“Antimikrobiyal ajanlara duyarlılığı belirleme yöntemleri” konusunun içindekiler tablosu. Yan etkiler antibiyotik tedavisi.":

Antimikrobiyal ajanlara duyarlılığı belirleme yöntemleri. Minimum inhibitör konsantrasyon (MIC). Sıvı ortamda seri seyreltme yöntemi.

Belirli bir ilacın aktivitesine ilişkin kriterler şunlardır: minimum inhibitör konsantrasyon (mikrofon) - test kültürünün büyümesini engelleyen ilacın en düşük konsantrasyonu ve minimum bakteri yok edici konsantrasyon (MBK) - bakterisidal etkiye neden olan ilacın en düşük konsantrasyonu.

Sıvı ortamda seri seyreltme yöntemi

Sıvı ortamda seri seyreltme yöntemi yüklemenizi sağlar minimum inhibitör konsantrasyon (mikrofon) Ve minimum bakteri yok edici konsantrasyon (MBK) izole edilmiş patojen için ilaç. Araştırma çeşitli hacimlerdeki besin ortamında (1-10 ml) yapılabilir. Patojenin beslenme ihtiyaçlarını karşılayan sıvı besin ortamı kullanın. Test tüplerinde (genellikle sekiz adet), besin ortamında ilacın bir dizi çift seyreltisi hazırlanır. Konsantrasyon buna göre 128'den 0,06 μg/ml'ye düşürülür (baz konsantrasyonu ilacın aktivitesine bağlı olarak değişebilir). Her tüpteki ortamın son hacmi 1 ml'dir. Temiz bir besin ortamı içeren bir test tüpü kontrol görevi görür. Her test tüpüne 106/ml mikrobiyal hücre içeren 0,05 ml fizyolojik çözelti eklenir. Tüpler 37 °C'de 10-18 saat süreyle (veya kontrol tüpünde bakteri üremesi görülene kadar) inkübe edilir. Belirtilen süreden sonra sonuçlar, ortamın optik yoğunluğundaki değişikliklerle görsel veya nefelometrik olarak dikkate alınır. Glikoz ve bir gösterge ile desteklenmiş bir ortam kullanılarak değiştirilmiş bir yöntem de kullanılabilir. Mikroorganizmaların büyümesine ortamın pH'ında ve buna bağlı olarak göstergenin renginde bir değişiklik eşlik eder.

Maddelerin adı	Eşik seviyesi (ng/ml)
Amfetamin grubu
Amfetamin
Metamfetamin
Metilendioksiamfetamin (MDA)
Diğer amfetamin grubu maddeler
Opiat grubu
Morfin
Kodein
6-monoasetilmorfin
Benzodiazepin grubu
Oksazepam
Diazepam
Nordiazepam
Midazolam
fenazepam
Diğer benzodiazepin maddeleri
Barbitürat grubu
Barbamil
Sodyum etaminal
Diğer grupların kimyasalları
11-nor-Δ9-tetrahidrokannabinolik asit (Δ9-tetrahidrokanabinolün ana metaboliti)
Kokain ve metabolitleri
Metadon ve metabolitleri
Propoksifen ve metabolitleri
Buprenorfin ve metabolitleri
d-Lisergid (LSD, LSD-25)
Fentanil ve metabolitleri
Metakualon
Fensiklidin

Sağlık Bakanlığı'nın emriyle onaylanan, sarhoşluk (alkol, narkotik veya diğer toksik) için tıbbi muayene yapılmasına ilişkin Prosedürün ek Tablo 2'si Rusya Federasyonu(taslak), “Narkotik ilaçların, psikotrop maddelerin, diğer kimyasalların ve bunların metabolitlerinin içeriğine ilişkin, doğrulayıcı analiz yöntemleriyle belirlenen eşik değerlerinin seviyeleri.”

Not: eşik seviyesiÇalışma sonucunun pozitif olduğu tespit edildiğinde, ön veya doğrulayıcı analiz yöntemleriyle belirlenen, biyolojik bir nesnedeki bir maddenin (metabolitinin) minimum konsantrasyonudur.

Aslında buna benzer bir tablo " Doğrulayıcı idrar tahlili yöntemleri için eşik seviyeleri" Devletin Analitik ve Adli Toksikoloji Dairesi Merkezi Kimyasal-Toksikoloji Laboratuvarında verilmektedir. Eğitim kurumu yüksek mesleki eğitim Birinci Moskova Devleti Medikal üniversite Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı'nın 30 Ağustos 2011 tarih ve 179-25/12I sayılı I.M. Sechenov (TsKhTL GOU VPO I.M. Sechenov adını taşıyan Birinci Moskova Devlet Tıp Üniversitesi) adını almıştır, ancak diğer şeylerin yanı sıra konsantrasyonlar da fenobarbital (1 "000 ng/ml), barbitüratlar (100 ng/ml) ve kotinin (100 ng/ml) grubundan diğer maddeler belirtilmiştir. Buna göre CCTL GOU VPO I.M. Sechenov'un adını taşıyan İlk Moskova Devlet Tıp Üniversitesi Rusya Federasyonu Sağlık ve Sosyal Kalkınma Bakanlığı'nın 27 Ocak 2006 tarih ve 40 sayılı emrinin 2. paragrafı uyarınca “Alkol, narkotik ilaçların varlığının analitik teşhisi sırasında kimyasal-toksikolojik çalışmaların organizasyonu hakkında, İnsan vücudundaki psikotropik ve diğer toksik maddeler”, insan vücudunda narkotik ilaçların, psikotropik ve diğer toksik maddelerin varlığının analitik teşhisi sırasında kimyasal-toksikolojik çalışmaların yapılmasına yönelik gereklilikleri geliştirdi ve onayladı.

Özellikle, bilgilendirme mektubunun 12. paragrafına göre, araç sürücülerinin tıbbi muayenesi yapılırken, öğrencilere test yapılırken, vatandaşlara başvururken kimyasal ve toksikolojik çalışmalar yapılırken ve kanunla belirlenen diğer durumlarda sıvı testi ağız boşluğu(tükürük) kabul edilemez, çünkü insan vücudunda narkotik ilaçların, psikotropik ve diğer toksik maddelerin varlığının güvenilir bir şekilde tespit edilmesine izin vermez. Kontrollü maddeler, tüketim anından itibaren birkaç saati aşmayan bir zaman aralığı içinde ağız sıvısında (tükürük) tespit edilebilir.

Ön kimyasal-toksikolojik çalışmalar yapılırken idrar örneklerinde narkotik ilaçları, psikotropik ve diğer toksik maddeleri (bunların metabolitlerini) tespit etmek için kullanılan teknik araçlara ilişkin gereklilikler (Metodolojik Öneriler Ek No. 1: Varlığını belirlemek için kimyasal-toksikolojik çalışmaların yürütülmesine ilişkin kurallar) genel eğitim kuruluşları ve mesleki eğitim kuruluşlarının yanı sıra yüksek öğrenim eğitim kuruluşlarındaki öğrenci topluluğunun; erken teşhis narkotik ilaçların ve psikotrop maddelerin, narkotik ilaçların, psikotrop ve diğer toksik maddelerin (onların metabolitleri) yasa dışı tüketimi / Geliştiren: Uzmanlar ve laboratuvar hizmetleri kuruluşları birliği "Laboratuvar Tıbbı Federasyonu", analitik ve adli tıp alanında baş serbest uzman tarafından düzenlenmiştir. Rusya Sağlık Bakanlığı toksikolojisi, Dr. h.n., profesör B.N. Izotov ve baş serbest klinik uzmanı laboratuvar teşhisi Rusya Sağlık Bakanlığı, Tıp Bilimleri Doktoru, Profesör A. G. Kochetov // Moskova, 2015)

Madde gruplarının adı	Konsantrasyon (ng/ml)
Opiatlar (6 monoasetilmorfin, morfin, kodein, desomorfin vb.)
Kanabinoidler
Fenilalkilaminler (amfetamin, metamfetamin, mefedron vb.)
Metadon
Benzodiazepinler
MDMA
Kokain
Barbitüratlar
Kotinin
Sentetik kanabinoidler
Katinonlar
Etil glukuronid

Doğrulayıcı kimyasal-toksikolojik çalışmalar yapılırken idrar örneklerinde narkotik ilaçları, psikotropik ve diğer toksik maddeleri (bunların metabolitlerini) tespit etmek için kullanılan teknik araçlara ilişkin gereklilikler (yukarıdaki kaynağa Ek No. 2)

Madde gruplarının adı	Konsantrasyon (ng/ml)
Amfetamin grubu
Amfetamin
Metamfetamin
Metilendioksiamfetamin (MDA)
Metilendioksimetamfetamin (MDMA)
Diğer amfetamin grubu maddeler
Opiat grubu
Morfin
Kodein
6-monoasetilmorfin
Diğer afyon maddeleri
Benzodiazepin grubu
Oksazepam
Diazepam
Nordiazepam
Midazolam
fenazepam
Diğer benzodiazepin maddeleri
Barbitürat grubu
Fenobarbital	1000
Barbamil
Sodyum etaminal
Barbitürat grubundan diğer maddeler
Diğer grupların maddeleri
11-nor-Δ9-tetrahidrokannabinolik asit (Δ9-tetrahidrokanabinolün ana metaboliti)
Benzoilekgonin (kokain metaboliti)
Metadon
Propoksifen
Buprenorfin
l.s.d.
Fentanil
Metakualon
Fensiklidin
Kotinin
Sentetik kanabinoidler
Katinonlar
Etil glukuronid

Aynı zamanda, Rusya Federasyonu İdari Suçlar Kanunu'nun 12.8 ve 12.27. Maddeleri 3. Maddeleri kapsamındaki idari suç durumlarında ve ayrıca sarhoşken araç kullanmanın cezai sorumluluğunu öngören durumlarda (Madde 264 ve 264.1) savunma sağlarken Rusya Federasyonu Ceza Kanunu), insan vücudundaki, kandaki ve idrardaki konsantrasyonlarına bakılmaksızın, insan vücudunda narkotik ilaçların veya psikotrop maddelerin bulunması durumunda idari sorumluluğun ortaya çıktığı unutulmamalıdır. .

Yukarıdakiler ışığında, uyuşturucu incelemeleri, kimyasal-toksikolojik çalışmalar, narkotik ilaçların adli kimyasal çalışmaları çerçevesinde kimlik tespiti uyuşturucu, psikotrop ve toksik maddeler ile deyim yerindeyse “kullanılan yöntemin tespit sınırı” düzeyinde bile sarhoşluğa neden olan maddeler sürücüyü cezbetme gerekçeleridir. araç Rusya Federasyonu İdari Suçlar Kanunu ve/veya Rusya Federasyonu Ceza Kanunu'nun ilgili maddeleri uyarınca idari veya cezai sorumluluk.

Bilgi için - " "

Rusya Sağlık Bakanlığı 1 "St. Petersburg Devlet Pediatrik Tıp Üniversitesi"

Alaka düzeyi

Oftalmolojik uygulamada, diğer antimikrobiyal tedavi vakalarında olduğu gibi, antibakteriyel bir ilacın seçimi öncelikle patojene ve onun antibiyotiklere duyarlılığına bağlıdır. Kullanılan antibakteriyel ilaç bakterisidal olmalı ve minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) düşük olmalıdır. Bu, mikroorganizmaların antibiyotiklere karşı direncinin sürekli arttığı modern koşullarda özellikle önemlidir. İlacın mikroorganizma üzerinde zararlı bir etkiye sahip olmayan dozlarda reçete edilmesi, mikroflora direncinin daha da gelişmesine katkıda bulunabilir.

MİK, çıplak gözle fark edilebilecek mikroflora büyümesinin baskılanmasına neden olan bir antibakteriyel ilacın en düşük konsantrasyonudur. Bir mikroorganizmanın antibiyotiğe duyarlılık derecesini en doğru şekilde karakterize etmenizi sağlayan MIC'dir. İlacın MIC değeri ne kadar düşük olursa, mikrofloranın buna duyarlılığı da o kadar yüksek olur. Yalnızca MIC bilgisi şu soruyu çözmemize izin verir: Antibiyotik, topikal olarak uygulandığında, patojenin lokalizasyon bölgelerine bu mikroorganizmayı baskılamaya yetecek bir konsantrasyonda ulaşır mı? Oftalmoloji pratiğinde en yaygın olarak kullanılan antibakteriyel ilaçların (florokinolonlar ve aminoglikozidler) doza bağımlı ilaçlar olduğu da unutulmamalıdır; Mikroorganizmaların ölüm hızı, konsantrasyonlarıyla doğru orantılı olarak artar. İÇİNDE Bilimsel edebiyat Levofloksasin ile karşılaştırıldığında gözün ön odasının aköz mizahında ofloksasinin MİK'inin daha yavaş elde edildiğine dair kanıtlar vardır. Ayrıca tek bir levofloksasin damlatılmasından sonra konsantrasyonunun, neden olan tüm mikroorganizmalar için MIC'den birçok kez daha yüksek olduğu kanıtlanmıştır. bulaşıcı hastalıklar göz. Bununla birlikte, yeni antibakteriyel ilaçlar sürekli olarak klinik uygulamaya girmektedir ve mevcut literatürde MIC hakkında pratik olarak hiçbir bilgi bulunmamaktadır. mevcut spektrumun tamamının antimikrobiyal etkinliği hakkında modern antibiyotikler oftalmolojide kullanılması çalışmamızın nedeniydi.

Hedef

En yaygın mikroflora için modern antibiyotiklerin MİK değerini belirleyin.

araç ve yöntemler

Antibiyotiklerin MİK'ini belirlemek için Hi Comb MIC Testini kullandık ( kayıt belgesi Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı 23 Aralık 2003 tarih ve 2003/1664). Test, bir değil, aynı antibiyotiğin bir dizi azalan konsantrasyonuna batırılmış disklerin bağlı olduğu şeritlerden oluşur. Çalışmayı yaparken öncelikle konjonktival boşluğun içeriğini sade agar üzerine aşılama için aldık. Daha sonra, mikroorganizmanın saf bir kültürü izole edildi ve çim şeklindeki bir Petri kabındaki uygun bir katı besin ortamına ekildi. Daha sonra Petri kapları 37° sıcaklıktaki termostatta 24 saat inkübe edildi. Aynı zamanda test şeritlerinin etrafında elips şeklinde bir mikroflora tutma bölgesi oluşturularak antibakteriyel ilacın MİK'inin belirlenmesi mümkün oldu. MIC, mikroflora büyümesinin engellenmesinin elipsoidal bölgesinin minimum çapı alanında bir test şeridi üzerinde dijital bir ölçek kullanılarak belirlendi. En yaygın IPC'leri belirledik klinik uygulama antibakteriyel ilaçlar - siprofloksasin (Tsipromed, Sentiss), ofloksasin (Floxal, Baush & Lomb), levofloksasin (Signitsef, Sentiss), moksifloksasin (Vigamox, Alcon), gatifloksasin (Zymar, Allergan) ve tobramisin (Tobrex, Alcon).

sonuçlar

Yaşı 2 aydan büyük toplam 105 hasta muayene edildi. gözün ön kısmındaki çeşitli inflamatuar hastalıklarla 7 yıla kadar: akut ve kronik konjonktivit, blefarokonjonktivit, nazolakrimal kanalın stenozu, kronik dakriyosistit ile komplike olan bakteriyel keratit. Çocukların konjonktiva boşluğundan gelen akıntı kültürlerinde epidermal (%43,9) ve Staphylococcus aureus (%22,9), streptokok (%15,1) ve gram negatif mikroflora (%18,1) bulundu.

Test edilen tüm antibakteriyel ilaçlar arasında Staphylococcus epidermidis'in MİK'inin en yüksek olduğu ortaya çıktı. Staphylococcus epidermidis için en düşük MIC, sırasıyla 0,544 ve 0,551 mcg ile levofloksasin ve moksifloksasin ilaçlarında bulundu. Tobramisin için maksimum MİK'i (8,623 μg) kaydettik, yani. bu ilaç Staphylococcus epidermidis'e karşı en az etkiliydi. Gatifloksasinin klinik uygulamada nispeten yakın zamanda kullanılmasına rağmen MİK'i oldukça yüksekti - 1.555 mcg. Siprofloksasin ve ofloksasinin MİK değeri sırasıyla 1,023 ve 1,191 µg gibi küçüktü.

Staphylococcus aureus'a yönelik tüm antibakteriyel ilaçların MİK'si epidermal ilaçlara göre daha düşüktü. Aynı zamanda en düşük MİK levofloksasin (0,020 μg) içindi; Staphylococcus aureus'un neden olduğu enfeksiyonların tedavisinde bu ilacın en etkili olduğu kanıtlanmıştır. Moksifloksasin (0,202 μg) ve ofloksasinin (0,240 μg) MİK'si de küçüktü ancak levofloksasinin MİK'inden 10 kat daha yüksekti. En yüksek MİK'i tobramisin ilacı için (5.115 μg) kaydettik.

Aşağıdaki streptokoklar çocukların konjunktival boşluğundan izole edildi: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans ve Streptococcus haemolyticus. Çocuklardan izole edilen tüm streptokoklar için en düşük MIC'nin moksifloksasin olduğu bulundu - yalnızca 0,006 mcg. Levofloksasinin MIC'si de küçüktü, ancak moksifloksasinin MIC'si - 0.135 μg'yi önemli ölçüde aştı. En yüksek MİK siprofloksasin (1.246 μg) için, en yüksek MİK ise tobramisin (6.460 μg) için kaydedildi.

Çocuklardan izole edilen gram-negatif mikroorganizma grubu Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter brevis, Klebsiella pneumoniae ve Serratia marcencens'i içeriyordu. Gram-negatif mikroflora için en düşük MİK, 0,034 mcg ile siprofloksasinde bulundu. Düşük MIC değerleri, yani. levofloksasin için de kaydedilen yüksek verimlilik - 0,051 mcg. Ofloksasin ve gatifloksasinin MİK'i önemli ölçüde daha büyüktü ve neredeyse aynıydı - 0,096 ve 0,102 μg. En yüksek MİK yine tobramisin için kaydedildi (7.050 µg).(Bkz. Şekil)

Çözüm

Böylece levofloksasinin çocuklarda en sık izole edilen mikrofloraya karşı en etkili antibakteriyel ilaç olduğu ortaya çıktı. Bu ilacın streptokok ve gram-negatif mikroorganizmalar için MIC'sinin de küçük olduğu ortaya çıktı, bu da hepsinin tedavisi için% 0,5 levofloksasin Signicef ​​​​bazlı bir ilaç önermemizi sağlıyor. inflamatuar hastalıklar bakteriyel doğanın gözü.

Streptokokların neden olduğu inflamatuar göz hastalıklarının tedavisi için moksifloksasin tercih edilir, çünkü streptokoklar için MIC'si en küçük olduğu ortaya çıktı. Tüm gram-negatif mikroflora için siprofloksasinin MIC'si en düşüktü ve bu, bu ilacın genel olarak kabul edilen yüksek etkinliğini doğruluyor. Tobramisin izole edilen tüm mikroorganizmalar arasında en yüksek MIC'ye sahipti.

Kaynak sayfası: 26

İlacın antimikrobiyal aktivitesi için kriterler şunlardır: minimum inhibitör konsantrasyon(IPC) ve minimum bakteri yok edici konsantrasyon(MBK). MIC, in vitro olarak tamamen inhibe eden en düşük antibiyotik konsantrasyonudur. görünür Bakteriyel büyüme. mg/l veya μg/ml cinsinden ifade edilir. MBC, bakterisidal etkiye neden olan bir antibiyotiğin en düşük konsantrasyonudur. Bunu belirlemek için test tüplerini (görsel olarak büyüme yoktur) antibiyotik içermeyen yoğun besinli agar üzerine tohumlamak gerekir. Bu göstergenin büyük bir değeri var klinik önemi. Seri seyreltme yöntemine dayanarak, daha küçük hacimde besin ortamının kullanılmasını içeren mikro yöntemler oluşturulmuştur. Şu anda, bu tür araştırmaları yürütmek için, test mikrobunun bir süspansiyonu ile seyreltilmiş, kurutulmuş stabilize edilmiş antibiyotik seyreltmelerinden oluşan çok sayıda ticari kit üretilmektedir. Bu kitler normal koşullar altında saklanabilir ve laboratuvarda besiyeri ve antibiyotik seyreltileri hazırlama ihtiyacını ortadan kaldırır. Mikrodilüsyon testleri aynı zamanda otomatik bir sisteme dahil edilme avantajına da sahiptir.

Elde edilen verilere (büyüme inhibisyon bölgesinin çapı veya MIC değeri) dayanarak mikroorganizmalar hassas, orta derecede dirençli ve dirençli olarak ayrılır. Bu kategorileri birbirinden ayırmak için, sabit değerler olmayan sınırda antibiyotik konsantrasyonları kullanılır. Mikrobiyal popülasyonun duyarlılığı değiştikçe revize edilirler. Yorumlama kriterlerinin geliştirilmesi ve revizyonu, özel komitelerin üyesi olan önde gelen uzmanlar (kemoterapistler, mikrobiyologlar) tarafından yürütülmektedir. Bunlardan biri Ulusal Klinik Laboratuvar Standartları Komitesidir ( N ulusal C için komite Cçizgisel L laboratuvar S ABD'de düzenlenen standartlar - NCCLS). Şu anda NCCLS standartları, çok merkezli mikrobiyolojik ve laboratuvar testlerinde bakterilerin duyarlılığının belirlenmesi sonuçlarını değerlendirmek için uluslararası standartlar olarak kullanılmaktadır. klinik çalışmalar.

Bakterilerin antibiyotiklere duyarlılığının belirlenmesi

Mikroorganizmaların antibiyotiklere duyarlılığının kriteri, standart deney koşulları altında patojenin büyümesini engelleyen antibiyotiğin minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) veya minimum inhibitör konsantrasyonudur (MIC).

Belirlemek için İlaç direnci Hastanın vücudundan izole edilen patojenin günlük saf kültürünü ve onu aşılamak için standart bir besin ortamını (AGV veya Mueller-Hinton agar) kullanırlar.

Mikroorganizmaların antibiyotiklere duyarlılığının belirlenmesi, disk difüzyon yöntemi veya antibiyotiğin sıvı veya katı ortamda seri seyreltme yöntemi kullanılarak gerçekleştirilir.

Disk difüzyon yöntemi

Kağıt disk yöntemi kullanılarak antibiyotiklere duyarlılığın belirlenmesi, antibiyotiğin besin ortamına difüzyonuna dayanır. Disklerdeki antibiyotik konsantrasyonu, standart test mikroorganizmalarının büyüme inhibisyon bölgelerinin çapları uluslararası standartları karşılayacak şekilde seçilir. Bu konsantrasyon, standart mikroorganizma türleri için ortalama terapötik doza karşılık gelir.

Hazırlanan mikroorganizma süspansiyonu, Petri kaplarındaki özel bir besiyerinin (AGV veya Mueller-Hinton agar) yüzeyine aşılanır. Daha sonra, steril cımbız kullanılarak, çeşitli antibiyotik çözeltilerine batırılmış standart kağıt diskler, aşılanmış yüzeye birbirinden, kabın kenarlarından ve ortasından eşit uzaklıkta yerleştirilir (özel cihazlar ve dağıtıcılar da kullanılabilir). Aşılanan kaplar, incelenen bakterilerin büyümesi için en uygun sıcaklıkta bir termostatta tutulur. Bakteriler bu antibiyotiğe duyarlıysa disk çevresinde bir büyüme inhibisyonu bölgesi oluşacaktır. Büyüme inhibisyon bölgesinin çapı, incelenen mikroorganizmanın belirli bir antibiyotiğe duyarlılık derecesine karşılık gelir. Nihai sonuç, hassas, dayanıklı ve orta derecede dirençli standart mahsullerin büyüme engelleme bölgelerinin çaplarını gösteren özel tablolar kullanılarak değerlendirilir.

Disk yöntemi, mikroorganizmaların agara zayıf şekilde yayılan polipeptit antibiyotiklere (örneğin polimiksin, ristomisin) duyarlılığını belirlerken güvenilir veriler sağlamaz. Ayrıca bu yöntem, antibiyotiğin minimum inhibitör konsantrasyonunun belirlenmesine izin vermez.

İlacın antimikrobiyal aktivitesi için kriterler şunlardır: minimum inhibitör konsantrasyon(MIC) ve minimum bakteri yok edici konsantrasyon(MBK). MIC, in vitro olarak tamamen inhibe eden en düşük antibiyotik konsantrasyonudur. görünür Bakteriyel büyüme. mg/l veya μg/ml cinsinden ifade edilir. MBC, bakterisidal etkiye neden olan bir antibiyotiğin en düşük konsantrasyonudur. Bunu belirlemek için görsel olarak üreme olmayan test tüplerinin antibiyotik içermeyen yoğun besinli agar üzerine aşılanması gerekir. Bu gösterge büyük klinik öneme sahiptir. Seri seyreltme yöntemine dayanarak, daha küçük hacimde besin ortamının kullanılmasını içeren mikro yöntemler oluşturulmuştur. Şu anda, bu tür araştırmaları yürütmek için, bir test mikrobu süspansiyonu ile seyreltilmiş, besin ortamında kurutulmuş, stabilize edilmiş antibiyotik seyreltmelerinden oluşan çok sayıda ticari kit üretilmektedir. Bu kitler normal koşullar altında saklanabilir ve laboratuvarda besiyeri ve antibiyotik seyreltileri hazırlama ihtiyacını ortadan kaldırır. Mikrodilüsyon testleri aynı zamanda otomatik bir sisteme dahil edilme avantajına da sahiptir.

Elde edilen verilere (büyüme inhibisyon bölgesinin çapı veya MIC değeri) dayanarak mikroorganizmalar hassas, orta derecede dirençli ve dirençli olarak ayrılır. Bu kategorileri birbirinden ayırmak için, sabit değerler olmayan sınırda antibiyotik konsantrasyonları kullanılır. Mikrobiyal popülasyonun duyarlılığı değiştikçe revize edilirler. Yorumlama kriterlerinin geliştirilmesi ve revizyonu, özel komitelerin üyesi olan önde gelen uzmanlar (kemoterapistler, mikrobiyologlar) tarafından yürütülmektedir. Bunlardan biri Ulusal Klinik Laboratuvar Standartları Komitesidir ( N ulusal C için komite Cçizgisel L laboratuvar S ABD'de düzenlenen standartlar - NCCLS). Şu anda NCCLS standartları, çok merkezli mikrobiyolojik ve klinik çalışmalarda bakteriyel duyarlılık testi sonuçlarının değerlendirilmesinde uluslararası standart olarak kullanılmaktadır.

Bakterilerin antibiyotiklere duyarlılığının belirlenmesi. Mikroorganizmaların antibiyotiklere duyarlılığının kriteri, standart deney koşulları altında patojenin büyümesini geciktiren antibiyotiğin minimum inhibitör konsantrasyonudur (MIC).

İlaç direncini belirlemek için, hastanın vücudundan izole edilen patojenin günlük saf kültürü ve bunu aşılamak için standart bir besin ortamı (AGV veya Mueller-Hinton agar) kullanılır.

Mikroorganizmaların antibiyotiklere duyarlılığının belirlenmesi, disk difüzyon yöntemi veya antibiyotiğin sıvı veya katı ortamda seri seyreltme yöntemi kullanılarak gerçekleştirilir.

Disk difüzyon yöntemi. Kağıt disk yöntemi kullanılarak antibiyotiklere duyarlılığın belirlenmesi, antibiyotiğin besin ortamına difüzyonuna dayanır. Disklerdeki antibiyotik konsantrasyonu, standart test mikroorganizmalarının büyüme inhibisyon bölgelerinin çapları uluslararası standartları karşılayacak şekilde seçilir. Bu konsantrasyon, standart mikroorganizma türleri için ortalama terapötik doza karşılık gelir.

Hazırlanan mikroorganizma süspansiyonu, Petri kaplarındaki özel bir besiyerinin (AGV veya Mueller-Hinton agar) yüzeyine aşılanır. Daha sonra, steril cımbız kullanılarak, çeşitli antibiyotik çözeltilerine batırılmış standart kağıt diskler, aşılanmış yüzeye birbirinden, kabın kenarlarından ve ortasından eşit uzaklıkta yerleştirilir (özel cihazlar ve dağıtıcılar da kullanılabilir). Aşılanan kaplar, incelenen bakterilerin büyümesi için en uygun sıcaklıkta bir termostatta tutulur. Bakteriler bu antibiyotiğe duyarlıysa disk çevresinde bir büyüme inhibisyonu bölgesi oluşacaktır. Büyüme inhibisyon bölgesinin çapı, incelenen mikroorganizmanın belirli bir antibiyotiğe duyarlılık derecesine karşılık gelir. Nihai sonuç, hassas, dayanıklı ve orta derecede dirençli standart mahsullerin büyüme engelleme bölgelerinin çaplarını gösteren özel tablolar kullanılarak değerlendirilir.

Disk yöntemi, mikroorganizmaların agara zayıf şekilde yayılan polipeptit antibiyotiklere (örneğin polimiksin, ristomisin) duyarlılığını belirlerken güvenilir veriler sağlamaz. Ayrıca bu yöntem, antibiyotiğin minimum inhibitör konsantrasyonunun belirlenmesine izin vermez.

Seri seyreltme yöntemi. Bu yöntem, test bakteri kültürünün (MIC, MIC) büyümesini engelleyen antibiyotiğin minimum konsantrasyonunu belirler. Bunu yapmak için öncelikle özel bir solvent veya tampon solüsyonunda belirli bir konsantrasyonda antibiyotik (μg/ml veya birim/ml) içeren bir stok solüsyon hazırlayın. Daha sonra, et suyundaki (1 ml'lik bir hacimde) sonraki tüm seyreltmeler, ana çözeltiden hazırlanır, ardından her seyreltmeye, 1 ml'de 106-107 bakteri hücresi içeren 0,1 ml test bakterisi süspansiyonu eklenir. Son test tüpüne 1 ml et suyu (antibiyotiksiz) ve 0,1 ml bakteri süspansiyonu (kültür kontrolü) ekleyin. Mahsuller 37 0 C'de inkübe edilir. ertesi gün, bundan sonra besin ortamının bulanıklığına ilişkin deneyin sonuçları kontrolle karşılaştırılarak not edilir. Şeffaf besin ortamına sahip son test tüpü, içinde bulunan antibiyotiğin minimum inhibitör (inhibitör) konsantrasyonunun (MIC, MIC) etkisi altında, incelenen bakteri kültürünün büyümesinde bir gecikme olduğunu gösterir. Minimum bakteri öldürücü konsantrasyonu (MBC) değerlendirmek için, üreme olmayan test tüplerinden antibiyotik içermeyen katı bir besin ortamına tohumlama yapılır. MBC, besin ortamına sahip Petri kaplarında büyümenin olmaması ile karakterize edilen, mikroorganizmanın ölümüne neden olan minimum antibiyotik konsantrasyonu olarak alınır.

Agar ortamında antibiyotiğin seri seyreltilmesi yöntemi. Bu durumda farklı konsantrasyonlara olan duyarlılığın tek bir deneyde test edilmesi mümkündür. bu antibiyotiğinçeşitli mikroorganizma kültürleri. Steril bir agar ortamında antibiyotiğin çeşitli seyreltileri hazırlanır. Bunu yapmak için gerekli miktarda başlangıç ​​antibiyotik çözeltisini ekleyin, iyice karıştırın ve steril Petri kaplarına dökün. Agar sertleştikten sonra kabın tabanı bir kalemle dışarıdan sektörlere bölünür. İncelenmekte olan her kültür, bakteriyolojik bir döngü kullanılarak farklı antibiyotik konsantrasyonlarına sahip tabaklardaki belirli bir sektöre ekilir. İncelenen kültürlerin farklı antibiyotik konsantrasyonlarına sahip kaplara ekimi, tabak başına 12-15 kültürü aynı anda aşılamanıza olanak tanıyan bir aplikatör kullanılarak yapılabilir. Daha sonra tabaklar, incelenen bakterilerin büyümesi ve gelişmesi için en uygun sıcaklıktaki bir termostata yerleştirilir. Sonuçlar, kontrol plakasındaki ortamdaki büyümeye kıyasla bakteriyel büyümenin varlığı veya yokluğuna göre dikkate alınır. Bakteriler, büyümelerinin tamamen engellendiği bir konsantrasyonda antibiyotiğe duyarlı kabul edilir.

E-sınav yöntemi. Bu yöntem seri seyreltme yönteminin ve disk yönteminin avantajlarını birleştirir. Diskler yerine, antibiyotik emdirilmiş filtre kağıdı şeritleri (“cetveller”) kullanılır ve şeridin tabanında antibiyotik konsantrasyonu minimum düzeyde ve “üstte” maksimum olacaktır. Şeritler, incelenen kültürle tohumlanan besin agarının yüzeyine yerleştirilir. Bakteriler bu ilacın etkisine duyarlıysa, şeridin inhibitör konsantrasyonlarını içeren alanları çevresinde elipsoidal bir büyüme inhibisyonu bölgesi belirir. Sayısal değer bu bölgenin tabanındaki antibiyotik konsantrasyonu, belirli bir ürün için o antibiyotiğin MİK değerini gösterir.

İLE hassas Bunlar, normal dozda antibiyotik kullanıldığında hastanın kan serumunda bulunan ilacın konsantrasyonlarında büyümesi engellenen mikroorganizma türlerini içerir.

İLE orta derecede kararlı Bunlar, büyümenin engellenmesi için ilacın maksimum dozlarının uygulanması üzerine kan serumunda oluşturulan konsantrasyonları gerektiren suşları içerir.

Sürdürülebilirİzin verilen maksimum dozlar kullanıldığında vücutta oluşturulan konsantrasyonlarda büyümesi ilaç tarafından baskılanmayan mikroorganizmalardır.

Kontrol soruları.

“Antibiyotik” terimini tanımlayın. Hazırlama yöntemine bağlı olarak ana antibiyotik grupları: doğal, yarı sentetik, sentetik. Kemoterapi teorisini geliştiren bilim adamının adı. Kemoterapi ilacı seçerken hangi özellikler belirleyicidir? Kemoterapi indeksi nedir, formülünü yazın, ne olmalı? İlk antispirochetal ilaçları belirtin; ilk antibakteriyel ilaç ve onu alan bilim adamının adı. Yeşil küfün antibakteriyel özelliğini ilk keşfeden Rus bilim adamlarının isimleri nelerdir? Penicillium küfünün antibakteriyel özelliklerini araştıran ve penisilini izole etme girişiminde bulunan bilim adamının adı. İlk önce penisilin preparatlarını alan bilim adamları. Antibiyotik üreticileri - örnekler verin. Antibiyotiklerin kökenlerine göre sınıflandırılması, kimyasal bileşim Eylem spektrumuna göre. Antibiyotiklerin etki mekanizması: hedefler (antibiyotiklerin uygulama noktaları) çeşitli gruplar). Eylem türleri - bakteri yok edici ve bakteriyostatik; in vitro deneyde bunları nasıl belirleyebilirim? Antiviral antibiyotikler, etki mekanizmaları. Antibiyotiklerin aktivitesi hangi birimlerde ölçülür? Antibiyotiklerin saklama koşulları.

Mümkün olanı adlandırın ve açıklayın yan etkiler antibiyotik tedavisi ile. “Mikropların ilaca direnci” kavramını tanımlar. İlaç direnci türleri. Doğal ve edinilmiş (birincil ve ikincil). İlaç direncinin genetik mekanizmaları: kromozomal ve plazmid. İlaç direncinin fenotipik mekanizmaları - isimlendirme ve karakterize etme. Antibiyotiklerin akılcı kullanımı - yöntemleri adlandırın. Antibiyotikleri yok eden enzimlerin inhibitörleri olan ilaçları adlandırın. Mikropların antibiyotiklere duyarlılığını belirleme yöntemlerini açıklar.