyonunu da tahmin edebilirsiniz. bulaşıcı süreç Tedavi dinamiklerinde antibiyotik duyarlılığındaki değişiklikler.
Bir klinisyenin antimikrobiyal tedavinin ne kadar etkili olduğunu bilmesi önemlidir, bu nedenle hastalık ve tedavi sırasında niteliksel ve niceliksel bileşimdeki değişikliklerin dinamiklerini değerlendirmek mümkündür. Bakteriyolojik tanı yöntemini kullanarak bulaşıcı sürecin sonucunu - iyileşme, taşıma, kroniklik - belirlemek mümkündür.
Bulaşıcı hastalıkların ana etken maddeleri şu anda fırsatçı mikroorganizmalardır ve bunların hastalığın oluşumundaki rolünün kanıtlanması zordur. Bu nedenle izole edilmiş fırsatçı mikrofloranın patojenitesini değerlendirmek önemlidir.
İnsan vücudunda sözde temsilcileri yaşıyor normal mikroflora niteliksel ve niceliksel bileşimindeki değişiklikler, disbiyotik bozuklukların gelişiminde rol oynayabilir. Bu nedenle, insan vücudunun mikroflorasını - normal olarak ve disbiyozda, öbiyotik tedavisi sırasında mikrobiyal ilişkilerde - incelemek mümkündür.
Herhangi tıbbi kurumlar nozokomiyal enfeksiyonlara yakalanma riski altındadır. Teşhis etmek, patojeni tanımlamak, enfeksiyonun kaynağını belirlemek, suşların kimliğini kanıtlamak bakteriyoloji laboratuvarının çalışmalarının ayrılmaz bir parçasıdır (3).
Mikrobiyolojinin mevcut gelişim aşaması, oluşum mekanizmalarının incelenmesinde yapılan yeni keşiflerle karakterize edilir. patolojik durumlar. Bunlardan başlıcaları, toplu olarak biyofilm adı verilen çeşitli toplulukların bir parçası olarak insan vücudunda bakterilerin varlığının ortaya konulması ve mikropların insan vücudu üzerindeki dolaylı etkisinin belirlenmesidir. Biyofilmlerdeki bakterilerin özellikleri izole edilmiş hücrelerinkinden farklıdır ve bu durum mikrop ile bakteri arasındaki etkileşimi tüm yönleriyle etkiler. çevre bağışıklık savunma faktörleri ve antimikrobiyalleri içerir (4,5).
Biyofilm, iyi organize edilmiş, etkileşim halindeki mikroorganizmalardan oluşan bir topluluktur (Quorum sensing). Doğal ekosistemlerdeki bakterilerin %99'u, enfeksiyon hastalıklarındaki bakterilerin ise %80'i biyofilm halinde bulunur.

Biyofilm hücreleri, organik ve inorganik substratları bağlar, bakterilerin epitelyuma ve herhangi bir yüzeye (canlı ve cansız kökenli) yapışmasını arttırır, etkinliğini azaltır. antibakteriyel tedavi bakterilerin değişen dış ortamda hayatta kalmasına yardımcı olur. Biyofilmdeki mikroorganizmalar hem antibakteriyel ilaçların etkisine hem de insan vücudunun spesifik olmayan anti-enfektif savunma faktörlerine karşı daha dirençlidir.
Biyofilmlerdeki antibiyotiklere karşı bakteri direncini arttırma mekanizmaları, antibiyotiklerin sınırlı nüfuz etmesi, bakteriyel bölünme oranında bir azalma, bunun sonucunda antibiyotiklerin etkisi için daha az hedef bulunması ve bakterilerde genetik değişiklikler ile ilişkilidir. biyofilmde kalıcıdır.
Bakteriyolojik yöntemi kullanarak mikroplardan korunma mekanizmalarını incelemek mümkündür. bağışıklık sistemi organizma, makroorganizmadaki hayatta kalma stratejisi - kalıcılık. Mikropların insan bağışıklık sistemine karşı savunma mekanizmaları vardır - antilizozim, antitamamlayıcı, antilaktoferrin aktivitesi.
Bu nedenle, şu anda bakteriyolojik teşhis yöntemi, patojenik bakterilerin yaşam aktivitesinin, gelişim mekanizmalarının, hayatta kalmalarının ve baskılanmalarının birçok yönünü incelemeyi mümkün kılmaktadır.

Edebiyat

1. Tets V.V. Mikroorganizmalar ve antibiyotikler. Deri, yumuşak doku, kemik ve eklem enfeksiyonları. - SPb.: KLE T, 2006. - 128 s.
2. Anti-enfektif kemoterapiye yönelik pratik kılavuz / Ed. L. S. Strachunsky, Yu.B. Belousov, S.N. Kozlov. Smolensk: MAKMAKH, 2007. - 464 s.
3. Rudnov V.A.Modern klinik önemi Yoğun bakım hastalarında Pseudomonas aeruginosa enfeksiyonu ve tedavi olasılığı Enfeksiyon ve antimikrobiyal tedavi 2002. - T. 4, No. 3
4. Sidorenko S.V. Bakteriyel biyofilmlerin insan patolojisindeki rolü // Cerrahide enfeksiyonlar. 2004. - T.2, No.3. - S.16-20.
5. Anwar H., Strap J.L., Costerton J.W. Staphylococcus aureus'un biyofilm hücrelerinin tobramisin ve sefaleksin ile yok edilmesi. //Olabilmek. J. Microbiol. 1992. - V. 38. - S. 618-625.

Bakteriyoskopik yöntemin özü: incelenen malzemedeki mikropların tespiti; Morfolojik ve tentürel özelliklerinin incelenmesi, görüş alanındaki bakteriyolojik bir yaymadaki konumlarının doğası.

Yürütme tekniği. Hastadan alınan materyal görsel olarak incelenir ve hastalığa neden olan ajanın (mukus topakları, cerahatli tıkaçlar) büyük olasılıkla tespit edilebileceği bir kısım seçilir. Bir cam slayta uygulanır (bazen malzeme fizyolojik bir çözelti içinde önceden emülsifiye edilir, daha az sıklıkla santrifüje tabi tutulur). Damla camın üzerine dağıtılır, kurutulur ve sabitlenir. Bundan sonra smear boyanır ve preparat mikroskop altında incelenir. Smear genellikle Gram boyalıdır. Bazen en nazik olanı olarak aşağıdakilerden biri kullanılır basit yöntemler boyama, daha sonra ilaç bir boya ile boyanır (örneğin, meningokok enfeksiyonu, kolera teşhisinde).

Gerekirse, kapsüler mikroorganizmaları tespit etmek için Burri-Gins yöntemi veya aside dirençli bakterilerin varlığını tespit etmek için Ziehl-Neelsen yöntemi gibi özel karmaşık boyama yöntemleri kullanılır. Bazı durumlarda (özellikle mikroorganizmaların motor aktivitesini incelerken) "asılı damla" ve "ezilmiş damla" preparatları hazırlanır ve boyanmamış bakteriler mikroskobik olarak incelenir.

Bakteriyoskopik yöntemin avantajları: uygulama kolaylığı, hızlı sonuç alma yeteneği, teknik ve ekonomik erişilebilirlik.

Yöntemin dezavantajları: Mikroorganizmaların türünü belirlemek için, ilgili türlerin temsilcilerinde aynı olduklarından, morfolojik özelliklerini belirlemek genellikle yetersizdir. Ayrıca karakteristik bir morfolojiye sahip bakteriler, özellikle antibiyotiklerin etkisi altında sıklıkla değişikliklere uğrar ve tanınmaz hale gelir; Son olarak, test materyalindeki patojenlerin konsantrasyonu son derece düşük olabilir ve bu durumda tespit edilmeleri zor olabilir.

Yukarıdakiler dikkate alındığında bakteriyoskopik yöntem, hastalığın etiyolojisini belirlemenin tek ve kesin yolu olarak nadiren kullanılır. Daha sıklıkla gösterge niteliğinde, ön amaçlı olarak kullanılır ve bazı bulaşıcı hastalıkların teşhisinde hiç sağlanmaz.

Göstergelik ve öncelik nasıl anlaşılır? Bu bir klinisyen ve bakteriyolog için geçerlidir. Bir ön cevap (olumlu veya olumsuz) alan klinisyen, bakteriyolojik teşhis yönteminin nihai sonucu elde edilene kadar, daha fazla veya daha az ölçüde, daha sonraki araştırmalarında aldığı bilgileri kullanır. Şüpheli patojen, kullanılan malzemedeki konsantrasyonu ve eşlik eden mikrofloranın varlığı hakkında gösterge niteliğinde bilgi alan bakteriyolog, malzemenin işlenmesi ve saf bir patojen kültürünün izole edilmesi için yöntemleri belirler ve sonraki ekim için besin ortamını seçer.

Bakteriyolojik yöntem

Yöntemin özü, saf bir mikrop - patojen kültürünün patolojik materyalden izole edilmesi, patojenin daha sonra tanımlanması amacıyla morfolojik, renklendirici, kültürel, biyokimyasal, serolojik özelliklerinin ayrıntılı bir çalışmasıdır. Bakteriyolojik araştırma yöntemini uygularken 4 aşama vardır.

A. Bakteriyoskopik inceleme sırasında elde edilen veriler dikkate alınarak, şüpheli mikrobiyal patojenlerin bir kültürünün büyümesinin elde edilmesinin büyük olasılıkla mümkün olduğu en etkili besin ortamının seçimi gerçekleştirilir.

B. İncelenen materyal bir dizi besin ortamına aşılanmıştır: sıvı ve katı, evrensel, seçmeli-seçici, ayırıcı teşhis. Bu durumda, katı besin ortamına sahip Petri kaplarına aşılama, birbirlerinden izole edilmiş mikrobiyal kolonilerin büyümesini elde etme olasılığını sağlamak için bakteriyolojik bir döngü kullanılarak gerçekleştirilir (ayrıca Drigalsky yöntemini veya mikrobiyal izolasyonun başka bir yöntemini de kullanabilirsiniz). kültürler).

A. Besin ortamlarında yetişen mikroorganizmaların kültürel özellikleri incelenir; Şüpheli koloniler seçilir. Şüpheli kolonilerin seçiminin işin en önemli ve zor aşaması olduğunu vurgulamak gerekir. Öncelikle tanımlamaya dayanmaktadır. karakteristik özellikler mikrobiyal koloniler, ancak çoğu zaman bu, bireysel türlerin mikrobiyal kolonilerinin ayırt edilmesine izin vermez ve şüpheli kolonilerden alınan smearlardaki mikropların morfolojisini, ayırıcı tanı ortamlarındaki mikroorganizmaların büyüme özelliklerini vb. incelemek gerekir. Saf bakteri kültürlerinin izolasyonu ve çalışmaları, sıvı birikim ortamına ön aşılama ile gerçekleştirilebilir, ancak bu, ek araştırma süresi gerektirir.

B. Şüpheli kolonilerden bakteriyolojik smear hazırlanır, Gram ile boyanır ve mikroskoplanır (1. aşamada mikroskobik inceleme sırasında incelenenlerle mikroorganizmaların kimliği belirlenir). B. Şüpheli koloninin geri kalan kısmından kültür, eğimli et ekstraktı agarına yeniden ekilir (izole edilmiş mikroorganizmaların iyi bir şekilde büyümesinin beklendiği diğer besin ortamlarını da kullanabilirsiniz). Amaç, hastalığın etkeni olduğu iddia edilen mikroptan saf bir kültür elde etmektir, çünkü çalışmanın bir sonraki aşaması çok fazla mikrobiyal kütle gerektirecek.

Şüphelenilen patojenin sakkarolitik özellikleri incelenir (aşılama alacalı ortamlar, Olkenitsky, Ressel, vb. Üzerinde gerçekleştirilir), proteolitik aktivite (jelatin üzerine aşılama, Tukaev'e göre süt, büyüme sırasında indol ve hidrojen sülfit oluşumunun belirlenmesi) et-pepton suyu). İzole edilmiş kültürlerin antibiyotiklere duyarlılığı araştırılır (genellikle standart kağıt disk yöntemi kullanılarak, daha az sıklıkla seri seyreltme yöntemi kullanılarak). Serotipleme, grup ve standart teşhis serumları ile bir cam aglütinasyon reaksiyonunda gerçekleştirilir; standart tanısal bakteriyofajlarla faj tiplemesi. Tanımlama için bazı durumlarda bakterilerdeki patojenite faktörleri incelenir.

Yapılan araştırmanın sonuçları kayıt altına alınır. Mikroorganizmalarda tanımlanan özelliklerin (morfolojik, tentürel, kültürel, biyokimyasal, serolojik vb.) karşılaştırılmasına dayanarak mikroplar tanımlanır. Patojenin türünü (bazen serotipi, biyovarı, fagotipi) ve antibiyotiklere duyarlılığını gösteren bakteriyolojik bir çalışmanın sonuçlarıyla nihai bir yanıt verilir.

Çoğu zaman, güvenilir sonuçlar elde etmek için, bir cevabın verilmesinden önce biyolojik, alerjik veya diğer araştırma yöntemleri kullanılır.

Bakteriyolojik teşhis yönteminin avantajları: araştırma sonuçlarının yüksek güvenilirliği; izole edilmiş patojenlerin antibiyotiklere duyarlılığı hakkında ek veri elde etme olasılığı; epidemiyolojik araştırmaların yapılması olasılığı.

Yöntemin dezavantajları Bu, çalışmanın süresini (en az 4-5 gün) ve patojenlerin (örneğin, riketsiya, klamidya) yapay besin ortamlarında çoğalmadığı durumlarda kullanımının imkansızlığını içerir.

Biyolojik yöntem

Bazı durumlarda, bulaşıcı hastalıkların teşhisini optimize etmek için laboratuvar hayvanlarının enfekte edilmesini içeren biyolojik bir yöntem (biyoanaliz) kullanılır. Bu durumda araştırmacının çeşitli hedefleri olabilir:

Hastalığın klinik ve patolojik tablosunun çoğaltılması (örneğin, tetanoz, leptospiroz tanısı konurken);

Seçim kısa zaman patojenin saf kültürü (pnömokok enfeksiyonunun teşhisi için);

Patojenin virülansının ve patojenitesinin belirlenmesi (tüberküloz tanısı için);

Toksinlerin türü ve tipinin belirlenmesi (botulizm teşhisinde)

Bulaşıcı hastalıkların teşhisinde çeşitli hayvanlar kullanılmaktadır. Seçimleri, türün çeşitli etiyolojik ajanlara duyarlılığına göre belirlenir. Örneğin fareler pnömokok enfeksiyonuna, şarbona ve tetanoza karşı duyarlıdır; kobaylar - tüberküloz, bruselloz, tularemi patojenlerine; tavşanlar - stafilokoklara, streptokoklara, botulizme. Çalışma için yalnızca belirli bir yaş ve vücut ağırlığına sahip sağlıklı hayvanlar seçilmiştir.

Malzemenin tanıtılmasından önce hayvanlar sabitlenir. Küçük hayvanlar deneyci tarafından tutulur, büyük hayvanlar için özel cihazlar kullanılır. Enfekte olmuş materyalin enjeksiyon bölgesi alkol veya iyot ile muamele edilir. İncelenen hastalığın patogenezine bağlı olarak, enfekte olmuş materyal deri altından, kutanöz olarak, intravenöz olarak, intraperitoneal olarak, intraserebral olarak vb.

Şu tarihte: kutanöz yöntem enfeksiyon, önce saç kesilir, cilt yaralanır ve ardından malzeme içine sürülür.

Deri altı yöntemi: Hayvanların derisi tercihen cımbızla bir kat halinde tutulur, iğne yarıya kadar batırılır, enjeksiyondan sonra alkollü pamuklu çubuk sürülerek iğne çıkarılır.

Kas içi yöntem: materyal arka ekstremitenin üst kısmındaki kas dokusuna enjekte edilir.

İntraperitoneal yöntem: Bağırsaklara zarar vermemek için hayvan baş aşağı tutulur. Enjeksiyon alt karın bölgesinde, orta hat tarafında yapılır. Karın duvarıŞırıngayı dik açıyla, sarsıntılı bir hareketle delin.

İntravenöz yöntem: Farelere ve sıçanlara materyal kuyruk damarına veya intrakardiyak olarak enjekte edilir. Tavşan, yüzeysel olarak yerleştirilmiş ve açıkça görülebilen kulak damarlarına enjekte edilir (dış damarı delmek daha iyidir). Enjeksiyondan sonra kanamayı önlemek için enjeksiyon yeri pamuk ve alkol ile klemplenir. İntrakardiyak enfeksiyonu olan kobaylara, kalbin "itme" yüksekliğinde interkostal boşluğa bir iğne enjekte edilir. İğne doğru şekilde takılırsa şırınganın içinde kan görünecektir.

Alet ve malzemelerin hazırlanması: şırıngalar, neşterler, iğneler kaynatılarak sterilize edilir. Şırınganın içine malzeme çekin (enjekte edilmesi gerekenden biraz daha fazla), dikey olarak yukarı doğru çevirin, iğneyi steril pamuk yünü ile örtün ve piston ile hava kabarcıklarını şırınganın dışına itin. Bu manipülasyon bir dezenfektan solüsyonu üzerinde gerçekleştirilir.

Bir toksinin (botulinum, şarbon) etkisinin neden olduğu enfeksiyonları teşhis ederken, muhtemelen patojen ve toksinleri içeren materyal fizyolojik bir çözeltiye yerleştirilir, ardından talk pudrası ile ovulmuş bir kağıt filtreden süzülür (toksini iyice emer) . Hassas hayvanlar, filtrelerden gelen yıkamalarla enfekte olur. Bazı durumlarda, hastalığın patogenezi patojenin kendisinin patojenik özelliklerinden kaynaklandığında, hayvanlara mikrobiyal bir süspansiyon bulaştırılır.

Enfekte beyaz fareler etiketlenir ve özel cam kavanozlara yerleştirilir; Üzerlerine enfeksiyon tarihini ve çalışmanın yapıldığı mikroorganizma türünü belirten bir etiket yapıştırılmıştır. Enfekte tavşanların veya kobayların bulunduğu kafesler de aynı şekilde etiketlenir. Hayvanlar izleniyor. Eğer ölürlerse hemen açılırlar.

Beyaz farelerin diseksiyonundan önce hayvanlar ilk olarak eter buharı ile öldürülür. Fareler kısa bir süre dezenfektan solüsyonuna daldırılıyor ve daha sonra göbekleri patilerinden yukarı bakacak şekilde bir küvete sabitleniyor. Dış patolojik değişikliklerin varlığı veya yokluğu not edilir. Pubis'ten uzunlamasına bir cilt kesisi yapılır. alt çene ve enine - uzuvlara doğru. Cilt dokusundaki değişiklikler ve lenf düğümlerinin durumu not edilir. İkincisi parmak izi lekeleri yapmak için kullanılır. Muayene için Göğüs boşluğu Her iki taraftaki kaburgaları makasla keserek göğüs kemiğini çıkarın. Dış muayene sonrasında kalpten parçalar kesilerek MPB'ye yerleştirilir. Kalp ve akciğerlerden alınan damga yaymaları doğrudan MPA'ya aşılanır.

Açılıyor karın boşluğu, harici muayene sonrasında durum not edilir iç organlar(boyut, renk, tutarlılık, pürülan odakların varlığı). Karaciğer, dalak ve smear kültürleri yapılır.

Çalışma steril aletlerle yapılıyor, her organ çıkarıldıktan sonra cımbız ve makas bir bardak alkole batırılıp yakılıyor.

Otopsinin ardından ceset ve otopsinin yapıldığı küvet bir gün boyunca dezenfektan solüsyonla dolduruluyor.

Mahsuller 24 saat (gerekirse veya daha fazla) süreyle inkübe edilir.

t 37 o C. Daha sonra incelenirler, patojenin saf kültürü izole edilir ve bakteriyolojik yöntem kullanılarak tanımlanması gerçekleştirilir.

Yöntemin avantajları: Elde edilen sonuçların güvenilirliği, karmaşık ekipmanlara gerek olmaması.

Kusurlar: yüksek maliyet, sınırlı kullanım, enfeksiyon riski.

İlgili bilgi.

Pratik ders No. 2.

Konu: Bulaşıcı hastalıkların teşhisinde bakteriyolojik yöntem.

Amaç: Saf bakteri kültürlerini izole etme yöntemlerini incelemek ve bulaşıcı hastalıkların teşhisi için bakteriyolojik yöntemde uzmanlaşmak.

Bireysel çalışma için sorular:

1. Bakteriyolojik araştırmalar için test materyalinin toplanması ve taşınmasına ilişkin kurallar.

2Bakteriyolojik inceleme için sevkin kaydedilmesine ilişkin kurallar.

3. Mikroorganizmaların saf kültürlerini izole etme yöntemleri.

4.Bakteriyolojik tanı yöntemi. Hedef. Aşamalar. Teşhis değeri.

Konuyla ilgili temel kavramlar.

Bakteriyolojik yöntem bulaşıcı hastalıkların teşhisinde ana yöntemdir. Özü, bulaşıcı ajanın tipini belirlemektir, bu nedenle bakteriyolojik yöntemin sonuçlarına göre etiyolojik (kesin) bir tanı yapılabilir. Yöntemin ana dezavantajı çalışmanın süresidir - 3 ila 5 gün ve bazı durumlarda daha fazla.

Bakteriyolojik yöntemin başarısı büyük ölçüde test materyalinin toplanması ve taşınmasını ve bakteriyoloji laboratuvarına sevkin kaydedilmesini içeren ön aşamaya bağlıdır. Bu durumda bir takım kurallara uymak gerekir.

Test materyalinin numunesi antibakteriyel tedavinin başlangıcından önce veya son dozdan 8-10 saat sonra yapılmalıdır. Numunenin çevresel mikroflora tarafından kontaminasyonunu önlemek için sıkı asepsi kurallarına uyulmalıdır. Bunu yapmak için steril malzeme kullanın: a) yaradan, mukoza zarlarından (gözler, yutak, burun) malzeme almak için pamuklu çubuklar; b) vajina ve anüsten materyal için bir tel halka; c) kan ve irin çekmek için bir şırınga; d) idrar, balgam ve dışkının doğrudan toplanması için steril kaplar. Ortaya çıkan malzemenin nakliyesi mümkün olduğu kadar hızlı (2-3 saat) özel kaplarda veya kasalarda gerçekleştirilmelidir. Sevk, eşlik eden bir belge olarak klinik numuneye eklenir. Mikrobiyolojik bir çalışma yürütmek için gerekli temel bilgileri içerir:

hastanın soyadı, adı, soyadı, yaşı; hastalığın varsayılan tanısı; önceki antimikrobiyal tedavi; malzemenin doğası; malzeme toplama tarihi ve saati; bu çalışmanın amacı; İsim tıbbi kurum, bölüm sayısı, koğuş; katılan doktorun imzası.

Bakteriyolojik yöntem iki aşamada gerçekleştirilir (Şekil 2.1.):

Saf patojen kültürünün izolasyonu); Saf kültürün tanımlanması (1-3 gün).

İlk aşamada, test materyali katı veya sıvı besin ortamına aşılanır, kültürel özellikler değerlendirilir, şüpheli koloniler seçilir ve agar slantlarında elenir. Tanımlama aşaması, izole edilmiş saf kültürün özellikleri ve yapısının zorunlu bir çalışmasının yanı sıra antibiyotik duyarlılığını, faj duyarlılığını, faj tiplemesini, patojenite çalışmasını ve kalıcı özellikleri belirlemek için ek çalışmaları içerir.

Öğrencilerin sınıftaki bağımsız çalışmaları.

İş 1

Amaç: Bakteriyolojik tanı yöntemine hakim olmak.

Görev. Bakteriyoloji laboratuvarı, "Gıda kaynaklı toksik enfeksiyon?" ön tanısı olan bir hastadan test materyali (dışkı) aldı. Materyalin mikroskopisinde gram pozitif koklar ve gram negatif çubuklar ortaya çıktı.

Mikroorganizmaların saf kültürlerini izole edin ve tanımlayın. Gıda zehirlenmesinin etiyolojisini belirleyin.

Metodoloji:

Bakteriyolojik yöntemin tüm aşamaları geleneksel olarak bir derste gerçekleştirilir: öğrenci bir sonraki aşamanın manipülasyonlarını gerçekleştirir, malzemeyi termostata götürür ve çalışmanın bir sonraki aşaması için bitmiş sonucu hemen alır.

1. Bireysel koloniler elde etmek için test materyalinin bir Petri kabındaki agar üzerine mekanik ayırma yöntemi kullanılarak aşılanması (1. gün).

Brülör alevinde sterilize edilen ve bir ilmek ile soğutulan ekim malzemesini alın ve kapağını hafifçe açarak bardağa ekleyin. Besleyici ortamın yüzeyinde malzeme bir ilmek halinde şu şekilde dağıtılır: bardağın kenarında, malzemenin önemli bir kısmının kaldığı sık vuruşlarla oval bir alan oluşturulur, ardından paralel vuruşlar çizilir. bardağın bir kenarından diğerine 0,5 cm mesafe. Ekim yaparken ilmek agarın çizilmemesi için paralel tutulmalıdır (Şekil 2.2.a). Elendikten sonra ilmek kaptan çıkarılır ve Petri kabı bir kapakla kapatılırken hemen ateşte yakılır. Bardak etiketlenir ve bir gün boyunca bir termostata baş aşağı yerleştirilir.

2. Yetiştirilen kolonilerin kültürel özelliklerinin incelenmesi (2. gün).

Bir gün sonra, uygun ekimle, son dokunuşlarda bireysel koloniler büyür (Şekil 2.2.b). Ayırt etmek farklı şekiller koloniler boyuta, renge (Şekil 2.3.a), şekle, şeffaflığa, yüzeyin yapısına (pürüzsüz, pürüzlü) ve kenara (pürüzsüz, pürüzlü) (Şekil 2.3.b) göre belirlenir. Kolonilerin bir kısmından bir smear hazırlanır, Gram ile boyanır ve mikroskop altında incelenir. İncelenmekte olan koloninin geri kalanı, saf bir kültür elde etmek için bir öze ile bir test tüpüne besleyici agar slatı üzerine elenir. Ekim bir gün boyunca termostata yerleştirilir.

3. İzole edilen saf kültürün tanımlanması (3. gün).

Bir gün sonra yetiştirilen saf kültür, ana tür özelliklerine göre tanımlanır. Morfoloji, saf bir kültürden alınan bir yaymanın mikroskopisi ile incelenir. Saf kültür, aktiviteyi incelemek için test sistemlerine (stafittest, enterotest) aşılanır. Bunu yapmak için, fizyolojik çözelti içinde 1 milyar bakteri süspansiyonu hazırlayın, ardından dozaj veya Pasteur pipetleri kullanarak test sisteminin kuyucuklarına süspansiyonun 0,1 ml'sini ekleyin. Tablet bir gün boyunca termostata yerleştirilir.

4. İzole edilen mikroorganizmaların tipinin belirlenmesi (4. gün).

24 saat sonra biyokimyasal aktivite sonuçları kuyucuktaki indikatörün rengindeki değişiklikle değerlendirilir ve test sisteminin tablolarıyla karşılaştırılır. İzole edilmiş saf kültürlerin özelliklerinin incelenmesinin sonuçlarına dayanarak, bakteriyolojik teşhis yönteminin nihai hedeflerinden biri olan mikroorganizma türleri belirlenir. Bergey determinantını kullanın.

Sonuç bir araştırma protokolü şeklinde belgelenir.

ÇALIŞMA PROTOKOLÜ.